冠蓋藤對骨性關節炎大鼠足組織前列腺素E2含量及形態學的影響

秦莉花　李　晟　鐘華美　陳曉陽,3　吳艷飛,3　黃　寬,3　秦莉峰

(湖南中醫藥大學藥學院，湖南　長沙　410208)

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冠蓋藤對骨性關節炎大鼠足組織前列腺素E2含量及形態學的影響

秦莉花1李晟鐘華美2陳曉陽2,3吳艷飛2,3黃寬2,3秦莉峰4

(湖南中醫藥大學藥學院，湖南長沙410208)

〔摘要〕目的探討冠蓋藤水提取物對骨性關節炎大鼠足組織前列腺素E2(PGE2)含量及形態學的影響。方法采用弗氏完全佐劑制備骨性關節炎模型，將隨機造模成功后大鼠隨機分為模型組，雷公藤多甙片組，冠蓋藤水提取物高、中、低劑量組。經藥物干預28 d后，觀察足趾組織形態學及檢測組織PGE2含量。結果冠蓋藤水提取物高、中劑量組大鼠膝關節軟骨退變較模型組和冠蓋藤水提取物低劑量組輕，僅軟骨表面細胞輕度纖維化。與正常組比較，模型組大鼠PGE2含量升高，經冠蓋藤水提取物治療后PGE2含量明顯降低，并且以高劑量組最明顯。結論冠蓋藤的抗炎鎮痛機制之一可能通過降低組織中PGE2含量。

〔關鍵詞〕冠蓋藤；骨性關節炎；前列腺素E2；組織形態學

1湖南中醫藥大學護理學院

2湖南省教育廳中藥現代化研究重點實驗室

3國家中藥管理局藥性與藥效研究三級實驗室

4中南大學湘雅附二院骨科

第一作者：秦莉花(1980-)，女，副教授，博士，主要從事中醫藥防治更年期或老年疾病研究。

骨性關節炎是一種在骨外科常見的老年人慢性進行性骨關節病，該病是以關節軟骨的退行性病變為主要病理特征，病因尚未明確，病理生理過程十分復雜。好發于手、足、膝，中期骨性關節炎在相當程度上影響患者的下肢運動功能。骨關節炎對患者生活質量和社會公共衛生事業的影響不可忽視。目前主要服用非甾體消炎藥消炎止痛，但長期服用往往引起藥物副作用，且治療效果不理想。民間用冠蓋藤治療骨性關節炎，其療效顯著，課題組前期研究表明本課題所用的冠蓋藤為柔毛冠蓋藤〔1〕，但其具體機制尚未明確。本課題研究冠蓋藤水提液對骨性關節炎大鼠足組織前列腺素E2(PGE2)含量及形態學的影響。

1材料與方法

1.1動物健康SD大鼠，雄性，SPF級，體重180~220 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK(湘)2009-0004。

1.2藥物冠蓋藤在湖南省懷化市沅陵采集，經湖南中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室鑒定為柔毛冠蓋藤，制備成水煎液稱取冠蓋藤藥材1 500 g，分3次提取，最后濃縮成1 g生藥/ml的藥液，備用；雷公藤多甙片(上海復旦復華藥業有限公司，批號Z31020415)。以上藥物用時均由生理鹽水配成所需濃度。

1.3試劑及儀器二甲苯(天津市大茂化學試劑廠，批號：20080921)。角叉菜膠(Sigma 公司，批號：45F-0427)；冰醋酸(濰坊潤潔化學有限公司)；弗氏完全佐劑F-5881(Sigma公司)；PGE2試劑盒(美國ADL公司)。

1.4方法

1.4.1骨性關節炎模型的建立取雄性SD大鼠60只，用微量注射器于左后足跖皮內注射FCA0.1 ml致炎〔2，3〕。原發病變表現為致炎側的關節腫脹，致敏當天后即可出現；繼發病變一般于致炎后12～18 d出現，表現為非致炎側及雙前肢的關節腫脹。

1.4.2分組造模成功后的50只SD大鼠隨機分為5組：模型組，雷公藤組，冠蓋藤水提取物高、中、低劑量組，每組10只。另外取10只健康SD大鼠作為正常組。造模后，雷公藤組給予雷公藤多甙片混懸液15.44 mg/kg；冠蓋藤水提取物低、中、高劑量組分別給予冠蓋藤水提取物2.31，4.62，9.24 g生藥/kg，正常組給予等容量蒸餾水。致炎當天，各組均采用灌胃方法給藥，每天1次，給藥時間28 d。

1.4.3PGE2含量的檢測治療28 d后用斷頭，取大鼠右后足取較上部位組織檢測PGE2含量，組織剪碎后用生理鹽水3 ml浸泡2 h后取出，3 000 r/min離心浸泡液5 min，吸取上清液0.5 ml，加入0.5 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液1 ml后，將試管置于50℃恒溫水浴中異構化20 min,在278 nm出測定其光密度(OD)值，PGE2含量以每克炎性組織相當的吸收光密度值(A值)表示。

1.4.4形態學指標治療28 d后用斷頭，取大鼠右后足，用10%甲醛固定，HE染色觀察足趾組織形態學。

2結果

2.1冠蓋藤水提取物對弗氏完全佐劑大鼠模型足組織PGE2的影響正常組PGE2含量為(3.96±0.19)，模型組為(12.87±0.65)，雷公藤組為(4.59±0.29)，冠蓋藤水提物高劑量組為(4.38±0.18)，冠蓋藤水提物中劑量組為(6.92±0.23)，冠蓋藤水提物低劑量組(8.37±0.21)。模型組的PGE2含量與空白組比較明顯升高(P=0.00)，說明造模成功。冠蓋藤水提取物高、中、低劑量組PGE2含量均較模型組明顯下降(P=0.01、0.00、0.00),并有一定的劑量依賴關系。

2.2各組大鼠右后足的形態學變化膝關節軟骨足趾病變見圖1。正常組軟骨細胞排列規則，表面光滑；模型組和冠蓋藤水提取物低劑量組大鼠膝關節軟骨在光鏡下可見軟骨細胞大量纖維化，細胞數量明顯減少，膝關節軟骨表面的膠原纖維退化，軟骨基質鈣化區變薄；冠蓋藤水提取物高、中劑量組大鼠膝關節軟骨退變較模型組和冠蓋藤水提取物低劑量組輕，僅軟骨表面細胞輕度纖維化。

圖1　冠蓋藤水提取物對骨性關節炎大鼠足趾組織形態學的影響(HE，×400)

3討論

目前認為，在骨性關節炎的發病過程中，PGE2能夠促進骨吸收，參與軟骨基質的破壞。同時前列腺素作為炎癥介質，也參與炎癥反應，組織在炎癥期間，可測到其中有高濃度的前列腺素。PGE2是一種重要的細胞生長和調節因子。在體內水平過高時會引起發熱反應。炎癥發生時，PGE2可使血管擴張，水腫加劇并引起發熱疼痛〔4〕。

文獻報道，兔骨性關節炎模型組關節滑液中的PGE2含量比正常組有顯著增高(P<0.01)〔5〕。本實驗說明冠蓋藤可以降低骨性關節炎大鼠的足組織中PGE2的含量，從而抑制炎癥反應，改善關節周圍組織的痛覺過敏狀態，緩解疼痛，達到治療骨性關節炎的效果。

4參考文獻

1陳曉陽，鐘華美，吳艷飛，等.冠蓋藤藥用部位的生藥學研究〔J〕.時珍國醫國藥，2012；23(4)：900-1.

2徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法〔M〕.第2版.北京：人民衛生出版社，1991：723-4.

3馬玉琛，段斐，孟明.改良弗氏完全佐劑制備大鼠類風濕性關節炎模型〔J〕.現代預防醫學，2008；35(10)：1989-91.

4楊光華.病理學〔M〕.第5版.北京：人民衛生出版社，2001：59.

5王宇強，王小華，楊富國，等.仙仲注射液對兔早期膝骨性關節炎組織形態學改變及關節滑液白介素-β、炎前列腺素E2的影響〔J〕.天津中醫藥，2009；26(6):69-71.

〔2013-05-28修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

通訊作者：陳曉陽(1953-)，女，教授，主任醫師，碩士，主要從事中藥藥性理論基礎與應用的研究。

基金項目：湖南省中醫藥管理局項目(2009033，201232)；湖南省教育廳中藥學重點學科項目

〔中圖分類號〕R268

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)03-0568-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.023