蜂膠總黃酮對異丙腎上腺素致病理性心肌肥厚小鼠心功能的影響

孫光偉　隋　欣　賈　瓊　王偉楠　隋殿軍

(吉林省中醫藥科學院，吉林　長春　130021)

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蜂膠總黃酮對異丙腎上腺素致病理性心肌肥厚小鼠心功能的影響

孫光偉1，2隋欣1賈瓊1王偉楠1隋殿軍1

(吉林省中醫藥科學院，吉林長春130021)

〔摘要〕目的探討蜂膠總黃酮(TFP)對異丙腎上腺素(ISO)誘導的病理性心肌肥厚(PCH)小鼠心功能的影響。方法8周齡雄性小鼠20只，適應性飼養1 w，隨機分為對照組、ISO組、TFP組及ISO+TFP組。預先口服TFP (25 mg·kg-1·d-1)7 d之后持續給予ISO(25 mg·kg-1·d-1)7 d制備小鼠PCH模型。試驗結束后24 h進行超聲心動圖檢測，計算心臟重量/體重(HW/BW)比值，檢測心房鈉尿肽(ANP)的mRNA和蛋白表達水平。結果與對照組比較，ISO組小鼠收縮期左室內徑(LVIDs)、舒張期左室內徑(LVIDd)及左室收縮末期容積(LVVs)均明顯升高，而射血分數(EF)、縮短分數(FS)明顯降低，HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平亦明顯升高(P<0.05)；與ISO組比較，TFP+ISO組LVIDs、LVIDd及LVVs均明顯降低，而EF、FS明顯升高(P<0.05)，HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平亦明顯降低(P<0.05)。結論TFP可對抗ISO誘導的小鼠PCH，并對心功能損傷具有保護作用。

〔關鍵詞〕蜂膠總黃酮；異丙腎上腺素；心肌肥厚；心功能

1長春中醫藥大學2吉林大學中日聯誼醫院

第一作者：孫光偉(1978-)，女，副主任醫師，博士，主要從事心血管疾病的基礎與臨床研究。

病理性心肌肥厚(PCH)是心臟長期處于壓力負荷過重的情況下產生的一種代償功能。PCH會造成心肌需氧增加，此時冠狀動脈的供血量不能滿足相應的需求，就會造成心肌缺血，最后將導致心肌收縮力減退，最終發展為心力衰竭〔1〕。造成PCH的原因有多種，包括高血壓，主動脈瓣狹窄等〔2〕。目前，治療PCH主要應用增強心肌收縮力的藥物(如洋地黃類、β受體興奮藥)以及減輕心臟負荷的藥物(如硝酸甘油等)，但是其可使左心室流出道梗阻加重致使應用受限〔3〕。蜂膠總黃酮(TFP)是蜂膠中的有效成分，具有抗氧化的作用〔4〕，本課題組前期結果顯示TFP具有心肌保護作用，但其對心肌肥厚是否也具有保護作用尚不清楚。本研究旨在探討其對異丙腎上腺素(ISO)誘導的PCH小鼠心功能的影響及其機制。

1材料和方法

1.1動物8周齡雄性C57BL/6小鼠20只，體重22~24 g，由吉林大學基礎醫學院動物實驗中心供給，合格證號：SCXK-(吉)2007-0003。動物飼養于通風動物房內，室溫(20±2)℃，自由進食與飲水。

1.2實驗藥品和試劑TFP由長春中醫藥大學合成，批號：1019907，使用時以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成混懸液；ISO緩釋滲透微泵購自Sigma公司，心房鈉尿肽(ANP)抗體購自Santa Cruz公司；TRIzol、RNA提取試劑盒，ANP引物均購自Invitrogen公司。

1.3實驗方法〔4〕20只小鼠適應性飼養1 w，隨機分為對照組、ISO組、TFP組及ISO+TFP組。各組小鼠1.5%異氟醚麻醉，小鼠的肩胛間區域皮下植入含有PBS或ISO的緩釋滲透微泵，釋放速度是25 mg·kg-1·d-1，持續7 d。預先口服給予TFP (25 mg·kg-1·d-1)7 d之后持續給予ISO(25 mg·kg-1·d-1)7 d制備小鼠PCH模型。

1.4檢測指標(1)試驗結束后24 h進行超聲心動圖檢測，包括收縮期左室內徑(LVIDs)、舒張期左室內徑(LVIDd)、左室收縮末期容積(LVVs)、左室舒張末期容積(LVVd)、射血分數(EF)、縮短分數(FS)、每搏輸出量(SV)；(2)對各組小鼠直接測量體重(BW)和心臟重量(HW)，并計算HW/BW比值；(3)通過Q-RT-PCR和Western印跡法檢測ANP mRNA和蛋白表達水平。

1.5統計學分析采用SPSS11.0軟件行t檢驗。

2結果

2.1TPF對ISO致PCH小鼠心臟功能的影響與對照組比較，ISO組小鼠LVIDs、LVIDd及LVVs均明顯升高，而EF、FS明顯降低(P<0.05)；與ISO組比較，TFP+ISO組LVIDs、LVIDd及LVVs均明顯降低，而EF、FS明顯升高(P<0.05)，見表1。

表1　TPF對ISO致PCH小鼠心臟功能的影響

與對照組比較：1)P<0.05；與ISO組比較：2)P<0.05；下表同

2.2TFP對ISO致PCH小鼠HW/BW及ANP蛋白和mRNA水平的影響與對照組比較，ISO組小鼠HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平明顯升高(P<0.05)；與ISO組比較，TFP+ISO組小鼠HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平明顯降低(P<0.05)，見表2、表3。

表2　各組HW、HW/BW水平比較

表3　ANF蛋白及mRNA水平比較

3討論

蜂膠作為傳統中藥，具有廣泛的生物活性，如抗感染、抗氧化等。TFP是蜂膠的主要活性成分，具有很強的抗氧化活性。但是，蜂膠在心血管疾病中的作用尚不清楚。

ISO誘導可引起小鼠心肌缺血和心肌壞死，并逐步導致心臟舒張和收縮功能障礙，進一步發展為PCH〔5〕。采用皮下植入ISO的緩釋滲透微泵釋放藥物后，ISO組小鼠出現嚴重的心功能異常，提示ISO組小鼠出現心臟收縮功能障礙。但是，TFP可逆轉以上心功能參數，說明TFP可以減輕ISO誘導心肌肥厚小鼠的心功能損傷，從而發揮心肌保護作用。

HW/BW的比值可客觀評價小鼠心肌肥厚的程度〔6〕。本實驗結果表明TFP對ISO誘導的小鼠心肌肥厚具有抑制作用。PCH的特征在于細胞體積的增加以及代謝和生化指標的紊亂，并伴隨著ANP的再活化，表現為ANP mRNA和蛋白表達顯著升高〔7〕。而TFP可以抑制ANP mRNA和蛋白水平的升高，說明TFP對PCH具有一定的保護作用。

綜上所述，TFP可對抗ISO誘導的小鼠PCH，并對心功能損傷具有保護作用，但其作用機制仍需進一步研究。

4參考文獻

1Abel ED,Doenst T.Mitochondrial adaptations to physiological vs.pathological cardiac hypertrophy〔J〕.Cardiovasc Res,2011;90(2):234-42.

2Anderson M,Moore D,Larson D.Comparison of isoproterenol and dobutamine in the induction of cardiac hypertrophy and fibrosis〔J〕.Perfusion,2008;23(4):231-5.

3Bernardo BC,Weeks KL,Pretorius L,etal.Molecular distinction between physiological and pathological cardiac hypertrophy:experimental findings and therapeutic strategies〔J〕.Pharmacol Ther,2010;128(1):191-227.

4de Groot AC.Propolis:a review of properties,applications,chemical composition,contact allergy,and other adverse effects〔J〕.Dermatitis,2013;24(6):263-82.

5Bacharova L,Chen H,Estes EH,etal.Determinants of discrepancies in detection and comparison of the prognostic significance of left ventricular hypertrophy by electrocardiogram and cardiac magnetic resonance imaging〔J〕.Am J Cardiol,2015;115(4):515-22.

6Saba PS,Cameli M,Casalnuovo G,etal.Ventricular-vascular coupling in hypertension:methodological considerations and clinical implications〔J〕.J Cardiovasc Med(Hagerstown),2014;15(11):773-87.

7Swynghedauw B,Chevalier B.Biological characteristics of the myocardium during the regression of cardiac hypertrophy due to mechanical overload〔J〕.J Heart Valve Dis,1995;4(Suppl)2:S154-9.

〔2015-06-12修回〕

(編輯李相軍)

The protective effect of total flavonoids of propolis on isoproterenol-induced pathological cardiac hypertrophy in mice

SUN Guang-Wei,SUI Xin,JIA Qiong,etal.

Jilin Research Institute of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130021,Jilin,China

【Abstract】ObjectiveTo study the protective effect of total flavonoids of propolis(TFP)on isoproterenol(ISO)-induced pathological cardiac hypertrophy(PCH)and cardiac function mice.MethodsTwenty 8-week-old male mice were randomly divided into control,ISO,TFP and ISO+TFP groups.Echocardiography was used to test LVIDs, LVVs, EF, FS;and HW/BW ratio was calculated ,and mRNA and protein expression levels of ANF were detected.ResultsCompared with those of control group,LVIDs,LVIDd and LVVs in ISO group were increased significantly,but EF,FS were decreased,and HW/BW,mRNA and protein expression levels of ANF were increased(P<0.05).Compared with those of ISO group,LVIDs,LVIDd and LVVs in TFP 25 mg·kg-1·d-1+ISO group were decreased significantly,but EF,FS were increased,and HW/BW,mRNA and protein expression levels of ANF were decreased(P<0.05).ConclusionsTFP could be against ISO-induced PCH in mice,and has a protective effect on cardiac dysfunction.

【Key words】Total flavonoids of propolis;Isoproterenol;Cardiac hypertrophy;Cardiac function

通訊作者：隋殿軍(1955-)，男，教授，博士生導師，主要從事中醫藥防治心血管疾病研究。

基金項目：國家自然科學基金面上項目(81173543)

〔中圖分類號〕R-322

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)03-0519-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.003