平菇和榆黃蘑及其培養料中吡蟲啉的殘留分析方法*

常津毓，常 義，侯志廣，逯忠斌，王 巖，張 浩**

（1．吉林農業大學資源與環境學院，吉林 長春 130118；2．吉林省墑情監測中心，吉林 長春 130033）

〈病蟲害防治〉

平菇和榆黃蘑及其培養料中吡蟲啉的殘留分析方法*

常津毓1，常 義2，侯志廣1，逯忠斌1，王 巖1，張 浩1**

（1．吉林農業大學資源與環境學院，吉林 長春 130118；2．吉林省墑情監測中心，吉林 長春 130033）

建立了一種采用子實體噴藥、培養料拌藥，在不同時期采集樣品、提取和凈化的方法，以分析吡蟲啉在榆黃蘑、平菇及其培養料中的殘留量。結果表明，在榆黃蘑和平菇及其培養料中的吡蟲啉，其降解過程均符合一級動力學方程，在平菇、榆黃蘑和其培養料中，吡蟲啉半衰期分別為3．8 d、3．1 d和14．0 d。在收獲時期，平菇、榆黃蘑及其培養料中的吡蟲啉殘留量近似于美國規定的吡蟲啉在野生蘑菇農藥殘留限量（maximum residue limit，MRL）0．02 mg·kg-1。表明試驗建立的方法準確可靠，為在平菇和榆黃蘑上制定MRL值提供了科學依據。

吡蟲啉；食用菌；殘留；消解動態

吡蟲啉是硝基亞甲基類殺蟲劑，化學式為C9H10ClN5O2，由德國拜耳公司于20世紀80年代中期研發，于1991年投放市場，目前已在60種農作物上使用。在20世紀90年代初期，中國開始研發吡蟲啉，于1992年生產登記[1]。吡蟲啉具有廣譜、低毒、高效，不易產生抗性，對動植物安全等特點，并兼具胃毒、觸殺和內吸等多重交互作用。主要防治對象是同翅目、半翅目昆蟲，如飛虱、粉虱、蚜蟲、葉蟬、薊馬等；對雙翅目、鞘翅目和鱗翅目的某些害蟲，如稻負泥蟲、稻象甲、潛葉蛾等也有防治效果[2-3]。吡蟲啉作為高效殺蟲劑，能有效防治菌類生長過程中出現的蟲害[4]。食用菌子實體中含有豐富蛋白質，其含量約為鮮重3%～4%，是一種綠色健康食品，受到廣泛關注[5-6]。目前吡蟲啉作為一種高效、廣譜的農藥已經在茶葉、糧食、水果等作物中廣泛應用，科研人員對其的殘留動態規律進行了大量研究[7-8]，但在食用菌方面未見報道。本文建立一種高效、實用的平菇和榆黃蘑中吡蟲啉殘留的分析方法，為食用菌安全施藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

10%吡蟲啉可濕性粉劑，江蘇龍燈化學有限公司。弗羅里硅土、氯化鈉、無水硫酸鈉、乙腈、丙酮、正己烷均為分析純；吡蟲啉農藥標準樣品純度均為99%；Agilent 1100A液相色譜儀。

1.2 試驗方法

1．2．1 田間試驗設計

（1）培養料試驗設計

試驗在吉林農業大學菌菜栽培基地進行。處理1：10%吡蟲啉可濕性粉劑按1%拌入培養料中（即把吡蟲啉30%可濕性粉劑10 g放在1 000 g培養料混合均勻）；處理2：空白對照。

施藥后0、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、14 d、21 d、28 d、35d、42 d、60 d分別在試驗組和空白對照組采集培養料各1．0 kg，密封冷凍待測。

（2）子實體試驗設計

共設5個處理3次重復。處理1：10%吡蟲啉可濕性粉劑2 g·m-2兌水1 000 mL，噴施于平菇子實體上；處理2：10%吡蟲啉可濕性粉劑2 g·m-2兌水1 000 mL，噴施于榆黃蘑子實體上；處理3：空白對照。

在平菇和榆黃蘑子實體生長到直徑約2 cm時施藥1次，于施藥后0、1 d、3 d、5 d、7 d、10 d分別在試驗組和空白組收集樣品各500 g，密封冷凍待測。

（3）培養料和子實體最終殘留試驗

每次收獲時都采集子實體樣品，樣品密封后存放于冰箱中待測；培養料樣品則在最終收獲時采集，保存待測定。

1．2．2 分析測定條件

Agilent 1100液相色譜儀紫外檢測器C18反相色譜柱，波長230 nm，水∶乙腈=30∶70（v∶v），柱溫30℃，流速0．8 mL·min-1；進樣量為10 μL。

1．2．3 樣品處理

（1）子實體提取與凈化

準確稱取平菇、榆黃蘑樣品各5．0 g，將其加入裝有30 mL乙腈和10 mL蒸餾水的組織搗碎機中，勻漿5 min。減壓抽濾，濾液放入100 mL裝有15．0 g氯化鈉的具塞量筒，用手搖晃1 min，靜置1 h使其分層。

取250 mL圓底燒瓶，將20 mL上層液移入其中，并置于旋轉蒸發儀上，待提取液濃縮至近干。將3．0 g無水硫酸鈉、3．0 g弗羅里硅土、5．0 g無水硫酸鈉裝入玻璃層析柱。先用10 mL正己烷預活化層析柱，用丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）的混合液溶解濃縮液，過層析柱，然后用20 mL丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）的混合液淋洗層析柱，最后用50 mL丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）混合液洗脫層析柱，最終收集70 mL洗脫液。取圓底燒瓶，將收集到的全部（70 mL）洗脫液轉移到瓶中，并使用旋轉蒸發儀將其旋干，用乙腈定容至1．0 mL，待液相色譜測定。

（2）培養料提取與凈化

取三角瓶，加入30 mL乙腈和5 mL蒸餾水，稱取食用菌培養料5．0 g置于三角瓶中，將三角瓶置于30℃水浴振蕩器上振蕩1 h（200 r·min-1）。靜置10 min后，減壓抽濾，濾液100 mL放入裝有15．0 g氯化鈉具塞量筒，用手搖晃1 min，靜置1 h使其分層。濃縮與凈化同上。

（3）添加回收率試驗

以榆黃蘑和平菇2種食用菌及其培養料為對象，分別在0．1 mg·kg-1、0．5 mg·kg-1、2．5 mg·kg-1三個濃度水平下做添加回收試驗，5次重復。

2 結果與分析

2.1 標準曲線繪制

采用外標法定量，各組分的峰面積（y）和質量濃度（x，mg·kg-1）建立線性關系方程。吡蟲啉的標準方程為y=35．118x＋4．0736，r=0．9951。

2.2 添加回收率試驗結果

2．2．1 回收率試驗結果

添加回收率試驗結果見表1。試驗結果表明，添加回收率均在80%～120%，滿足農藥殘留分析的要求。

2．2．2 最小檢出量與最低檢測濃度

吡蟲啉在所設定儀器的條件下，最小檢出量為0．5 ng。在平菇、榆黃蘑及其培養料中的最低檢測濃度分別為0．02 mg·kg-1、0．0212 mg·kg-1、0．0204 mg·kg-1。

2.3 消解動態結果

吡蟲啉在培養料中的消解動態曲線見圖1。

從圖1看出，吡蟲啉在培養料中消解曲線方程為C=13．789e-0．0652t，相關系數R2=0．9347，半衰期14．0 d。吡蟲啉在2種食用菌中消解動態曲線見圖2。

從圖2可知，吡蟲啉在平菇子實體中的消解曲線方程為C=1．527e-0．197t，相關系數R2=0．9643，半衰期3．8 d（培養料不拌藥）；在榆黃蘑子實體中的消解曲線方程為C=1．2827e-0．2308t，相關系數R2=0．993，半衰期3．1 d（培養料不拌藥）。

表1 吡蟲啉添加回收率試驗結果Tab．1 Results on spiked recoveries of imidacloprid

圖1 吡蟲啉在培養料中的消解動態曲線Fig．1 Digestion dynamic of imidacloprid in substrates

圖2 吡蟲啉在2種食用菌中的消解動態曲線Fig．2 Digestion dynamic of imidacloprid in two edible fungi

2.4 最終殘留結果

在收獲期平菇和榆黃蘑的子實體中吡蟲啉殘留量全都小于0．02 mg·kg-1；其培養料中殘留量約等于0．02 mg·kg-1。

3 結論與討論

本文以平菇、榆黃蘑、及其培養料為研究對象，建立了一種簡便、高效的檢測吡蟲啉殘留分析的方法。平均添加回收率分別為80．5%～100．3%，符合農藥殘留分析標準。最小檢出量為0．5 ng，最低檢出濃度為0．02 mg·kg-1。吡蟲啉在榆黃蘑上原始沉積量為1．2546 mg·kg-1，在平菇上的原始沉積量為1．4564 mg·kg-1，培養料中原始沉積量為11．0643 mg·kg-1。吡蟲啉在榆黃蘑、平菇及其培養料中半衰期分別為2．6 d、2．7 d和14．0 d。

本文建立的殘留分析方法回收率良好，滿足農藥殘留分析的要求。伴隨著吡蟲啉應用日益廣泛，我國規定了其在其它作物上的MRL值，但沒有規定在食用菌上最高殘留限量值[9]，本試驗的目的是為規定我國食用菌吡蟲啉的MRL值提供參考。吡蟲啉在菌類子實體及培養料中的降解過程均符合一級動力學方程，屬于易降解農藥。美國規定吡蟲啉在野生蘑菇的農藥最高殘留限量（MRL值）為0．2 mg·kg-1[10]。建議我國規定吡蟲啉在食用菌中的MRL值為0．2 mg·kg-1。

[1]王振榮，李布青．農藥商品大全[M]．北京：中國商業出版社，1996：306-307．

[2]張翔輝．食用菌中多菌靈和噻菌靈殘留分析方法研究[D]．長春：吉林農業大學，2007．

[3]唐俊，操海群，花日茂，等．氣質聯用測定食用菌中農藥殘留[J]．安徽農業大學學報，2011，38（4）：549-553．

[4]管道平，胡清秀．食用菌農藥殘留限量與產品質量安全[J]．中國食用菌，2008，27（2）：3-6．

[5]胡清秀，宋金俤，謝艷麗．食用菌農藥殘留控制研究[J]．中國食用菌，2009，28（1）：55-57，64．

[6]王孝輝，宛曉春，侯如燕．茶葉中吡蟲啉農藥殘留的液相色譜檢測方法[J]．茶葉科學，2012（3）：203-209．

[7]Sauter H,Steglich W,Anke T．Strobilurins:evolution of new class of active substances[J]．Angew Chem Int Ed,1999,38 (1):1328-1349．

[8]Monika Gupta,Anupam Sharma,Adarsh Shanker．Dissipation of imidacloprid in Orthodox tea and its transfer from made tea to infusion[J]．Food Chemistry,2008,106(1):158-164．

[9]王孝輝．茶葉中吡蟲啉殘留檢測方法及殘留消解動態的研究[D]．合肥：安徽農業大學，2012．

[10]Guoqiang Chen,Pengying Cao,Renjiang Liu．A multiresidue method for fast determination of pesticides in tea by ultra performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry combined with modified QuEChERS sample preparation procedure[J]．Food Chemistry,2011,125 (4):1406-1411．

Residual Dynamic of Imidacloprid in Pleurotus ostreatus, Pleurotus citrinopileatus and Its Substrates

CHANG Jin-yu1,CHANG Yi2,HOU Zhi-guang1,LU Zhong-bin1,WANG Yan1,ZHANG Hao1
(1．College of Resource and Environment,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China; 2．Jilin Moisture Content Monitoring Center,Changchun 130033,China)

This paper has made a method which spraying imidacloprid on fruiting bodies,and mixing substrates with the pesticide to analyze the residues of imidacloprid in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinopileatus．The results showed that imidacloprid of the degradation process in P.ostreatus,P.citrinopileatus and their substrates were in line with a kinetic equation, half-period of imidacloprid in two kind of edible fungi and substrates were 3．1 d-3．8 d,and 14．0 d respectively．The imidacloprid residues at harvest period of P.ostreatus,P.citrinopileatus and substrates were likely equal to the MRL which the US ruled in fungi is 0．02 mg·kg-1．The method was accurate and reliable,providing a scientific basis for our country in the MRL established on edible fungi．

imidacloprid;edible fungi;residues dissipation;dynamics

S646.9

A

1003-8310（2016）01-0062-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2016．01．017

吉林省世行貸款農產品質量安全項目（2011-Z28）。

常津毓（1988-），男，在讀碩士研究生，主要從事農藥殘留技術研究。E-mail:351649711＠qq．com

**通信作者：張浩（1964-），女，博士，教授，主要從事農藥環境毒理及生物測定研究。E-mail:haozhang100＠163．com

2015-11-15