GC法檢測72種中藥飲片有機氯農藥殘留量

劉 芳，歐陽慧子，柴士偉，王 強，馬 融（天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津 300193）

GC法檢測72種中藥飲片有機氯農藥殘留量

劉 芳＊，歐陽慧子，柴士偉，王 強，馬 融（天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津 300193）

目的：建立檢測多種中藥飲片有機氯農藥殘留量的方法。方法：采用氣相色譜法。色譜柱為Agilent HP-5彈性石英毛細管柱，檢測器為63Ni源電子捕獲檢測器，進樣口溫度為250Ⅱ，檢測器溫度為300Ⅱ，程序升溫，載氣為高純氮，載氣流速為1 ml/min，進樣量為5 μl，不分流進樣。結果：α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT檢測質量濃度線性范圍均為0.01～0.20 μg/ml（r分別為0.999 5、0.996 4、0.999 6、0.993 7、0.999 3、0.999 7、0.999 1、0.998 3）；定量限分別為0.015、0.02、0.01、0.02、0.01、0.01、0.02、0.62 μg/ml；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜3.0%；加樣回收率為71.2%～109.2%（RSD為4.2%～9.8%，n＝9）。72種中藥飲片有機氯農藥殘留總體檢出率為66.7%，總體符合標準率為87.5%。結論：該方法操作簡便，精密度、穩定性、重復性好，可用于多種中藥飲片有機氯農藥殘留量的檢測。

氣相色譜法；有機氯農藥殘留量；中藥飲片

有機氯農藥是應用最早、最廣泛的一類殺蟲劑，大多數具有性質穩定、難降解和易蓄積于人體內產生致癌、致畸、致突變作用等特點[1-2]。雖然我國在20世紀80年代后期已禁用這類農藥，但不科學的使用已造成有機氯農藥在土壤中大量殘留，使中藥最終難逃農藥的污染[3-5]。中藥飲片是依照中醫藥理論，經加工炮制后直接應用于臨床的中藥，是中醫藥療效的基礎。因此，保障中藥飲片質量是確保臨床用藥安全、有效的關鍵[6]。近年來，中藥農藥殘留超標被頻頻報道，中藥的質量安全不斷受到質疑，嚴重制約中藥及相關產品的臨床應用[7-8]。本試驗采用氣相色譜法（GC）測定了我院藥房72種常用中藥飲片有機氯農藥殘留量，以期為我院中藥飲片質量評價提供依據。

1 材料

1.1 儀器

6890型GC儀，包括63Ni源電子捕獲檢測器（63Ni-ECD）、GC工作站（美國Agilent公司）；AX205型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；Milli-Q型超純水制備儀（美國Millipore公司）；3K15型高速離心機（美國Sigma公司）；XW-80A型渦旋混合器（上海滬西分析儀器廠）；RE-5250型旋轉蒸發儀（上海亞榮科學儀器廠）；N-EAVPTM111型氮吹儀（美國Organomation公司）；AS10200A型超聲清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）。

1.2 試劑

六六六（BHC，包括α-BHC、β-BHC、γ-BHC和δ-BHC 4種同系物）、滴滴涕（DDT，包含PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD和PP′-DDT 4種同系物）標準品均購自農業部環境保護科研檢測所，質量濃度均為1 000 mg/L；濃硫酸為優級純，丙酮、正己烷、二氯甲烷、石油醚（60～90Ⅱ）、無水硫酸鈉（研細，450Ⅱ烘4 h）、氯化鈉（研細，150Ⅱ烘4 h）均為分析純，水為超純水。

1.3 飲片

本試驗選取我院中藥房常用、重要和有代表性的中藥飲片共72種，所選擇的飲片包括不同的用藥部位，如根和根莖類、莖木類、皮類、全草類、花類、果實和種子類。品種如下：三七、人參、浙貝母、百部、川貝母、百合、黃芩、丹參、生黃芪、炙甘草、防己、郁金、桔梗、木香、生白術、麩炒蒼術、白及、熟大黃、赤芍、白芍、黃連、貓爪草、茜草、北沙參、防風、柴胡、當歸、前胡、白芷、川芎、羌活、板藍根、山藥、地骨皮、牡丹皮、白鮮皮、枳殼、陳皮、青皮、佛手、化橘紅、柏子仁、五味子、預知子、黑芝麻、木瓜、胖大海、覆盆子、枸杞子、大棗、蓮子心、麩炒芡實、蓮子、木蝴蝶、金銀花、佛手花、菊花、代代花、款冬花、石斛、酒蓯蓉、鉤藤、槲寄生、忍冬藤、薄荷、荊芥、大火草、白花蛇舌草、白芨、炒麥芽、六神曲、秦皮，經我院馬瑛主任藥師鑒定均為真品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-5彈性石英毛細管柱（30 m×0.32 mm× 0.25 μm）；檢測器：63Ni-ECD；進樣口溫度：250Ⅱ；檢測器溫度：300Ⅱ；升溫程序：初始90Ⅱ保持1 min，以40Ⅱ/min升到170Ⅱ保持1 min，以2Ⅱ/min升到190Ⅱ保持1 min，以10Ⅱ/min升到250Ⅱ保持1 min；載氣：高純氮（純度＞99.999%）；載氣流速：1 ml/min；進樣量：5 μl；進樣方式：不分流進樣。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合標準品溶液 分別量取BHC、DDT標準品適量，各置于10 ml量瓶中，加正己烷定容，制成質量濃度均為10 μg/ml的單一標準品溶液。量取上述單一標準品溶液各0.2 ml，置于同一10 ml量瓶中，加正己烷定容，制成α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT質量濃度均為0.2 μg/ml的混合標準品溶液。

2.2.2 供試品溶液 參照2015年版《中國藥典》方法[9]，于60Ⅱ下干燥樣品4 h，粉碎成細粉，取約2 g，精密稱定，置于100 ml具塞錐形瓶中，加水20 ml浸泡過夜，精密加丙酮40 ml，稱定質量，超聲處理30 min，放冷后再次稱定質量，用丙酮補足減失的質量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 ml，稱定質量，超聲處理15 min，放冷后再次稱定質量，用二氯甲烷補足減失的質量，靜置后分層，將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 ml具塞錐形瓶中，放置4 h。精密量取上述溶液35 ml，于40Ⅱ水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90Ⅱ）反復操作至二氯甲烷和丙酮除凈（一般4次），用石油醚（60～90Ⅱ）溶解并轉移至10 ml具塞離心管中，加石油醚（60～90Ⅱ）精密稀釋至5 ml，小心加入硫酸1 ml，振搖1 min，以半徑為12.5 cm、3 000 r/min離心10 min，精密量取上清液2 ml，置于濃縮瓶中用氮氣將溶液濃縮至適量，加正己烷精密稀釋至1 ml，即得。

2.2.3 空白對照溶液 缺樣品，按“2.2.2”項下方法從“精密加

丙酮40 ml……”開始操作，制備空白對照溶液。

2.3 專屬性試驗

取“2.2”項下混合標準品溶液、供試品溶液、空白對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。結果顯示，其他成分均不干擾α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT的檢測。

2.4 線性關系考察

分別精密量取“2.2.1”項下混合標準品溶液適量，置于10 ml量瓶中，加正己烷制成各待測農藥殘留成分質量濃度分別均為0.01、0.02、0.05、0.08、0.10、0.15、0.20 μg/ml的系列混合標準品溶液。精密量取上述系列混合標準品溶液各5 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測農藥殘留成分質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程與線性范圍，詳見表1。

2.5 定量限（LOQ）考察

分別精密量取“2.2.1”項下混合標準品溶液適量，倍比稀釋，并按“2.1”項下色譜條件進樣測定，當信噪比為10∶1時，得LOQ，詳見表1。

2.6 精密度試驗

圖1 氣相色譜圖A.空白對照；B.混合標準品；C.供試品（當歸，批號：1501076）；1.α-BHC；2.β-BHC；3.γ-BHC；4.δ-BHC；5.PP′-DDE；6.OP′-DDT；7.PP′-DDD；8.PP′-DDTFig 1 GC chromatograms1.blank samples；2.mixed standards；3.test samples（Fritillaria thunbergii，batch number：1501076）；1.α-BHC；2.β-BHC；3.γ-BHC；4.δ-BHC；5.PP′-DDE；6.OP′-DDT；7.PP′-DDD；8.PP′-DDT

表1 回歸方程、線性范圍與定量限Tab 1 Regression equation，linear range and limit of quantitation

取“2.2.1”項下混合標準品溶液適量，加正己烷制成各待測農藥殘留成分質量濃度均為0.10 μg/ml的溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT峰面積的RSD分別為1.90%、1.75%、1.61%、2.08%、0.79%、2.87%、1.84%、1.83%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（當歸，批號：1501076）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT峰面積的RSD分別為1.08%、1.95%、2.06%、2.02%、0.79%、1.76%、1.64%、1.85%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內基本穩定。

2.8 重復性試驗

精密稱取同一批樣品（當歸，批號：1501076）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT峰面積的RSD分別為1.99%、0.84%、2.46%、0.99%、1.82%、1.51%、1.95%、2.07%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品（當歸，批號：1501076）適量，共9份，分別加入低、中、高質量的各標準品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表2。

2.10 樣品農藥殘留量測定

取72批樣品各適量，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算各待測農藥殘留成分的含量，結果見表3。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

表3 樣品農藥殘留量測定結果（n＝3，μg/kg）Tab 3 Determination results of organochlorine pesticide residues in samples（n＝3，μg/kg）

續表3Continued tab 3

3 討論

本試驗中，筆者對我院72種中藥飲片有機氯農藥殘留進行檢測，樣品覆蓋了大多數的中藥產地，包含了臨床常用的中藥品種，所用GC法穩定、靈敏度高、專屬性強。飲片中有機氯農藥殘留均有不同程度的檢出，其中有機氯農藥殘留總體檢出率為66.7%，∑BHC的檢出率為25.0%，而∑DDT的檢出率為56.9%。我國控制中藥材中農藥殘留的標準主要為2015年版《中國藥典》，對于∑BHC和∑DDT的限量均規定≤200 μg/kg，按此限量規定，所有飲片樣品均未超標，即符合國家標準。而《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》[10]關于藥用植物原料與制劑的有機氯農藥殘留限量規定為∑BHC和∑DDT均≤100 μg/kg，按此限量規定，∑BHC達標的飲片樣品有68個品種，品種合格率為94.4%；∑DDT達標的飲片樣品有67個品種，品種合格率為93.1%，合格率均較高。由結果可知，根和根莖類藥材飲片樣品中的BHC類農藥殘留較嚴重，如三七、人參、麩炒蒼術、熟大黃、板藍根等，果實類（如陳皮）和花類（如金銀花）等容易受到DDT類農藥污染，這與文獻的報道結果一致[11-14]。由本研究結果可知，盡管中藥飲片中有機氯農藥殘留的總體檢出率較高，但污染嚴重的飲片比例非常低，均未超過2015年版《中國藥典》規定的限量；并且，符合國家進出口標準規定的有63個品種，占全部的87.5%。因此，雖然有機氯農藥殘留現象較為普遍，但并沒有媒體宣傳的那么嚴重。

隨著國內外對中藥飲片質量要求的提高和對農藥殘留檢測的要求越加嚴格，中藥飲片農藥殘留問題也引起我院的高度重視。筆者希望通過建立一套簡便、可靠的中藥飲片農藥殘留量測定方法，加強檢驗監督，對飲片質量嚴格把關，確保中藥飲片的質量，進而保證患者用藥安全、有效。

[1] 楊銀慧，豆小文，孔維軍，等.我國中藥材中農藥登記現狀及污染分析[J].中國中藥雜志，2013，38（24）：4 238.

[2] 王麗麗，夏會龍.我國中草藥中農藥殘留的特點[J].中草藥，2007，38（3）：471.

[3] 程壽峰，張明時，夏品華.30種黔產中藥材飲片中11種有機氯農藥殘留的污染調查與研究[J].時珍國醫國藥，2013，24（9）：2 288.

[4] 薛健，郝麗麗，彭非，等.55種中藥材的有機氯農藥殘留狀況調查報告[J].世界科學技術：中醫藥現代化，2008，10（3）：62.

[5] 黃曉會，田懷平，劉艷，等.ASE-GC-ECD法快速檢測葉類中藥材中25種有機氯類農藥多殘留[J].中華中醫藥學刊，2014，32（2）：317.

[6] 肖永慶，張村，李麗，等.構建飲片質量保障體系，確保中藥臨床療效[J].中國中藥雜志，2012，37（14）：2 178.

[7]周洪波，房志堅，楊立偉，等.固相萃取-GC-MS聯用法測定何首烏中有機氯農藥殘留量[J].中國藥房，2010，21（19）：777．

[8] 趙仁君.綠色中藥材：中藥資源可持續發展的希望[J].亞太傳統醫藥，2006（1），37.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：209．

[10] 國家對外貿易經濟合作部.藥用植物及制劑進出口綠色行業標準[S].WM2-2001.

[11] 金宏燕，劉衛，鄭旭煦，等.氣相色譜法測定三七中有機氯農藥殘留[J].食品科技，2011，36（3）：293.

[12] 梁金良，梁妍，周威，等.超聲波輔助萃取-固相微萃取-氣相色譜法檢測13種貴州苗藥的有機氯農藥殘留量[J].中國藥學雜志，2015，50（21）：1 917.

[13] 王珺，方成武，金琰琰，等.松潘地產大黃及其種植土壤有機氯農殘和重金屬分析[J].現代中藥研究與實踐，2014，28（6）：11.

[14] 高倩，花日茂，湯鋒，等.中藥材板藍根中20種農藥的多殘留快速分析方法[J].安徽農業大學學報，2010，37（1）：97.

（編輯：張 靜）

Determination of Organochlorine Pesticide Residues in 72 Chinese Herbal Medicine Tablets by GC

LIU Fang，OUYANG Huizi，CHAI Shiwei，WANG Qiang，MA Rong（The First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the detecting of organochlorine pesticide residues in 72 Chinese herbal medicine tablets.METHODS：The column was Agilent HP-5 elastic quartz capillary column，detector was63Ni source electron capture detector，the inlet temperature was 250Ⅱand the detector temperature was 300Ⅱ，temperature programmed，carrier gas was highpurity nitrogen，flow rate of carrier gas was 1 ml/min，and the injection volume was 5 μl，splitless injection.RESULTS：The linear range were 0.01-0.20 5 μg/ml for α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT（r were 0.999 5，0.996 4，0.999 6，0.993 7，0.999 3，0.999 7，0.999 1，0.998 3）；Limit of quantitation were 0.015，0.02，0.01，0.02，0.01，0.01，0.02，0.62 μg/ml；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3.0%；recovery was 71.2%-109.2%，RSD was 4.2%-9.8%（n＝9）.The overall detection rate of the organochlorine pesticides was 66.7%，and the overall compliance rate was 87.5%. CONCLUSIONS：The method is simple with good precision，stability and reproducibility，and can be used for the detection of organochlorine pesticide residues in Chinese herbal medicine tablets.

Gas chromatography；Organochlorine pesticide residues；Chinese herbal medicine tablet

R927

A

1001-0408（2016）36-5147-04

2016-04-18

2016-06-23）

＊副主任藥師。研究方向：中藥質量控制。電話：022-27432772。E-mail：tjcs008@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2016.36.34