清胰顆粒對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠并發(fā)心臟損傷的保護(hù)作用

趙　凱　黨　群　李永健　高巧營(yíng)

(天津市南開醫(yī)院心血管內(nèi)科，天津　300100)

?

清胰顆粒對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠并發(fā)心臟損傷的保護(hù)作用

趙凱黨群李永健高巧營(yíng)1

(天津市南開醫(yī)院心血管內(nèi)科，天津300100)

〔摘要〕目的探討清胰顆粒對(duì)重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠心臟損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法將45只Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(A組)、SAP組(B組)及清胰顆粒治療組(C組)，術(shù)后12 h測(cè)定各組大鼠血漿肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白(TN)I、乳酸脫氫酶(LDH)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、B型腦鈉肽(BNP)、基質(zhì)分解素(ST)-2的水平。結(jié)果SAP組大鼠血漿CK-MB、TNI、LDH、CRP、BNP、ST-2水平較假手術(shù)組明顯升高(P<0.01)，而清胰顆粒治療組心肌酶、CRP、BNP、ST-2水平雖有不同程度升高，但較SAP組低(P<0.05)；與假手術(shù)組相比，SAP組大鼠血漿MDA水平增加，SOD活性顯著降低(P<0.01)；而清胰顆粒干預(yù)可提高SOD活性，減少M(fèi)DA的生成。結(jié)論清胰顆粒通過抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化損傷作用來減輕SAP誘發(fā)的心臟損傷。

〔關(guān)鍵詞〕清胰顆粒；重癥急性胰腺炎；心臟損傷

1天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所

第一作者：趙凱(1980-)，男，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事心血管疾病及相關(guān)危險(xiǎn)因素診斷與治療研究。

重癥急性胰腺炎(SAP)是約占急性胰腺炎的10%~15%左右。SAP病情危重、發(fā)展迅速，常并發(fā)呼吸衰竭、心力衰竭、腎衰竭、膿腔內(nèi)出血等〔1〕。目前在SAP胰外器官損害中，對(duì)心臟損傷的研究較少，但SAP時(shí)心臟失代償是導(dǎo)致死亡的嚴(yán)重并發(fā)癥之一。因此進(jìn)行SAP心臟損傷早期識(shí)別及干預(yù)研究對(duì)治療SAP患者有重要意義。本實(shí)驗(yàn)擬在建立大鼠SAP模型基礎(chǔ)上，來觀察清胰顆粒對(duì)SAP合并心臟損傷時(shí)的保護(hù)作用。

1材料與方法

1.1主要試劑與儀器丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，心肌肌鈣蛋白(TN)I、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)、C反應(yīng)蛋白(CRP)試劑盒為武漢博士德公司產(chǎn)品。B型鈉尿肽(BNP)、基質(zhì)分解素(ST)-2蛋白濃度的檢測(cè)采用ELISA法，試劑盒購(gòu)自MBL公司。牛磺膽酸鈉為Sigma 公司產(chǎn)品。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與喂養(yǎng)選取45只雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量(250±50)g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組：假手術(shù)組(A組)，SAP組(B組)，清胰顆粒治療組(C組)，每組15只。所有大鼠給予生理鹽水或清胰顆粒(0.5 g/100 g)灌胃，5 h重復(fù)1次，共計(jì)3次，A組和B組給予生理鹽水，C組給予清胰顆粒。清胰顆粒方劑組成：柴胡、黃芩、枳實(shí)、元胡、川楝、大黃、芒硝、甘遂等，中藥按傳統(tǒng)工藝制備成水煎劑，均含生藥1 g/ml，滅菌后置于4℃冰箱備用(天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所藥劑室制備)。

1.3動(dòng)物模型制備及血樣采集末次灌胃后6 h，每只大鼠用戊巴比妥腹腔麻醉，俯臥位固定。腹正中切口，打開腹腔后，提起十二指腸，顯露肝門部，沿膽總管主干尋找至匯入十二指腸處，于膽管進(jìn)入十二指腸處，向肝門方向以輸液針頭穿刺膽管，緩慢推入5%牛磺膽酸鈉2 ml/kg。注射成功后可見大鼠胰腺組織出現(xiàn)腫脹，顏色由肉紅色轉(zhuǎn)為灰黑色。然后撤除輸液針頭縫合腹部切口。A組僅開腹后翻動(dòng)胃十二指腸，不注射藥物。以上操作在無菌條件下進(jìn)行〔2〕。術(shù)后12 h 穿刺心臟取血，行CK-MB、TNI、LDH、MDA、SOD、CRP、BNP、ST-2等指標(biāo)的檢測(cè)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0軟件行方差分析。

2結(jié)果

2.1心肌酶及炎性指標(biāo)檢測(cè)與A組大鼠比較，B組大鼠的TNI、CK-MB、LDH、CRP水平明顯升高(P<0.05)，表明胰腺炎發(fā)生后心肌發(fā)生損傷;而C組大鼠心肌酶學(xué)及CRP指標(biāo)雖有不同程度升高，但較B組低(P<0.05)。見表1。

2.2心功能指標(biāo)檢測(cè)與A組大鼠比較，B組大鼠的ST-2、BNP水平明顯升高(P<0.05)，表明胰腺炎可誘發(fā)心功能不全;而C組大鼠ST-2、BNP水平雖有不同程度升高，但較B組低(P<0.05)。見表2。

2.3氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)與A組大鼠比較，B組大鼠的MDA水平增加，SOD水平顯著降低(P<0.05)，表明大鼠存在氧化應(yīng)激損傷;C組與B組比較，清胰顆粒干預(yù)可提高SOD水平、減少M(fèi)DA的生成(P<0.05)。見表2。

表1　各組大鼠心肌酶及炎性指標(biāo)的比較±s,n=15)

與A組比較：1)P<0.01；與B組比較：2)P<0.05，下表同

表2　各組大鼠心功能及氧化應(yīng)激指標(biāo)的比較±s,n=15)

3討論

SAP患者病情危重，常并發(fā)呼吸衰竭、心功能衰竭、腎衰竭、膿腔內(nèi)出血等，病死率高。急性胰腺炎時(shí)伴發(fā)的心臟血管反應(yīng)被稱為胰心綜合征，主要包括：心功能改變、心律失常、休克、中毒性心肌炎、心肌梗死等，其中出現(xiàn)心力衰竭和心律失常最為常見〔2〕。因此早期預(yù)防和治療心臟損傷對(duì)于改善SAP患者的預(yù)后至關(guān)重要。

SAP時(shí)胰腺局部微血管痙攣，血壓下降導(dǎo)致灌注不足，胰腺局部微血管痙攣導(dǎo)致微循環(huán)障礙，出現(xiàn)胰腺缺血和再灌注損傷，白細(xì)胞過度激活，大量炎癥介質(zhì)被釋放入血，形成促炎因子激活的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)一步加重微循環(huán)障礙，加重胰腺損傷，并引發(fā)多臟器衰竭〔3〕。祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為SAP 屬“痹心痛”、“結(jié)胸”的范疇，SAP 的中醫(yī)辨證屬于郁、結(jié)、熱、瘀及厥互結(jié)，根據(jù)“六腑以通為用”的原則，本文選用具有通里攻下、理氣開郁、活血化瘀等功用的清胰顆粒作為研究藥物，方中大黃入陽明瀉熱通腑為君，黃芩、柴胡專入少陽疏邪透表勻臣，厚樸、積實(shí)行氣導(dǎo)滯為佐，另配疏肝理氣、行氣止痛之品元胡、川楝，諸藥合用，和解少陽，內(nèi)瀉熱結(jié)，使少陽與陽明合病得以雙解〔4〕。

本研究結(jié)果說明SAP時(shí)伴有心肌損傷，出現(xiàn)心肌酶及炎性介質(zhì)水平增加，其機(jī)制可能是：①炎性介質(zhì)的損傷作用：SAP并發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合征時(shí)各種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白、細(xì)胞因子等的交互作用影響心肌的代謝，增加內(nèi)皮黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)單核細(xì)胞活化和通過誘導(dǎo)單核細(xì)胞合成組織因子的促凝血作用，導(dǎo)致炎癥因子增加〔5〕。②微循環(huán)障礙：SAP誘發(fā)冠狀動(dòng)脈微循環(huán)障礙，使冠狀動(dòng)脈過度擴(kuò)張或痙攣，血流速度降低，心肌缺血缺氧加重，引起心肌損傷標(biāo)志物升高〔6〕。而清胰顆粒干預(yù)能疏通微循環(huán)，促進(jìn)腹腔內(nèi)腸腔內(nèi)血管活性及毒性物質(zhì)的排除，促進(jìn)炎性滲出物的吸收，使心肌酶及炎性介質(zhì)水平明顯減少，具有減輕心臟損傷的作用〔7〕。

BNP分泌增加是心功能不全時(shí)機(jī)體的代償機(jī)制之一，可用于心臟損傷和心力衰竭的早期識(shí)別。ST-2是白細(xì)胞介素-1受體家族的一個(gè)成員，它是心室在機(jī)械應(yīng)力作用下分泌的一種蛋白質(zhì)。最近研究表明嚴(yán)重心衰患者的ST-2水平升高，ST-2已成為心衰患者死亡的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子〔8〕。本研究結(jié)果顯示SAP大鼠的BNP、ST-2水平明顯升高，這說明SAP時(shí)伴有心臟衰竭，其機(jī)制可能是：①SAP引起心肌細(xì)胞凋亡：SAP早期低血容量、缺氧、疼痛和應(yīng)激等可使心肌腎上腺素能神經(jīng)興奮性增加，SAP大量滲液進(jìn)入腹腔后，刺激腹腔神經(jīng)叢反射性引起包括冠狀動(dòng)脈在內(nèi)的廣泛血管痙攣，導(dǎo)致心肌缺血缺氧而出現(xiàn)細(xì)胞凋亡〔9〕。②氧化應(yīng)激作用：SAP時(shí)產(chǎn)生大量氧自由基，其細(xì)胞毒作用可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡〔10〕。本研究中SAP時(shí)MDA水平增加，SOD水平下降，體內(nèi)清除氧自由基能力下降，發(fā)生心臟損傷。而清胰顆粒干預(yù)能改善腹腔內(nèi)器官的血液灌注，防止抗氧化損傷，進(jìn)而改善SAP大鼠的心臟功能。

4參考文獻(xiàn)

1Zhang XP,Zhang J,Ma ML,etal.Pathological changes at early stage of multiple organ injury in a rat model of severe acute pancreatitis〔J〕.Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2010；9(1):83-7.

2Zhang XP,Feng GH,Zhang J,etal.Protective effects of Salvia miltiorrhizae on the hearts of rats with severe acute pancreatits or obstructive jaundice〔J〕.Zhejiang Uni Sci B,2009；10(3):193-202.

3王林,余亮科,王原.大黃素對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障的分子保護(hù)機(jī)制〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2012；32(6):2319-20.

4崔乃強(qiáng),吳咸中.中西醫(yī)結(jié)合治療胰腺炎臨床與基礎(chǔ)研究〔M〕.武漢:華中科技大學(xué)出版社,2009:120-4.

6Zhang X,Tian H,Wu C,etal.Effect of baicalin on inflammatory mediator levels and microcirculation disturbance in rats with severe acute pancreatitis〔J〕.Pancreas,2009；38(7):732-8.

7楊元生，陳墾，葉昇，等.清胰顆粒干預(yù)重癥急性胰腺炎后胰腺蛋白組學(xué)表達(dá)差異性研究〔J〕.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013；33(1)：60-4.

8Januzzi JL Jr.ST2 as a cardiovascular risk biomarker:from the bench to the bedside〔J〕.J Cardiovasc Transl Res,2013；6(4):493-500.

9Du X,Cao Y,Xue P,etal.Protective effect of intermedin on myocardial cell in a rat model of severe acute pancreatitis〔J〕.Cell Mol Biol Lett,2011；16(3):462-76.

10Armstrong JA,Cash N,Soares PM,etal.Oxidative stress in acute pancreatitis:lost in translation〔J〕 ? Free Radic Res,2013；47(11):917-33.

〔2014-12-03修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)

基金項(xiàng)目：天津市衛(wèi)生局科技基金項(xiàng)目(2010KZ42)

〔中圖分類號(hào)〕R541

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)03-0551-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.015