微波消解-電感耦合等離子體質譜法測定健骨注射液中微量元素的含量

嚴 赟，王 娟，羅 軼（廣西壯族自治區食品藥品檢驗所，南寧 530021）

微波消解-電感耦合等離子體質譜法測定健骨注射液中微量元素的含量

嚴 赟＊，王 娟，羅 軼#（廣西壯族自治區食品藥品檢驗所，南寧 530021）

目的：建立測定健骨注射液中鋰（Li）、鈹（Be）、鎂（Mg）、鋁（Al）、釩（V）、鉻（Cr）、錳（Mn）、鐵（Fe）、鈷（Co）、鎳（Ni）、銅（Cu）、鋅（Zn）、砷（As）、硒（Se）、銣（Rb）、鍶（Sr）、銀（Ag）、鎘（Cd）、銫（Cs）、鋇（Ba）、汞（Hg）、鉛（Pb）、鈾（U）23種微量元素含量的方法。方法：采用微波消解-電感耦合等離子體質譜法。射頻功率為1 550 W，采樣深度為8 mm，冷卻溫度為2Ⅱ，碰撞氣為氦氣，載氣（氬氣）流量為1.03 L/min，積分時間為0.5 s，等離子氣流量為15 L/min，分子渦輪泵轉速為200 L/s，四級桿真空度為1.75×10－3Pa，采樣錐孔徑為1.0 mm，截取錐孔徑為0.4 mm，數據采集重復次數為3次。結果：Li、Be、Mg、Al、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、As、Se、Rb、Sr、Ag、Cd、Cs、Ba、Pb、U檢測質量濃度線性范圍均為0～100 ng/ml，Hg為0～2.0 ng/ml（r均≥0.999 6）；檢測限為0.005～1.652 μg/L；精密度、重復性試驗的RSD＜7%；所用儀器測定的準確度良好；加樣回收率分別為90.03%～96.11%、88.25%～96.76%、83.54%～92.01%、85.02%～99.18%、91.87%～94.62%、90.31%～92.28%、89.82%～96.99%、83.45%～89.56%、88.55%～92.39%、92.68%～95.18%、89.04%～93.81%、94.76%～103.11%、96.76%～101.39%、98.36%～105.27%、106.97%～119.89%、97.36%～103.46%、89.11%～90.73%、92.37%～95.62%、95.78%～98.22%、91.59%～97.18%、93.93%～97.12%、96.86%～99.22%、106.14%～110.07%，RSD＝0.48%～4.24%，n＝6。結論：該方法簡便、準確，適用于健骨注射液中23種微量元素的同時測定。

健骨注射液；微波消解-電感耦合等離子體質譜法；微量元素

健骨注射液由戰骨（莖）單味藥材組成，具有活血散瘀、強筋健骨、驅風止痛[1]的功效，臨床常用于治療頸椎病、肩周炎、骨性關節炎、肩峰下撞擊等[2-3]。微量元素作為藥物藥性物質基礎的重要組成部分，與藥物的藥性、藥效乃至毒副作用密切相關，因此微量元素的準確測定對于用藥有效性、安全性以及有害元素的限量標準制定都有著十分重要的意義。而健骨注射液現行質量標準中并無微量元素的測定方法。因此，筆者參考相關文獻[4-5]，采用微波消解-電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）建立了測定健骨注射液中23種微量元素含量的方法，以期為該制劑的質量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

7700X型電感耦合等離子體質譜儀（美國Agilent公司）；Mars6型微波消解儀（美國CEM公司）；Milli-Q Advantage A10型超純水機（美國Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

健骨注射液（廣西南寧百會藥業集團有限公司，批號：1304001、1304002、1304003，規格：2 ml/支）；國家標準物質柑橘葉（中國地質科學院地球物理地球化學勘查研究所，批號：BW10020）；鋰（Li）、鈹（Be）、鎂（Mg）、鋁（Al）、釩（V）、鉻（Cr）、錳（Mn）、鐵（Fe）、鈷（Co）、鎳（Ni）、銅（Cu）、鋅（Zn）、砷（As）、硒（Se）、銣（Rb）、鍶（Sr）、銀（Ag）、鎘（Cd）、銫（Cs）、鋇（Ba）、鉛（Pb）、鈾（U）多元素混合標準溶液（美國Agilent公司，批號：13-05YPY2，質量濃度均為10 μg/ml）；汞（Hg）標準溶液（中國計量科學研究院，批號：14087，質量濃度：1 000 μg/ml）；鍺（Ge）、銦（In）、鉍（Bi）、鈧（Sc）混合內標標準溶液（美國Agilent公司，批號：1-46MKBY2，質量濃度：10 μg/ml）；硝酸為分析級，水為高純水。

2 方法與結果

2.1 試驗條件

ICP-MS條件——射頻功率：1 550 W；采樣深度：8 mm；冷卻溫度：2Ⅱ；碰撞氣：氦氣；載氣（氬氣）流量：1.03 L/min；積分時間：0.5 s；等離子氣流量：15 L/min；分子渦輪泵轉速：200 L/s；四級桿真空度：1.75×10－3Pa；采樣錐孔徑：1.0 mm；截取錐孔徑：0.4 mm；數據采集重復次數：3次。微波消解程序：消解功率為1 600 W，以7Ⅱ/min升溫至120Ⅱ，保持5 min，再以5Ⅱ/min升溫至160Ⅱ，保持3 min，最后以3Ⅱ/min升溫至180Ⅱ，保持20 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合內標溶液 精密量取Ge、In、Bi、Sc混合內標標準溶液適量，用2%硝酸稀釋制成質量濃度為500 ng/ml的混合內標溶液。

2.2.2 混合外標溶液和Hg外標溶液 精密量取多元素混合標準溶液適量，加2%硝酸制成質量濃度分別為0、1、5、10、20、50、100 ng/ml的系列混合外標溶液。精密量取Hg標準溶液適量，加2%硝酸制成質量濃度分別為0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ng/ml的系列Hg外標溶液。

2.2.3 供試品溶液 取樣品2 ml，置于聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸6 ml，蓋好內蓋，旋緊外套，置于微波消解儀中，按“2.1”項下微波消解程序進行消解，放冷，置于120Ⅱ電熱板上加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續濃縮至約2 ml，放冷，轉移至50 ml塑料量瓶中，用水定容，搖勻，即得。

2.2.4 空白對照溶液 按“2.2.3”項下方法從“加硝酸6 ml”起操作，平行制備空白對照溶液。

2.3 線性關系考察

取“2.2.1”項下混合內標溶液適量，并取“2.2.2”項下系列混合外標溶液和Hg外標溶液適量，按“2.1”項下試驗條件進樣測定，分別記錄響應值As1、As2和As3。以As2（As3）與As1的比值（y）為縱坐標、待測元素質量濃度（x，ng/ml）為橫坐標進行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

表1 回歸方程、線性范圍與檢測限Tab 1 Regression equation，linear range and detection limit

2.4 檢測限考察

取“2.2.4”項下空白對照溶液適量，按“2.1”項下試驗條件重復進樣測定11次，計算儀器響應值的標準偏差，3倍標準偏差對應的各待測元素質量濃度即為檢測限，詳見表1。

2.5 精密度試驗

取多元素混合標準溶液、Hg標準溶液和“2.2.2”項下系列混合外標溶液、Hg外標溶液各適量，分別按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應值。結果，各元素各質量濃度響應值的RSD均在0.24%～6.89%（n＝6）范圍內，表明本方法精密度良好[6]。

2.6 準確度試驗

取國家標準物質柑橘葉適量，按“2.2.3”項下方法制備柑橘葉供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應值。結果，各元素的測定結果均在標準值范圍內，表明本試驗所用儀器測定的準確度良好。

2.7 重復性和加樣回收率試驗

取已知含量的樣品（批號：1304001）2 ml，分別精密加入加多元素混合標準溶液0.5 ml、Hg標準溶液0.5 ml，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應值并計算加樣回收率，結果見表2。因樣品中部分元素含量低于檢測限，故方法重復性以加樣回收率的RSD表示。由表2可知，本方法重復性良好。

表2 重復性和加樣回收率試驗結果（n＝6，%）Tab 2 Repatability and results of recovery test（n＝6，%）

2.8 樣品微量元素測定

取3批樣品各2 ml，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應值并計算樣品含量，結果見表3。由表3可知，各待測元素的測定結果均符合2015年版《中國藥典》（四部）的相關規定[6]。

3 討論

2015年版《中國藥典》（四部）規定中藥注射液按各品種最大日劑量計算，含Pb、Cd、As、Hg、Cu分別不得超過12、3、6、2、150 μg。按照健骨注射液用法用量及規格折算，其每天最大使用量為4 ml。本研究各待測元素按測得的含量計算，均符合《中國藥典》規定。目前，世界主要國家和組織對進口藥材中重金屬殘留量都有嚴格規定。《歐洲藥典》以及《日本藥典》均對中藥材或植物藥中重金屬元素作出限量規定，香港地區則針對中成藥注冊提出安全性要求，規定了重金屬元素的殘留量限度。但目前我國藥典僅對部分中藥材和中藥注射液有重金屬殘留量規定，鑒于在我國中藥材和中藥注射液使用量很大，為了提高藥物安全性，完善有害元素的限量和限度規定是很有必要的。本研究探索了以微波消解ICP-MS法測定健骨注射液中23種微量元素含量的方法，并使用標準物質和加樣回收對方法進行了驗證。結果表明，本方法簡便、準確，適用于健骨注射液中23種微量元素的同時測定。

表3 樣品含量測定結果（n＝2，ng/ml）Tab 3 Results of trace elements determination of samples（n＝2，ng/ml）

[1] 衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準：中藥成方制劑：第十四冊[S].1998：108.

[2] 王紅梅，陳俊亭，戚思華.健骨注射液頸椎旁神經阻滯聯合牽引治療神經根型頸椎病的臨床觀察[J].哈爾濱醫科大學學報，2013，47（4）：382.

[3] 李新洲，梁連錦.小針刀療法配合健骨注射液治療肩周炎的效果分析[J].右江民族醫學院學報，2013，35（5）：75.

[4] 黃訓瑞.ICP-MS法測定生脈注射液中5種重金屬元素的含量[J].中國藥房，2014，25（17）：1 619.

[5] 高廣慧，趙飛，王鳳嬌，等.ICP-MS標準加入法考察復方氨基酸注射液中鋁元素殘留量[J].藥物分析雜志，2014，34（12）：2 207.

[6] 國家藥典委員會：中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：4、376.

（編輯：劉 柳）

Contents Determination of Trace Elements in Jiangu Injection by Microwave Digestion-Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry

YAN Yun，WANG Juan，LUO Yi（Institute of Food and Drug Control，Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530021，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the contents determination of Li，Be，Mg，Al，V，Cr，Mn，Fe，Co，Ni，Cu，Zn，As，Se，Rb，Sr，Ag，Cd，Cs，Ba，Hg，Pb and U in Jiangu injection.METHODS：Microwave digestion-inductively coupled plasma mass spectrometry（MD-ICPMS）was adopted.RF power was 1 550 W，sampling depth was 8 mm，coolant temperature was 2Ⅱ，collision gas was He gas，the flow rate of the carrier gas（argon gas）was 1.03 L/min，integration time was 0.5 s，plasma gas flow rate was 15 L/min，molecular turbo pumb speed was 200 L/s，quadrupole degree of 1.75×10－3Pa，sampling cone aperture was 1.0 mm，interception cone aperture was 0.4 mm，and the data collection was repeated 3 times.RESULTS：The linear ranges of Li，Be，Mg，Al，V，Cr，Mn，Fe，Co，Ni，Cu，Zn，As，Se，Rb，Sr，Ag，Cd，Cs，Ba，Pb and U were all in 0-100 ng/ml（r≥0.999 6），Hg was 0-2.0 ng/ml（r≥0.999 6）；the limit of detection was 0.005-1.652 μg/L；RSDs of precisionand reproducibility tests were lower than 7%；the accuracy determined by the instrument in the test was good；recoveries were 90.03%-96.11%，88.25%-96.76%，83.54%-92.01%，85.02%-99.18%，91.87%-94.62%，90.31%-92.28%，89.82%-96.99%，83.45%-89.56%，88.55%-92.39%，92.68%-95.18%，89.04%-93.81%，94.76%-103.11%，96.76%-101.39%，98.36%-105.27%，106.97%-119.89%，97.36%-103.46%，89.11%-90.73%，92.37%-95.62%，95.78%-98.22%，91.59%-97.18%，93.93%-97.12%，96.86%-99.22%and 106.14%-110.07%，RSD＝0.48%～4.24%，n＝6.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate，and suitable for the simultaneous determination of 23 trace elements in Jiangu injection.

Jiangu injection；Microwave digestion-inductively coupled plasma mass spectrometry；Trace element

R927

A

1001-0408（2016）36-5153-03

2015-12-30

2016-03-14）

＊主管藥師。研究方向：藥物分析。電話：0771-5828708。E-mail：Yanyun1144@163.com

#通信作者：副主任藥師。研究方向：藥物分析。電話：0771-5828498。E-mail：luoyi20010211@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2016.36.36