細胞形態(tài)學異常在骨髓增生異常綜合征的診斷價值

邢麗麗，秦衛(wèi)玲，竇敬芳，邢會茹，鄭　輝，牛新清

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細胞形態(tài)學異常在骨髓增生異常綜合征的診斷價值

邢麗麗，秦衛(wèi)玲，竇敬芳，邢會茹，鄭輝，牛新清

摘要：目的探討細胞形態(tài)學異常對骨髓增生異常綜合征(MDS)的診斷價值。方法采用瑞氏-姬姆薩染色法對35例MDS患者及35例非克隆性疾病患者外周血及骨髓細胞涂片染色，比較兩組外周血及其骨髓細胞的形態(tài)特征。結果外周血細胞形態(tài)學病態(tài)檢查結果中，觀察組原粒細胞、幼粒細胞、幼紅細胞及巨核細胞形態(tài)異常發(fā)生比例均明顯高于對照組(均為P<0.05)。骨髓粒細胞系指標中，觀察組原粒細胞、Auer小體、核出芽、核空泡、胞質顆粒異常、假性Pelger-Huet樣核異常細胞、高分葉、核漿發(fā)育不平行發(fā)生比例均明顯高于對照組(均為P<0.05)；紅細胞系指標中，觀察組核間橋、花瓣核、Hb充盈減少、多核、核出芽、細胞大小不均、幼紅細胞、核碎裂、大紅細胞、巨幼紅細胞發(fā)生比例均明顯高于對照組(均為P<0.05)；巨核細胞系指標中，觀察組單圓核發(fā)生比例、多圓核發(fā)生比例、淋巴樣小巨核發(fā)生比例、畸形血小板發(fā)生比例均明顯高于對照組(P<0.05)。2例(5.7%)RA患者外周血及骨髓細胞未見明顯細胞形態(tài)病態(tài)改變。結論細胞形態(tài)學異常是診斷MDS的最重要和基礎的手段，部分病例在早期需結合其他檢測技術以提高診斷準確率。

關鍵詞：細胞形態(tài)學；骨髓增生異常綜合征；診斷價值

作者單位：新鄉(xiāng)醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院，河南新鄉(xiāng) 453000

骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes，MDS)是一組起源于造血干細胞的異質性疾病，特點是髓系細胞分化及發(fā)育異常，常表現(xiàn)為無效造血、難治性血細胞減少、造血功能衰竭，具有高風險轉化為急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia，AML)，MDS外周血可見幼紅、幼粒細胞等[1]。無論是1982年的法美英(FAB)協(xié)作組分型還是世界衛(wèi)生組織(WHO)分型，均強調了MDS細胞形態(tài)的診斷基礎，主要突出了某些常見的病態(tài)表現(xiàn)。WHO關于細胞病態(tài)類型的概括是進行形態(tài)學診斷的依據(jù)。為此，WHO分型提出了MDS病態(tài)的量化指標，以占某系列10%作為形態(tài)病態(tài)上的診斷標準[2]。

為了探討細胞形態(tài)學異常在骨髓增生異常綜合征中的診斷價值，本文分析35例MDS患者及35例同期診治的非克隆性疾病患者的骨髓細胞和外周血細胞形態(tài)學檢查，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取 2011年1月至2015年1月新鄉(xiāng)醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院收治的35例MDS患者為研究對象，其中男13例，女 22 例，年齡 23～87 歲，中位年齡78歲。患者均符合骨髓增生異常綜合征的臨床診斷標準，且經骨髓細胞形態(tài)學檢查、細胞遺傳學檢查、免疫學檢查、病理組織檢查確診，其中難治性貧血(refractory anemia，RA)19例(54.3%)、難治性貧血伴環(huán)狀鐵粒幼細胞增多(refractory anemia with sideroblasts，RAS)2例(5.7%)、難治性貧血伴原始細胞增多(refractory anemia with excess of blasts，RAEB)7例(20%)、轉變中的難治性貧血伴原始細胞增多(RAEB in transformation，RAEB-T)6例(17.1%)、慢性粒—單細胞性白血病(chronic myelomonocytic leukemia，CMML)1例(2.9%)，排除患有其他腦血管病、心肺疾病、肝腎疾病等。本院同期診治的非克隆性疾病患者35例為對照組，其中男15例，女20例，患者年齡20～83歲，中位年齡70歲。包括缺鐵性貧血20例，巨幼細胞貧血10例，原發(fā)性血小板減少性紫癜(thrombocytopenic purpura,idiopathic，ITP)3例、慢性病和自身免疫性疾病等相關貧血2例。

1.2方法

1.2.1檢驗方法采集兩組患者外周血及骨髓細胞進行涂片，使用瑞氏—姬姆薩混合液對細胞進行染色，在光學顯微鏡下進行細胞分類計數(shù)及細胞內、外鐵小顆粒、小塊的計數(shù)和判定，判斷各系別有無發(fā)育異常的定量標準為該系有形態(tài)異常的細胞≥10%。取外周血涂片計數(shù)200個有核細胞，觀察有無幼粒、幼紅、成熟紅細胞形態(tài)及假性Pelger-Huet樣核異常細胞和無顆粒中性粒細胞；骨髓涂片計數(shù)500個有核細胞，并計數(shù)各種異常發(fā)育的細胞形態(tài)學改變及所占比例；計數(shù)全片巨核細胞的數(shù)量，同時觀察病態(tài)巨核細胞及所占比例。環(huán)狀鐵粒幼紅細胞為≥5個繞核周分布的鐵顆粒(常≥1/3核周)，若該細胞≥15%，則認為患者屬于鐵幼粒紅細胞性貧血[3]。對于病態(tài)細胞的辨認，3位不同閱片者或其中2位對某一細胞意見一致為認同；對于亞型判別，如原始細胞界限在難治貧血細胞減少伴多系增生異常(refractory cytopenia with multilineage，RCMD)與RAEB I型交界處，需3位閱片者中2位意見一致方可確立。通過全面分析全片細胞，觀察和記錄各個系統(tǒng)病態(tài)造血和畸形的變化情況，結合患者的臨床表現(xiàn)，按照2008年WHO提出的MDS分型標準劃分出亞型。

1.2.2統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計數(shù)資料的比較應用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組外周血涂片結果比較觀察組原粒細胞、幼粒細胞、幼紅細胞、巨核細胞發(fā)生比例均明顯高于對照組(均為P<0.05)，見表1。

表1　兩組外周血涂片結果比較　例(%)

2.2兩組粒細胞系指標比較觀察組原粒細胞、Auer小體、核出芽、核空泡(見圖1)、胞質顆粒異常、假性Pelger-Huet樣核異常細胞、高分葉、核漿發(fā)育不平行發(fā)生比例均明顯高于對照組(均為P<0.05)，見表2。

圖1　粒細胞系核空泡(Wright Giemsa，×1000)

例(%)

2.3兩組紅細胞系指標比較觀察組患者核間橋、花瓣核、Hb充盈減少、多核、核出芽、大小不均、幼紅細胞、核碎裂、大紅細胞、巨幼變(見圖2)發(fā)生比例均明顯高于對照組(均為P<0.05)，見表3。

圖2　紅細胞系巨幼樣變(Wright Giemsa,×1000)

2.4兩組巨核細胞系指標比較觀察組患者單圓

核(見圖3)、多圓核、淋巴樣小巨核率、畸形血小板均明顯高于對照組(P<0.05)，見表4。此外，2例RA患者(5.7%)骨髓及外周血細胞未見明顯病態(tài)造血。

圖3　巨核細胞系見單圓核、小巨核(Wright Giemsa，×1000)

表3　兩組紅細胞系指標比較　例(%)

表4　兩組巨核細胞系指標比較　例(%)

3討論

MDS是一種源于造血干/祖細胞水平的異質性惡性克隆性疾病[4]，常以發(fā)熱、貧血和出血等作為發(fā)病先驅癥狀，典型特征是外周血三系血細胞減少，骨髓增生活躍，骨髓中有一系以上的病態(tài)造血表現(xiàn)。其發(fā)病機制尚不完全清楚，研究表明它是一種因基因突變或染色體異常所引起的造血細胞多階段惡變的復雜疾病過程。自1982年FAB協(xié)作組定義MDS并以細胞形態(tài)學為基礎提出其診斷分型標準以來，雖幾經修訂但血細胞發(fā)育異常的細胞形態(tài)學依然是MDS診斷分型的基礎[5]。本研究通過比較35例MDS及35例非克隆性疾病外周血及骨髓細胞形態(tài)特征顯示：本組MDS及對照組外周血及骨髓細胞的病態(tài)造血復雜多樣。MDS外周血涂片分類中，出現(xiàn)原粒細胞、幼粒細胞、幼紅細胞及巨核細胞所占的比例分別為20%、71.4%、91.4%、17.1%，其中幼紅細胞的比例最高，其次為幼粒細胞和原粒細胞，出現(xiàn)巨核細胞的比例相對較少，但均明顯高于對照組，由此可見MDS外周血中更易出現(xiàn)異常細胞，而在這些異常細胞中，原粒細胞及巨核細胞對診斷MDS較敏感、特異；骨髓涂片中MDS粒細胞系中原粒細胞、Auer小體、核出芽、核空泡、胞質顆粒異常、假性Pelger-Huet樣核異常細胞、高分葉、核漿發(fā)育不平行發(fā)生比例均明顯高于對照組，其中原粒細胞、胞質顆粒異常、假性Pelger-Huet樣核異常細胞、核漿發(fā)育不平行細胞的發(fā)生比例較高，Auer小體、核出芽、假性Pelger-Huet樣核異常細胞對MDS的診斷有重要價值；紅細胞系指標比較結果顯示觀察組核間橋、花瓣核、Hb充盈減少、多核、核出芽、大小不均、幼紅細胞、核碎裂、大紅細胞、巨幼變發(fā)生比例均明顯高于對照組，其中花瓣核、多核、核出芽、大紅細胞、幼紅細胞對MDS的診斷價值更大；在巨細胞系指標比較中，觀察組巨核細胞系中最具有診斷價值的是淋巴樣小巨核細胞(檢出率為91.4%)，其的形態(tài)學特征是：胞體小，似淋巴細胞，核漿比高(核直徑大約6～8 μm)，核染色質濃聚，一般無核仁，胞質嗜堿性較強，邊緣常有不規(guī)則的毛刺樣或小泡樣突起。有學者報道稱淋巴樣小巨核增多有助于早期診斷MDS并提示轉為白血病的概率高[6]。另外，單圓核、多圓核巨核細胞及異形巨大的血小板在MDS中也有較高的發(fā)生比例，這與譚永興等[7]的觀察結果一致。因此巨核細胞系指標也可作為相應的檢測指標，用于骨髓增生異常綜合征疾病的診斷和分類。研究表明，一系以上病態(tài)造血會嚴重威脅到患者的身體健康，影響患者的預后[8-9]。2012年修訂的國際預后評分系統(tǒng) ( revised international prognostic scoring system，IPSS-R)[10]，細化了血細胞減少的分組，且IPSS-R中血細胞的減少及原始細胞的百分比是其危險度分級的重要因素，這就需要對更多MDS患者進行長期追蹤隨訪。本文存在不足之處是選取的病例數(shù)較少，可能需增加樣本量提高文章結果的可信度。本文所選取的2例RA(5.7%)患者病態(tài)造血不明顯，這與程虹等[11]對于定向誘導發(fā)育不良的難治性血細胞減少(refractory cytopenia with unilineage dysplasia，RCUD)及RCMD患者的診斷困難的論述一致，因此需結合臨床及骨髓活檢等多項檢測指標進行診斷及分型，提高惡性克隆的早期識別率。

綜上所述，MDS患者病態(tài)造血復雜多樣，且病態(tài)造血細胞占該系細胞的百分率是診斷MDS的關鍵性指標，其可作為骨髓增生異常綜合征的一種有效檢測手段和診斷指標。需注意有些疾病如感染、自身免疫疾病也會出現(xiàn)全血細胞或一系、兩系減少、骨髓的病態(tài)造血現(xiàn)象，需加以鑒別。此外，對于那些病態(tài)造血不典型的患者，往往還需結合臨床特征及骨髓活檢等多項指標進行診斷及分型。

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The Diagnostic Value of Abnormal Cell Morphology in the Myelodysplastic Syndrome

XING Li-li, QIN Wei-ling, DOU Jing-fang, XING Hui-ru, ZHEN Hui, NIU Xin-qing

(Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College,Xinxiang 453000,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the diagnostic value of cell morphological abnormalities in myelodysplastic syndrome (MDS). MethodsThere were stained with Wright Giemsa in 35 cases of MDS patients and 35 cases of patients with non clonal disorders peripheral blood and bone marrow smears, and compared with peripheral blood and bone marrow cell morphological characteristics between the two groups of patients. ResultsThe incidence of the myeloblast, promyelocyte, erythroblasts and megalokaryocyte in the observation group were significantly higher than those in the control group (P<0.05). The incidence of myeloblast, Auer rods, nuclear budding, nuclear vacuoles, abnormal granules in the cytoplasm, pseudo Pelger-Huet like abnormal nucleus cell, high leaf abnormal cell, nucleocytoplasmic development non parallel were significantly higher than those of the control group in granulocytic series (P<0.05); The incidence of erythrocytic series on nuclear bridge, petals nuclear, Hb filling reduced, polynuclear, nuclear budding, cell size unevenness, erythroblasts, nuclear fragmentation, macrocyte, megaloblast were significantly higher than those in the control group (P<0.05).The incidence of single round nucleus, multi round nucleus, lymphoid micromega-karyocyte, platelet abnormalities on megakaryocyte series in observed group was significantly higher than that of the control group (P<0.05). 2 patients (5.7%) had no obvious pathological changes in peripheral blood and bone marrow cells of refractory anemia patients. ConclusionAbnormal cell morphology was the most important and basic method in the diagnosis of MDS, and some cases could be combined with other detection technology to improve the accuracy of MDS diagnosis.

Key words:cell morphology；myelodysplastic syndromes；diagnostic value

通信作者：牛新清，女，副主任醫(yī)師，E-mail:xinqinniu123@126.com

作者簡介：邢麗麗(1989-)，女，滿族，河北承德人，從事常見血液病的診治工作。

收稿日期：2015-12-26

基金項目：河南省教育廳自然科學基金(2010A320012)

中圖分類號：R551.3

文獻標志碼：B

DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.01.004

文章編號：1672-688X(2016)01-0012-04