脂肪酸代謝異常是二甲基亞硝胺誘導的大鼠肝纖維化發病機制之一＊

邊艷琴，曹紅燕，李建緣，武 超，孫潤菲，馮 輝，何小鵑，姜 淼，孫明瑜＊＊

（1.上海中醫藥大學附屬曙光醫院 上海中醫藥大學肝腎疾病病證教育部重點實驗室 上海中醫藥大學肝病研究所 上海 201203；2.上海市中醫藥研究院 上海 201203；3.上海光華中西醫結合醫院 上海 200052；4.中國中醫科學院中醫臨床基礎醫學研究所 北京 100700）

脂肪酸代謝異常是二甲基亞硝胺誘導的大鼠肝纖維化發病機制之一＊

邊艷琴1,2,3，曹紅燕1,2，李建緣1,2，武 超1,2，孫潤菲1,2，馮 輝3，何小鵑4，姜 淼4，孫明瑜1,2＊＊

（1.上海中醫藥大學附屬曙光醫院 上海中醫藥大學肝腎疾病病證教育部重點實驗室 上海中醫藥大學肝病研究所 上海 201203；2.上海市中醫藥研究院 上海 201203；3.上海光華中西醫結合醫院 上海 200052；4.中國中醫科學院中醫臨床基礎醫學研究所 北京 100700）

目的：二甲基亞硝胺（DMN）誘導的大鼠肝纖維化模型是經典的動物模型，其病理變化與人類肝纖維化發生相類似。普遍觀點認為， DMN化學刺激導致肝細胞的損傷，是誘導肝纖維化發生的直接原因，然而其具體的發病機制并不清楚。糖脂代謝異常是脂肪性肝病發生的主要原因之一。糖脂代謝紊亂是否也在DMN誘導肝纖維化模型中占有重要地位，至今尚不清楚。本研究采用全基因芯片技術與生物信息技術相結合方式，研究糖脂代謝異常與DMN誘導肝纖維化之間關系。方法：雄性Wistar大鼠每周前3天連續腹腔注射10 mg·kg-1DMN，持續4周，正常組大鼠給予等量生理鹽水。造模2周末，正常組和模型組各5只大鼠做動態觀察；造模4周末，剩余大鼠被全部處死，收集肝臟標本。進行肝組織全基因芯片分析，將結果導入生物信息分析軟件IPA進行分析。結果：2周模型組與正常組之間、4周模型組與正常組之間共有55個共同差異基因（logRatio＞2）。共同差異基因構成的分子網絡，主要參與了9條信號通路，它們與炎癥、免疫、肝纖維化、脂代謝和血管新生有密切關系。在造模2周（肝纖維化形成期）時，以脂肪酸代謝異常為主要表現；在造模4周（肝硬化形成期）時，以細胞增殖為主要表現。結論：脂肪酸代謝紊亂可能是DMN誘導肝纖維大鼠發病機制之一。

肝纖維化 大鼠 脂肪酸代謝 基因分析 發病機制

二甲基亞硝胺（Dimethylnitrosamine，DMN）誘導的肝纖維化大鼠模型是研究肝纖維化疾病常用的動物模型，因其造模時間短，肝纖維化形成穩定，且與人類肝纖維化早期改變及膠原纖維化沉積特點非常相似，停止染毒后又不易自行消退恢復，故是研究肝纖維化病理機制、血清標志物評價及藥物治療等的經典動物模型之一[1]。DMN顯著的肝毒性已得到大家公認，它在體內通過代謝為具有高反應活性的代謝物，例如乙醛[2，3]，與大分子如蛋白質游離氨基酸、巰氫基團等反應，破壞這些大分子結構；與細胞膜或線粒體膜表面膜蛋白結合形成復合物，從而造成肝細胞壞死，細胞外基質進行性增加[4]。

機體是一個復雜的生命體。越來越多的研究表明，生物系統的穩定性源于生物系統的網絡結構[5]。機體內生物網絡的穩定性相較于單一的基因或蛋白變化對機體表型的影響更大，這可能與基因冗余功能和信號通路的代償功能有關[6]。多數情況下，疾病發生，尤其是復雜類疾病發生的分子機制是細胞內的調控網絡異常所致[7]。DMN誘導的纖維化形成一直以來都被認為是DMN的肝毒性所致，而由DMN引起的生物網絡異常進而導致纖維化形成的生物學過程，目前并不清楚。

隨著生物知識的不斷積累和多層次“組學”數據的大量涌現，對復雜疾病的研究模式從以往的只關注某個分子擴展到對分子之間相互作用形成的生物分子網絡的系統分析，為揭示疾病形成的生物學過程提供幫助。本研究采用全基因芯片技術與生物信息學分析相結合的方式，來探索DMN誘導肝纖維化大鼠模型形成的分子網絡機制，為DMN肝纖維大鼠模型更好地應用于科學研究提供證據支持。

1 材料

1.1 動物

雄性Wistar大鼠，清潔級，體質量200±15 g，購自中國科學院上海實驗動物中心，動物合格證：SCXK（滬）2008-0003。上海中醫藥大學實驗動物中心飼養、造模和觀察，自由飲食。動物房使用許可證號：SYXK（滬）2009-0069。

1.2 試劑

DMN（和光純藥工業株式會社，批號：KWM6890）；二甲苯（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20101020）；無水乙醇（分析純，上海振興化工一廠，批號：20100115）；石蠟（德國Leica公司，批號：39601006）；甲醛[化學純，中國醫藥（集團）上?；瘜W試劑公司，批號：JH20070301]；甲醇（分析純，上?；瘜W試劑有限公司，批號：20090620）；天狼星紅Sirus Red（美國sigma公司，批號：43665）；中性樹膠（中國醫藥集團上?；瘜W試劑公司，批號：20061018）。Trizol、雜交試劑盒、體外轉錄的標記試劑盒、單循環cDNA合成試劑盒、生物素化抗體、鏈霉素和藻紅蛋白等試劑及基因芯片掃描儀3000、基因芯片洗滌工作站（Affymetrix Fluidics Station 450）、Affymet rix基因芯片雜交爐640、GeneChipó操作軟件1.2等儀器、軟件均由上海生物芯片公司提供。

2 方法

2.1 造模方法

參照Ala-Kokko方法造模[8]。模型組大鼠以10 mg·kg-1劑量于每周前3天連續腹腔注射0.5% 的DMN溶液（以生理鹽水稀釋），持續共4周。造模2周末，等量來自正常和模型組的大鼠被處死；造模4周末，處死全部大鼠。正常對照組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水。

2.2 樣品的采集與處理

在實驗2周末和4周末，待處死大鼠均用3%戊巴比妥鈉以2 mL·kg-1劑量腹腔注射麻醉后，仰臥位固定，打開腹腔，經下腔靜脈采血，待血液抽盡后，摘取肝臟，然后從肝臟最厚一葉切取1.0 cm× 1.0 cm大小肝組織2塊，10%中性福爾馬林固定，其余肝組織裝于干凈EP管中，-70℃保存備用。選取一套標本脫水、包埋、切片，做天狼星紅染色，觀察組織病理學變化。

2.3 肝組織天狼星紅染色

石蠟切片60℃烘片30 min→二甲苯I 10 min→二甲苯II 10 min→無水乙醇I 5 min→無水乙醇II 2 min→95%乙醇2 min→80%乙醇2 min→70%乙醇2 min→自來水沖洗→甩干、擦邊、滴加天狼星紅染液，置濕盒，37℃，30 min→100%乙醇分化→脫水，透明，中性樹脂封固。

膠原纖維增生程度分期標準：0期：正常肝臟，無明顯膠原纖維增生；Ⅰ期：膠原纖維增生，中央靜脈和門脈區有少量星狀膠原纖維束放散，但無間隔形成；Ⅱ期：膠原纖維增生，中央靜脈和門脈區結締組織變厚，由此向四周伸出纖維索，形成不完全間隔；Ⅲ期：膠原纖維大量增生，有個別菲薄的完全間隔形成，或較厚的不完全間隔即將形成假小葉；Ⅳ期：膠原纖維大量增生，完全纖維間隔較厚，假小葉大量形成。

2.4 肝組織基因芯片雜交實驗

采用Trizol試劑盒提取總RNA→純化→合成cDNA→純化，參照BioArray（TM）HighYield（TM）RNA轉錄標記試劑盒方法合成cRNA→將cRNA片段雜交于Afymetrix Rat 2302.0芯片→洗脫→染色→掃描芯片?；蛐酒篈fymetrix Rat 2302.0基因表達譜芯片，共載基因探針31 099個。

2.5 基因芯片的數據處理

首先將信號進行標準化和基于模型的表達指（Model Based Expression Index，MBEI）分析，得出校正后的數值，用于差異基因分析。特征性基因表達譜分析采用聚類分析法。特征性基因的篩選采用Fold change法，兩個芯片的每個基因之間倍數通過表達指數比值得出，以識別特征性基因，并用MBEI的標準誤差來計算倍數的可信區間。本研究在組間進行比較時，以倍數的可信下限作為基因表達上調或下調的評判標準。

2.6 差異基因篩選

由于每組樣本中重復隨機樣本數量較少，一般較難達到標準正態分布的參數F檢驗標準，為了減少小樣本造成的差異篩選誤差，利用隨機抽樣和小樣本統計學的二次檢驗，計算樣本間差異的顯著性水平（P值）和誤判率（FDR），得出真正代表多組樣本間顯著性差異的基因。選取差異2倍以上的上調及下調的差異基因進行分析。

2.7 生物信息分析

將篩選所得2周DMN組與Control組比較差異基因、4周DMN組與Control組比較差異基因以及它們的共同差異基因依次導入（Ingenuity Pathway Analysis，IPA）生物分析軟件，分別構建基于2周DMN組與Control組比較所得差異基因的相互作用網絡、4周DMN組與Control組比較所得差異基因的相互作用網絡以及它們差異基因的相互作用網絡。利用軟件中的Network、Canonical Pathway、Functions及Comparison等功能模塊進行分析，獲得顯著差異基因參與調控網絡及重要的生物學通路。同時，比較兩個時間節點參與調控的差異基因的生物學功能，尋找和分析二者的生物學通路的異同。

圖1 各組大鼠病理結果

3 結果

3.1 各組大鼠肝組織病理變化

HE染色可以反應組織的炎癥變化。如圖1A所示， Control組大鼠肝細胞結構清晰，排列緊密。造模2周（2周DMN）時，大量炎細胞在肝竇內彌漫浸潤，有少量壞死組織，肝臟結構出現紊亂，表明炎癥反應正在發生；造模4周（4周DMN）時，肝組織出現較廣泛的肝細胞壞死、小葉中心性出血及灶狀壞死形成，纖維組織大量增生，肝小葉結構消失，肝功能顯著異常，羥脯氨酸含量明顯增加[9-11]，提示纖維化和肝硬化的形成。HE染色結果提示，2周DMN組大鼠是以炎癥為主要病理表現，而4周DMN組大鼠是以纖維化和肝硬化形成為主要表現，這與以往研究結果一致[12，13]。膠原纖維在中央靜脈和門脈區開始沉積并向肝竇蔓延是肝纖維形成的標志。如圖1B所示，Control組僅血管壁見少量膠原纖維的沉積；造模2周（2周DMN）時，中央靜脈和門脈區結締組織明顯增厚，并向肝竇蔓延伸出纖維索，形成不完全的間隔，提示纖維化已經形成；造模4周（4周DMN）時，膠原纖維相較2周時明顯增多、增厚、變粗，相近的膠原纖維索相互連接包繞肝小葉形成假小葉，肝臟組織結構被改變，大量膠原沉積在肝臟，提示肝纖維化向肝硬化的轉變。羥脯氨酸是膠原水解后的定量指標，可以直觀反應膠原含量的高低，與纖維化程度呈正相關[14]。本研究結果與以往研究結果一致[15]，膠原沉積呈遞增趨勢，提示本研究DMN模型造模成功。

表1 各組顯著表達差異基因數目（Ratio＞2）

表2 共同差異基因相關的9條生物學信號通路

3.2 差異基因分析

選取變化倍數大于2倍的差異基因，并對比其中共同差異基因，結果如表1所示，2周DMN與正常組比較顯著差異基因共有133個，4周DMN與正常組比較顯著差異基因共有98個，其中共同差異基因共有55個。

3.3 共同差異基因參與調控的通路、網絡及生物學功能

將55個共同差異基因導入生物信息分析軟件，分析其參與調控的通路、網絡及生物學功能。如圖2所示，共同差異基因參與通路主要有9條（如圖2A所示），根據-log（p-value）值從高到底排列，排在最前邊的表示其參與通路的比重最大。結果顯示，調控肝纖維的主要通路Hepatic Fibrosis/ Hepatic Stellate Cell Activation排在最前邊，表明篩選所得顯著差異基因與肝纖維化相關，是目標基因。除肝纖維外，共同差異基因也參與脂代謝、炎癥、免疫和血管新生的調控，其中對脂代謝調控更加顯著（表2）。如圖2B所示，共同差異基因參與調控的網絡是以SREBF1、TNF、MYC和NF-κB為核心的網絡，共同參與調控肝纖維化的形成。

圖3 2周DMN組與Control組、4周DMN組與Control組顯著差異基因分別參與生物學功能及功能的上游調控基因

3.4 2周DMN組、4周DMN組差異基因參與生物學功能及上游調控基因

對2周DMN組和4周DMN組差異基因參與生物學功能及上游調控基因進行比較研究，結果如圖3A所示，2周DMN組差異基因參與生物學功能主要與脂肪酸代謝相關；4周DMN組差異基因參與生物學功能主要與細胞增殖相關。作者對排名第1位的生物學功能調控基因進行分析，如圖3B所示，參與調控脂肪酸代謝的基因分別有SCD/SCD2、FASN、VIM、ACLY、FABP4和PTGS1（上調基因），ACSL1、CPT1A和FABP7（下調基因）；參與調控細胞增殖的基因較多，排名前5位的分別是COL1A1、NPY、Kng1、CTGF和CX3CL1（上調基因），CA3、FABP7、CYP2B6和INHBA（下調基因）。進一步對參與調控脂肪酸代謝和細胞增殖的上游調控基因進行分析，如圖3C結果提示，MLXIPL是調控脂肪酸代謝的上游調控基因，在脂肪酸代謝中被預測處于激活狀態，促進FASN、SCD等基因表達，而抑制FGF21基因表達；TNF、MYC和TGFB1是調節細胞增殖的主要上游調控基因；這提示除了炎癥反應外，脂肪酸代謝異常是DMN誘導膠原增生、肝纖維化發生的另一重要原因。

4 討論

動物模型的建立為研究人類疾病的發病機制、預防和治療提供了一定的實驗依據。人們對肝纖維化形成機制的了解，很大程度上取決于可靠的、可重復的動物模型、各模型之間的共同點及人類肝纖維化發生過程的相關性。為了篩選有效的治療肝纖維化藥物和研究藥物作用機制，建立一個與人類疾病相似的肝纖維化動物模型極為重要。DMN誘導的肝纖維化模型是經典的肝纖維化動物模型[8]，在國內外肝纖維化發生機制和篩選藥物研究中被廣泛使用。既往認為DMN的肝細胞毒性導致肝細胞壞死，進而引起炎癥反應和膠原的沉積，但對其導致的代謝系統紊亂機制的研究甚少。本研究借助生物信息分析技術，對造模2周和4周模型差異基因與共享差異基因生物網絡及生物學功能進行研究，發現在肝纖維化形成的不同時間點，差異基因調控的生物學功能不同，2周差異基因參與調控脂肪酸代謝為主，4周差異基因參與調控細胞增殖為主，而共享差異基因代表肝纖維化的整個過程調控基因，主要與纖維化形成、炎癥、免疫、脂代謝、血管新生等生物學功能相關[16-18]。

脂代謝異常一直以來被認為是非酒精性脂肪性肝病和非酒精性脂肪性肝炎發生的重要原因，本課題組的研究結果發現，脂代謝的異常也是DMN誘導的肝纖維發生的一個重要原因。脂肪酸代謝是肝臟內重要的生理過程，正常狀態下處于動態平衡。脂肪酸代謝，在過去僅被認為是一個能量合成存儲途徑。然而，越來越多的研究表明，脂肪酸代謝是一個動態過程，與人體內分泌、自分泌和旁分泌信號網絡密切相關，參與調控人體許多生理代謝過程[19，20]。脂肪酸代謝異常與腫瘤、高血壓、糖尿病、冠心病、脂肪肝等多種代謝性疾病密切相關[21-23]。

脂肪酸合成受脂肪酸合成酶（Fatty Acid Synthase，FASN）的調節，FASN是一種多功能酶，對于脂肪酸的合成起著至關重要的作用。在還原型輔酶II存在情況下，FASN負責乙酰輔酶和丙二酰輔酶A從頭合成長鏈軟脂酸（棕櫚酸酯）的所有催化步驟[24]。FASN的表達水平可以直接反應細胞和組織的脂肪合成能力，FASN啟動子活性的降低，可以明顯減少肝臟中甘油三酯水平及肝臟中脂肪的生成[25]。硬脂酰輔酶A脫氫酶[Stearoyl-CoA Desaturase（delta-9-desaturase），SCD]是脂肪酸代謝的另一種關鍵酶，它可以催化飽和脂肪酸的第一個雙鍵向acyl-CoA中加成，轉化為單一不飽和脂肪酸，為甘油三酯、膽固醇和膜磷脂等提供底物[26，27]。最新的研究結果顯示，SCD所結合的脂肪酸的?；溈杀籗CD屏蔽，使其形狀處于一個特定的構型，這為脂肪酸代謝的選擇性提供結構基礎[28]。本研究結果發現，FASN、SCD基因在2周DMN中表達均明顯上調，且處于上調基因的前2位，提示在DMN誘導2周模型中，脂肪合成顯著增加。脂肪酸合成延長 酶6（ELOVL fatty acid elongase，E LOVL6）是長鏈脂肪酸合成的啟動酶和延長的限速酶，它的清除可以阻斷油酸的合成，但對脂肪酸的合成和胰島素抵抗沒有作用[29]。本研究結果顯示，ELOVL6 在2周DMN模型中表達上調，提示DMN誘導大鼠纖維化模型中，同時存在飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸合成異常。M LX相互作用蛋白（MLX Interacting Protein-Like，MLXIPL）是內分泌特異的轉錄因子，是溝通糖代謝與脂代謝的重要轉錄調節因子[30]。對肥胖者和正常人肝臟以及脂肪組織中的M LXIPL 的mRNA和蛋白表達的比較研究結果顯示，肥胖者肝臟中MLXIPL的mRNA和蛋白表達要高于正常人，大網膜和皮下脂肪組織中M LXIPL的mRNA和蛋白表達要低于正常人，而大網膜和皮下脂肪前體細胞中的MLXIPL的mRNA和蛋白表達要高于正常人[31]，這提示MLXIPL在調節肝臟脂代謝和脂肪組織脂肪代謝方面具有重要作用。本研究對DMN誘導的2周模型差異基因分析結果提示，MLXIPL是調節脂肪酸代謝的上游基因，它可以促進FASN、SCD和E LOVL6等脂肪酸合成調節催化酶的上調，被預測顯著激活，表明DMN誘導的大鼠肝纖維化模型存在明顯的糖脂代謝紊亂[32]，以基因轉錄水平調控的脂肪酸合成增加為主。

既往研究結果顯示，DMN誘導4周肝纖維化大鼠肝組織SOD活性下降，而Hyp和MDA表達明顯增加，且與SOD呈顯著負相關[33]，表明DMN模型存在脂質過氧化損傷表現。脂肪合成大于消耗，就會導致肥胖。本研究結果顯示，在2周模型中，除炎癥反應外，脂肪酸合成增加是另一主要表現且伴隨肝體比值的增加（結果未提供）；在4周模型中，則主要以細胞增殖為主伴隨肝體比下降（未提供），表明DMN誘導大鼠模型在從肝纖維化向肝硬化發展期，肝臟先增大后減小，脂肪酸合成先增加后減少，與肝臟脂質過氧化不一致，這提示DMN誘導的脂質過氧化損傷與脂肪酸代謝異常引起的脂肪沉積可能不同步。最新研究發現，FGF21可以調節脂肪酸向線粒體轉運，減少肝臟脂質堆積，促進其線粒體氧化反應發生和能量產生[34]。本研究發現，FGF21在脂肪酸代謝過程中是下調的，提示脂肪合成與脂質過氧化可能存在動態平衡——脂肪酸向線粒體轉運減少，促使脂肪消耗減少，合成增加；脂肪合成增加，能量消耗增加，當能量不足時，脂肪酸才向線粒體轉運增加，脂質過氧化發生，從而促使脂肪酸消耗增加，合成減少，脂肪堆積減少；脂肪在肝臟的大量堆積，刺激肝臟炎癥因子釋放，導致FASN等脂肪酸合成酶受損[35]，脂肪酸合成減少。

本研究發現，DMN誘導4周差異基因主要參與調控細胞的增殖過程，其上游是TNF、MYC和TGFB1。TNF是促使炎癥發生的重要基因，在4周DMN中處于自我抑制狀態；MYC是一組原癌基因，可調節細胞生長、分化以及惡性轉化等生物學功能，TGFB1是調節細胞外基質增加的重要基因，提示在DMN誘導4周模型中，以細胞外基質增加為主的細胞增殖過程的存在。對2周和4周差異基因的共享基因進行構網研究發現，以SREBF1、TNF、MYC和NF-κB為核心的網絡構成肝纖維化發生的調控網絡。固 醇調節單元連接轉錄因子1（Sterol Regulatory Element Binding Transcription Factor 1，SR EBF1）是編碼脂代謝調節因子的重要轉錄因子，主要調節脂肪酸、磷脂和三酰甘油的代謝，與胰島素抵抗、2型糖尿病、脂肪肝等密切相關[36，37]，可調節FASN蛋白的合成[38]；NF-κB是已知的炎癥核轉錄調節因子，提示在肝纖維化發生的全過程中，脂肪酸代謝和炎癥發生是DMN誘導大鼠肝纖維化發生的兩個重要原因，這與表2分析結果一致。

本研究結果顯示，從肝纖維化發展到肝硬化（從2周DMN到4周DMN），脂肪酸合成先增加后減少，其具體機制可能是脂肪酸合成酶上調，促使脂肪酸合成增加，脂肪酸向線粒體轉運減少，導致線粒體脂肪酸氧化反應消耗減少，進一步導致脂肪酸合成增加，大量脂質在肝臟積累；大量脂質在肝臟的堆積，促使肝臟功能受損——尤其是肝臟轉錄期基因的表達，刺激肝臟炎癥因子的釋放[39]，導致炎癥反應的發生；炎癥因子的大量產生，進一步導致F ASN等脂肪酸合成酶受損[35]，從而促使脂肪酸合成減少，膠原生成細胞增殖增加，最終導致肝硬化的形成?？梢姡l生在炎癥反應前的脂肪酸代謝異常，可能是啟動DMN誘導肝纖維化大鼠發病的重要機制之一。

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Bian Yanqin1,2,3, Cao Hongyan1,2, Li Jianyuan1,2, Wu Chao1,2, Sun Runfei1,2, Feng Hui3, He Xiaojuan4, Jiang Miao4, Sun Mingyu1,2

(1. Institute of Liver Disease, Shuguang Hospital Affiliated with Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Key Laboratory of Liver and Kidney Diseases of the Ministry of Education,

Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 2. Shanghai Institute of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 3. Guanghua Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine, Shanghai 200052, China; 4. Institute of Basic Research in Clinical Medicine, China Academy of Chinese Medicine Sciences, Beijing 100700, China)

Fatty Acid Metabolic Disorder is One of Mechanisms of Dimethylnitrosamine Induced Hepatic Fibrosis Rats

Dimethylnitrosamine (DMN)-induced hepatic fibrosis rat model is a classical model in hepatic fibrosis research over decades. It is recognized as the same pathological changes of hepatic fibrosis in chemical injury as in human. DMN chemical stimulation which induced hepatocyte injury is the direct cause of hepatic fibrosis. However, its pathogenetic mechanism i s not clear. Besides, glucolipid metabolism disorder is one of the main causes of fatty liver disease. Whether g lucolipid metabolic disorder plays an important role in DMN induced hepatic fibrosis also remains to be understood. So the purpose of this study was to know the relationship between glucolipid metabolic disorder and DMN induced hepatic fibrosis. Male Wistar rats were divided into the control group and DMN group randomly. DMN (10 mg·kg-1) was administered by i ntraperitoneal injection for consecutive three days each week for four weeks. Equal amount of normal saline was given to rats in the normal group. At the end of the second week, five rats that selected from control group and DMN group respectively were sacrificed to observe fibrosis stage. At the end of the fourth week, all the animals were sacrificed and liver samples were collected and prepared for detection in Affymetrix Gene Chip. Then significant differential genes were analyzed by bioinformatics software IPA. The results showed that there were 55 significant differential genes shared between two-week DMN group and the normal group, four-week DMN and the normal group (logRatio ＞ 2). Nine pathways were involved in molecular network that was established by the 55 significant differential genes, which highly correlated with inflammation, immune, hepatic fibrosis, lipid metabolism and angiogenesis process. It was found that fatty acid metabolism disorder was the main performance in the progression of D MN induced hepatic fibrosis (two-week DMN), while cell proliferation was the main behavior in the period of DMN induced hepatic cirrhosis in rats (four-week DMN). In conclusion, fatty acid metabolism disorder probably was another important cause of DMN induced hepatic fibrosis.

Hepatic fibrosis, rat, fatty acid metabolism, gene analysis, pathogenesis

10.11842/wst.2016.02.016

R575

A

（責任編輯：朱黎婷 張志華，責任譯審：朱黎婷 王 晶）

2015-10-15

修回日期：2015-10-26

＊ 國家自然科學基金委面上項目（ 81273729）：茵陳蒿湯調控Notch信號通路影響庫普弗細胞活化的效應機制研究，負責人：孫明瑜；國家自然科學基金委青年科學基金項目（30701070）：茵陳蒿湯治療肝硬化的方證病理基礎研究，負責人：孫明瑜；上海中醫藥大學首屆杏林學者、上海市科委專項（15DZ1900104）：胃復春治療胃癌前病變及八寶丹防治肝性腦病的臨床和作用機制研究，負責人：孫明瑜。

＊＊ 通訊作者：孫明瑜，醫學博士，研究員，主要研究方向：炎癥-免疫-纖維化的發病機制及中藥效應機理研究。。