混合抗球蛋白反應試驗與宮腔內人工授精妊娠率關系的研究

史鴻志，李麗瑋，殷秀榮，董麗霞，李偉偉，劉佳佳，宋琪

(秦皇島市婦幼保健院生殖醫學科，秦皇島　066000)

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混合抗球蛋白反應試驗與宮腔內人工授精妊娠率關系的研究

史鴻志*，李麗瑋，殷秀榮，董麗霞，李偉偉，劉佳佳，宋琪

(秦皇島市婦幼保健院生殖醫學科，秦皇島066000)

【摘要】目的探討精子混合抗球蛋白反應(MAR)檢測在宮腔內人工授精(IUI)治療中的意義。方法在進行IUI治療之前常規進行MAR檢測，根據MAR檢測結果分為兩組，<10%組和10%～50%組。比較兩組間的精子濃度、前向運動精子數、精子正常形態率、臨床妊娠率等方面有無顯著性差異。結果兩組間精子濃度、前向運動精子數、精子正常形態率、臨床妊娠率等比較均無顯著性差異(P>0.05)。結論當精子MAR檢測結果<50%時，患者采用IUI治療是有效的，MAR檢測結果并不影響IUI治療的有效性。

【關鍵詞】混合抗球蛋白反應試驗；抗精子抗體；人工授精

目前，精子膜表面抗體對輔助生殖技術的影響還存在爭議，本文以宮腔內人工授精(IUI)技術為切入點，分析在進行IUI治療中混合抗球蛋白反應(MAR)檢測結果與周期妊娠率的關系，探討MAR檢測在IUI治療中的預測價值。

一、資料與方法

1. 研究對象及分組：選擇2013年3月至2014年12月期間在我院生殖醫學科接受IUI治療的不孕癥患者195例，IUI適應癥嚴格遵守輔助生殖技術規范的要求，在治療前常規進行MAR檢測，根據MAR的檢測結果進行分組。本研究經醫院倫理委員會審查批準，所有患者均知情同意。

2. 研究方法：(1)IUI前的準備：陰道超聲檢查卵泡直徑達到18～20 mm，或監測到尿LH值>45 U/L時，肌肉注射絨毛膜促性腺激素(HCG，珠海麗珠)5 000～10 000 U。男方禁欲2～7 d，手淫法采集精液至無菌取精杯中，置于熱板上待其液化。精液處理采用密度梯度離心法，具體方法為在15 ml錐形離心管的底部加入1 ml 80%濃度梯度液(Quinn’s，美國)，上層緩緩加入1 ml 40%濃度梯度液，再將液化的精液緩緩加在最上層，以100 r/min離心20 min；棄上層液體，將沉淀物吸入含3 ml精子沖洗培養基(Quinn’s，美國)的離心管中混勻，再次以400 r/min離心5 min；棄上清液，加入新鮮培養液至0.5 ml，將沉淀混勻制成精子懸液，將此混懸液用于人工授精。(2)妊娠診斷：術后2周查血β-HCG水平，4周后經陰道B超檢查顯示宮內孕囊者，確定為臨床妊娠。(3)MAR檢測及分組：按照MAR試劑盒(深圳華康)的檢測步驟進行，并按照世界衛生組織(WHO)男科實驗室手冊(第5版)標準進行質量控制，以確保檢驗結果的準確性及可重復性。先用微量移液器加5 μl致敏微球于載玻片上，然后加5 μl液化后的精液標本，用吸頭充分混勻，再加入5 μl抗體，用吸頭充分混勻，蓋上蓋玻片，3 min后觀察。當精液中無抗精子抗體存在時，精子可自由游動，而致敏微球凝聚成團，說明試劑本身是可靠的；當精液中存在抗精子抗體時，致敏微球會成團附著在精子表面，計數200條以上活動精子，記錄附著致敏微球的活動精子百分率，尾尖結合的不記錄。

根據MAR檢測結果將IUI周期分成2個組：<10%組和10%～50%組。分別比較兩組間男方精子濃度、活力、形態，以及周期妊娠率的差異。由于MAR>50%的患者較少，而且MAR>50%的患者都經過了臨床治療，故沒有直接進入周期，所以暫時缺少這方面的數據。

3. 統計學分析：采用SPSS 13.0統計學軟件對資料進行分析，計量資料組間比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

二、結果

1. 兩組患者一般情況比較：本研究中，MAR<10%組女方平均年齡(29.5±3.5)歲，不育年限(3.9±2.7)年；MAR 10%～50%組女方平均年齡(30.3±3.2)歲，不育年限(4.1±2.8)年，組間比較無顯著性差異(P>0.05)。

2. 兩組男性精液參數比較：MAR<10%和10%～50%兩組男方的精子濃度、前向運動精子率、正常形態百分率比較，無顯著性差異(P>0.05)(表1)。

表1　兩組間男方精液參數的比較 (x-±s)

3. 兩組患者周期妊娠率的比較：共317個周期，獲得妊娠45個周期，周期妊娠率14.2%。MAR<10%組266個周期，妊娠38個周期，周期妊娠率14.3%；MAR 10%～50%組51個周期，妊娠7個周期，周期妊娠率13.7%，組間妊娠率比較無顯著性差異(P>0.05)(表2)。

表2　兩組間周期妊娠率的比較 (n，%)

三、討論

抗精子抗體(AsAb)是免疫性不育的重要病因之一，其可存在于人類血液及生殖系統中，通常是由于各種機制導致血-睪屏障破壞，使得精子免疫性抗原暴露于免疫系統中，最終誘發免疫反應而產生[1]。AsAb可能通過直接阻礙精子運動和精-卵結合，甚至可能干擾胚胎著床過程，最終對生育造成不良影響[2]。WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊(第5版)推薦了兩種檢測精子包被抗體的方法，分別為混合抗球蛋白反應(MAR)試驗和直接免疫珠(IB)試驗，其中IB法采用洗滌過的精子進行試驗，需要耗費更多的時間，而MAR試驗則采用新鮮精液標本，是一項廉價、快速且敏感的篩查試驗[3]，因此被廣泛開展。

目前，關于精子膜表面抗體對輔助生殖技術影響的研究較少，并且結論也并不一致，如van Weert等[4]研究表明，精液AsAb陽性(臨界值20%)對體外受精受精率及妊娠情況均產生負面影響。而Vujisic等[5]的研究顯示精子膜表面抗體凝集>20%和<20%的分組比較，受精率分別為73.2% vs. 71.5%，妊娠率為28.9% vs. 28.57%，組間比較無顯著性差異，提示膜表面抗體可能并不影響精卵的結合。Zini等[6]也報道，精液AsAb陽性組(MAR>50%)與陰性組間的IVF受精率、臨床妊娠率比較均無顯著性差異。

本研究結果顯示雖然MAR檢測結果不同，但兩組間的精子濃度、前向運動精子百分率、精子正常形態率、臨床妊娠率等比較均無顯著性差異，與孫源等[7]的研究結果相似。雖然有學者發現隨著MAR檢測結果的升高，精子的活動率、前向運動和精子正常形態率都會隨之下降[8]，但本研究發現兩組間精子參數比較沒有顯著性差異，這可能是由于行IUI治療的男性群體多為輕、中度少和(或)弱精子癥患者，與普通人群的分布不同所致。精子經過優選處理后[9-10]，精子參數之間的差異可能被進一步縮小；此外，梯度離心的過程中去除了大部分粘著精子頭部的抗體復合物[11]，可能都是兩組間妊娠率沒有顯著性差異的主要原因。

綜上所述，本研究表明，MAR<10%和10%～50%兩組行IUI治療時周期妊娠率比較沒有顯著性差異，提示當MAR<50%時，患者采用IUI治療是有效的，但是，由于缺乏MAR>50%的數據資料，MAR>50%對周期妊娠率是否存在影響還不好做出判斷。

【參考文獻】

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[3]谷翊群，陳振文，盧文紅，等(譯).世界衛生組織人類精液檢查與處理實驗室手冊[M].第5版.北京：人民衛生出版社，2011：91-94.

[4]van Weert JM，Repping S，van der Steeg JW，et al. A prediction model for ongoing pregnancy after in vitro fertilization in couples with male subfertility [J]. Reprod Med，2008，53：250-256.

[5]Vujisic S，LepejSZ，JerkovicL，et al. Anti-sperm antibodies in semen，sera and follicular fluids of infertile patients：relation to reproductive outcome after in vitro fertilition [J]. Am J Reprod immunol，2005，54：13-20.

[6]Zini A，Lefebvre J，Kornitzer G，et al. Anti-sperm antibody levels are not related to feitilization or pregnancy rates after IVF or IVF/ICSI [J]. Am J Reprod Immunol，2011，88：80-84.

[7]孫源，劉見橋，杜紅姿，等.混合抗球蛋白反應試驗與體外受精-胚胎移植治療關系的研究 [J].生殖與避孕，2012，32：171-174.

[8]黃婷婷，周志健，王維，等.精子抗體對精液參數的影響 [J].現代醫院，2010，2：37-38.

[9]曾勇，宋成，張微.人類精液收集與處理技術改進 [J].生殖醫學雜志，2011，20：104-107.

[10]李志凌，謝文燕.輔助生殖技術中的精液優選處理 [J].生殖醫學雜志，2007，16：209-212.

[11]胡京美，顏軍昊，李媛，等.混勻上游法人工授精治療抗精子抗體陽性不孕癥患者的效果 [J].重慶醫學，2005，34：1523-1524.

[編輯：侯麗]

·臨床實踐·

【作者簡介】史鴻志，男，河北秦皇島人，碩士，主管檢驗師，主要從事輔助生殖實驗室技術.(*通訊作者)

【收稿日期】2015-07-20；【修回日期】2015-09-24

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.2.013