高效液相色譜法測定參芪降糖顆粒中五味子甲素、五味子乙素含量

王建花

·實驗研究·

高效液相色譜法測定參芪降糖顆粒中五味子甲素、五味子乙素含量

王建花

目的為控制五味子質量,探討高效液相色譜測定參芪降糖顆粒中五味子甲素、五味子乙素含量的方法。方法色譜柱為Agilent Eclipse Plus-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流動相為乙腈-水(56:44),流速1ml/min,檢測波長250nm,柱溫30℃。結果五味子甲素、五味子乙素線性范圍分別為5.045～100.8μg/ml (r=0.9999)、5.47～109.4μg/ml (r=0.9999),五味子甲素、五味子乙素平均回收率分別為99.13%、98.66%,相對標準偏差(RSD)分別為0.9%、1.3%。結論高效液相色譜專屬性、重復性好,可用于參芪降糖顆粒的質量控制。

參芪降糖顆粒；五味子甲素；五味子乙素；高效液相色譜

參芪降糖顆粒(魯南厚普制藥有限公司)由人參(莖葉)皂苷、五味子、黃芪、山藥、覆盆子、麥冬、茯苓、天花粉、澤瀉、枸杞子組成［1］,具有益氣養陰、滋脾補腎的作用,主治消渴癥,用于2型糖尿?。?-6］。五味子為方中臣藥,五味子甲素、五味子乙素是參芪降糖顆粒的主要有效成分,目前該制劑現行質量標準未進行質量控制,故本文采用高效液相色譜法［7-10］測定參芪降糖顆粒中五味子甲素［11-15］、五味子乙素含量,為該制劑的質量評價提供一定的參考?，F報告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀(美國),Sartorius CPA225D 分析天平(0.1mg)(瑞士賽多利斯公司)。

1.2 試藥 參芪降糖顆粒(批號：00116003、00116004、00116005),五味子甲素(批號：110764-200408)、五味子乙素(批號：110765-2007107)均來自中國食品藥品檢定研究院,需五氧化二磷干燥12h以上。乙腈為色譜純［16］,水為超純水。

2方法與結果

2.1 對照品溶液的配制 精密稱取五味子甲素、五味子乙素適量,加甲醇分別制成每1毫升中0.2018、0.2188mg的溶液,作為對照品貯備液Ⅰ、Ⅱ。精密量取貯備液各5ml置20ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取參芪降糖顆粒3g置錐形瓶中,精密加入甲醇10ml,稱重,超聲處理30min,用甲醇補足減失重量,搖勻,用以0.22μm微孔濾膜濾過,取續濾液即得。

2.3 色譜條件及系統適應性 色譜柱Agilent Eclipse Plus-C18(250mm×4.6mm,5μm),柱溫30℃,流動相：乙腈-水(56:44),流速1.0ml/min,檢測波長250nm。參考《中國藥典》2015年版一部五味子【含量測定】項下,選擇檢測波長250nm。取對照品溶液和供試品溶液各10μl,供試品中五味子甲素、五味子乙素主峰與其他組分分離良好,無明顯干擾。見圖1,圖2。

圖1 對照品

圖2 樣品

2.4 標準曲線 分別精密吸取對照貯備溶液適量,加甲醇配成系列標準溶液,濃度依次為五味子甲素：5.045、25.22、50.45、75.68、100.8μg/ml,五味子乙素：5.470、27.35、54.70、82.05、109.4μg/ml,分別進樣10μl,以對照品濃度(X)為橫坐標,峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線,結果表明五味子甲素在5.045～100.8μg/ml范圍內線性關系良好,其回歸方程為Y=20.457X-1.255(r=0.9999)；五味子乙素在濃度為5.47～109.4μg/ml范圍內線性關系良好,其回歸方程為Y=16.905X-2.7495(r=0.9999)。

2.5 精密度考察 精密吸取同一混合對照品溶液(50μg/ml) 10μl,依法測定。結果五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.7%、0.9%(n=6)。試驗表明,本法精密度良好。

2.6 重復性考察 平行制備6份供試品溶液(批號：150601),分別進樣10μl,按“2.3”項下色譜條件依法測定,記錄主峰峰面積,結果平均每克中五味子甲素、五味子乙素平均含量分別為0.1567、0.2472mg,RSD分別為1.5%、1.0%(n=6)。試驗表明,本法重復性良好。

2.7 穩定性考察 按“2.2”供試品溶液的制備項下配置供試品溶液一份(批號：150601),分別于0、2、4、8、12、24h時進行測定,考察主峰峰面積,結果五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.8%、0.9%(n=6)。表明供試品溶液在制備后24h內較穩定。

2.8 準確度考察 精密吸取6份已知濃度的參芪降糖顆粒1.5g,置錐形瓶中,精密加對照品儲備溶液Ⅰ1.2ml,對照品貯備液Ⅱ 1.8ml分別加入6份供試品中,分別精密加甲醇7ml,搖勻,稱重,超聲30min,放冷,用甲醇補足減失重量。以0.22μm微孔濾膜濾過,按“2.4”項下色譜條件依法測定,記錄峰面積,計算加樣回收率。結果表明,本法準確度較好。見表1。

表1 回收率測定結果

2.8樣品含量測定 取三批次供試品(批號：151109①、151109②、151109③),按“2.2”項制備,按“2.3”項下色譜條件依法測定,計算含量。結果五味子甲素含量分別為0.1571、0.1549、0.1566mg/g；五味子乙素含量分別為0.2472、0.2459、0.2461mg/g。

3 小結

參芪降糖顆粒原標準中未考察人參、黃芪一些成分進行了質量控制,本實驗增加了對五味子甲素、五味子乙素進行含量測定。高效液相色譜法準確度高、精密度好、穩定性佳、簡單易行,可考慮補充到該制劑質量標準中。

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Determination of schizandrin A and schizandrin B contents in Shenqi Jiangtang granule by high performance liquid chromatography

WANG Jian-hua.Nanjing City Food and Drug Inspection Institute,Nanjing 210000,China

ObjectiveTo investigate determination method of schizandrin A and schizandrin B contents in Shenqi Jiangtang granule by high performance liquid chromatography,in order to control schisandra chinensis quality.MethodsAgilent Eclipse Plus-C18column (250mm×4.6mm,5μm) was applied,with acetonitrilewater (56:44) as mobile phase by 1ml/min as flow velocity,determine wavelength as 250nm and column temperature as 30℃.ResultsLinearity range of schizandrin A and schizandrin B were respectively 5.045～100.8μg/ml (r=0.9999) and 5.47～109.4μg/ml (r=0.9999).Schizandrin A and schizandrin B had average recovery rate respectively as 99.13% and 98.66%,with ralative standard deviation (RSD) as 0.9% and 1.3%.ConclusionHigh performance liquid chromatography shows good specificity and repeatability,and it is feasible to control Shenqi Jiangtang granule quality.

Shenqi Jiangtang granule; Schizandrin A; Schizandrin B; High performance liquid chromatography

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.18.196

2016-08-17］

210000南京市食品藥品監督檢驗院