獸醫實驗室ELISA檢測中應注意的問題

于 丹 遼寧省撫順市動物疫病預防控制中心 113006

獸醫實驗室ELISA檢測中應注意的問題

于 丹 遼寧省撫順市動物疫病預防控制中心 113006

本文主要從ELISA檢測的概述入手，對ELISA檢測中需要注意的問題，從血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護等方面進行了分析。

ELISA檢測；獸醫實驗室；問題

在獸醫實驗室中，ELISA檢測工作的核心問題就在于操作的精準性，所以必須在血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護工作中對其檢測的質量進行控制，才能更好地促進這一工作的重要性彰顯。

1 ELISA檢測的概述

ELISA檢測，也就是酶聯免疫吸附劑測定的簡稱。在獸醫實驗室中，ELISA檢測的內容包括豬瘟抗體、藍耳病抗體和口蹄疫抗體檢測。但是在檢測過程中，為了確保檢測結果的精準性，就必須注意操作方法的正確性。

2 需要注意的問題分析

（1）在血樣采取與處理過程中應確保采樣輕柔，預防出現溶血的情況，這主要是由于紅細胞在溶解過程中所釋放的物質中具有過氧化物酶活性的特點，進而對檢測結果帶來影響。而且標本存儲的時間較長就會導致LGG聚合為多聚體，進而出現本底過深和假陽性的出現，所以需要及時對血清樣板進行測定，并將其放在4℃的保溫箱中。若測定的時間超過3天，應將其低溫冰存。

（2）在回溫過程中應盡可能地采取低溫，一般回溫溫度只要確保洗滌液的結晶在充分搖動的情況下可以完全溶解即可。

（3）在加樣過程中，由于其涉及的環節較多，所以在采用微量加樣器時，應嚴格按照規定的加入量，將其加入到板孔之中，而且在加樣過程中應確保加入的樣品處于板孔的底部。這樣就能有效預防在孔壁上存在的樣品，預防樣品濺出的同時還要避免其出現氣泡。而在加入不同的物質時應更換吸嘴，有效地預防和避免出現交叉感染的情況。但是在顯色過程中，主要是采取多道微量加樣器，這樣才能提高加液的速度，從而更好地統一加樣和顯色的時間，盡可能地將檢測的誤差降到最低。

（4）在孵育過程中，由于其在ELISA檢測中需要一定的時間，所以其在這一過程中始終處于恒溫狀態，具體的做法就是在恒溫箱中放置ELISA板。同時還要利用封板條將反應孔封住，嚴禁將反應板疊放，這樣就能夠有效地預防其蒸發，同時又能夠確保每個反應板的溫度快速平衡，盡可能地確保溫育溫度與溫育時間的精準性。

（5）由于洗滌直接影響ELISA實驗的結果，因此要注重洗滌工作的開展，通過洗滌將ELISA分離游離，同時利用與ELISA結合的酶標記物，將在板孔內殘留的物質清除，這樣在反應時就能夠避免這些物質帶來的干擾。首先是預防由于血液凝固導致假陽性的出現，因為血液若凝固不全，將存在吸附纖維的情況，這樣洗板不干凈，就會導致一些非固相的殘留酶的形成，最終導致非特異性的顯色效果受到影響。而且當顯色很深時，容易將其錯誤地認為屬于強陽性。其次是在洗液過程中，盡可能地在臨時使用之前配置新鮮的洗液，預防由于較長的放置時間而出現渾濁的絮狀物，否則就會出現花板和堵孔的情況。因而在洗板機使用過程中應對其間隔的時間和洗板液的使用量進行嚴格控制。最后是在拍板過程中，還應將殘余水分拍掉，但是應輕拍輕打，盡可能地減少拍打次數。

（6）在顯色之后，應在規定的時間內利用酶標儀及時讀取比色的情況，并對結果進行精確判斷，這樣才能確保顯色的質量。

（7）在保護過程中，由于TMB和OPD具有較強的致癌性，因而在這一檢測工作中，在操作時還應注意影響檢測人員安全的因素，所以必須在檢測過程中規范每項檢測的標準和流程，強化檢測人員的管理，確保整個過程的安全。

3 結語

綜上所述，在獸醫實驗室ELISA檢測工作中，需要注意的問題較多，尤其是在血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護等7個方面，確保檢測的精準性和實驗結果的科學性。

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