豬病診斷和防治過程中PCR技術的應用

楊顯榮 吉林省德惠市肉品管理辦公室 130300

豬病診斷和防治過程中PCR技術的應用

楊顯榮 吉林省德惠市肉品管理辦公室 130300

近些年，豬病發生的幾率越來越高，且病癥也越來越嚴重，這使得養豬業的發展也受到極大的影響。在豬病的診斷與防治中，最重要的就是精確快速地找到導致豬病發生的病原菌，這樣才能根據病原菌的種類，采取有針對性的措施來加以應對。故開發一種能夠迅速對豬病進行診斷的技術就變得十分重要，而應用PCR技術則能很好地滿足這一要求。

1　PCR技術概況

在豬病診斷與防治中，PCR技術主要有三個優點：一是操作簡便，二是具有高速度的擴增效果，三是具有較高的特異性。目的基因在PCR技術下，能夠在非常短的時間內被快速擴增，從而達到檢測微量基因的目的。同時在PCR技術中，特異性會受到靶序列兩頭的引物—寡核苷酸所影響。由于PCR技術的不斷發展，目前PCR技術在傳統基礎上又不斷衍生出了幾類新型的技術，例如PCR多重技術、PCR熒光定量技術，以及RT-PCR技術，這些技術在檢測動物疫病方面具有非常重要的意義和作用。

2　豬病診斷和防治過程中PCR技術的應用

（1）檢測單一病毒—豬圓環病毒。實驗人員按照基因儲存庫中豬圓環病毒的基因序列ORF2來對擴增引物進行設計，并利用該病毒的臨床分離基因來作為模板基因，然后對反應條件進行適當的篩選，從而形成一種能夠對豬圓環病度2型進行檢測的PCR方法。結果表明，用這一方法對豬圓環病毒2型擴增基因以后，得到目的基因的片段長度為559bp，而在相等條件下，對其他能夠引起類似豬病的感染病毒進行檢測發現，其實驗的結果均呈陰性，說明此種檢測方法具有非常好的特異性。同時通過實驗發現，經檢測的30個臨床病料，總共81份，其結果具有非常高的準確率，這說明PCR檢測方法具有較好的可行性，因此能夠為豬場養殖提供準確的防疫依據。

（2）檢測單一病毒—豬瘟病毒。在眾多豬病中，豬瘟具有非常嚴重的危害，而且會給養豬業的經濟效益造成非常大的損失。目前，盡管國內相關部門已經采取了多種措施來對豬瘟進行預防和控制，但是結果都很不理想。而隨著PCR技術的應用，人們根據設計引物的不同，建立了RT-PCR技術來對豬瘟進行檢測，結果表明，其能夠對豬瘟病毒的核酸序列進行擴增，而且這一擴增具有明顯的特異性，同時檢測結果的可靠性也非常高，因此能夠對豬瘟進行快速診斷和防治。

（3）檢測單一病毒—呼吸與繁殖綜合癥。此類豬病主要發生于母豬，進而傳染給仔豬。這種病癥不僅會對母豬的繁殖造成影響，同時還會對仔豬的存活率及免疫功能造成較大的影響。因此可以運用快速診斷的結果來對該病進行有效的防治。實驗人員利用聚合酶中的鏈式反應來對這一病癥進行了檢測，而且經過不斷研究和試驗，最終建立了該病癥的檢測方法PCR法。使用該種檢測方法的注意事項為：首先，若RNA是從陳舊的樣品中進行提取的，則容易發生降解反應，而在電泳實驗中，新鮮的樣品則會有三條明顯的RNA，而且外形也相對完整。其次是在RNA在提取以后，進行cDNA反轉錄后，在－20℃時經歷1周，就會出現降解反應。

（4）檢測混合病毒。多重PCR技術主要指的是將兩種以上的引物加到一個反應系統里面，與一般的PCR技術進行對比發現，這一技術能夠對兩種或者兩種以上的豬病病菌進行同時檢測，并且還能獲得非常準確的檢測結果，同時反應的速度非常快，而且非常靈敏，因此具有非常好的應用效果。在對豬病進行檢測和防治的過程中，經常會遇到兩種或者兩種以上病毒混合感染的情況，而且長期以來大量的獸醫都只是利用以往的經驗來進行診斷和治療，因此極易錯過最佳的治療時機。而應用PCR技術進行豬病的診斷和防治就變得非常有價值。

3　總結

綜上所述，目前針對豬病中容易引起病癥的病毒及病原體等，實驗人員設計了5種PCR技術檢測方法，主要是應對豬瘟、呼吸與繁殖綜合癥及腦炎等，因為這幾種病癥常常混合在一起對豬體進行感染。采用多重PCR能夠產生的擴增產物主要有三種，即263bp、380bp和508bp，而且檢測的靈敏性比傳統的檢測技術要高出數倍，這說明多重PCR技術在進行豬病診斷和防治過程中具有非常高的靈敏性和特異性。