龍牙楤木多糖在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

徐　倩　韓真賢　趙　宏3

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龍牙楤木多糖在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

徐倩1韓真賢2趙宏3

【摘要】目的研究龍牙楤木多糖在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)。方法大鼠單次口服龍牙楤木多糖后，采用高效液相色譜與1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生方法測(cè)定大鼠血漿中的龍牙楤木多糖。色譜柱為Agilent Zorbax XDB-C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），流動(dòng)相為0.1mol/L磷酸鹽溶液（pH6.7）:乙腈=83:17。結(jié)果血清樣品中，龍牙楤木多糖的線性范圍為5.0～100.0 μg/ml（r=0.998 8）；高、中、低3種不同濃度的日內(nèi)RSD值分別為4.12%、6.28%、6.93%；日間RSD值分別為4.07%，6.50%，6.85%；相對(duì)回收率分別為88.0%、93.6%、95.07%。單劑量給藥后，大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程符合開放2室模型，主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別為Cmax：61.15 μg/ml，tmax：94.57 min，AUC：20421.60 min/ （μg·ml），t1/2ka：34.37，t1/2ke：149.17。結(jié)論高效液相色譜與PMP柱前衍生法測(cè)定大鼠血漿中的龍牙楤木多糖的方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果可靠。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮；龍牙楤木多糖；大鼠；血漿

1大慶市第三醫(yī)院，黑龍江大慶163712

2大慶油田總醫(yī)院，黑龍江大慶163001

3佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江大慶154007

【Key words】High Performance Liquid Chromatography;PMP;Rats;Plasma;Aralia elata polysaccharide

龍牙楤木[Aralia elata(Miq.)Seem.]為五加科楤木屬植物，別名遼東楤木、刺老鴉，味辛、平，有小毒，據(jù)《本草綱目》記載其具有除風(fēng)疾、治水瘤、補(bǔ)腎腰、壯筋骨等作用[1]，主治神經(jīng)衰弱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、胃痙攣、便秘、外傷出血、陽(yáng)痿、肝炎。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)龍牙楤木的皂苷類化合物、黃酮類化合物、揮發(fā)油類化合物及氨基酸等研究較多[2-4]，而對(duì)于龍牙楤木多糖（aralia elata polysaccharides,AEPS）的報(bào)道相對(duì)較少。藥理研究表明，AEPS對(duì)小鼠艾氏腹水癌、小鼠肉瘤、小鼠網(wǎng)狀組織細(xì)胞白血病均有抑制作用，可明顯延長(zhǎng)患病小鼠的生存期并抑制腫瘤細(xì)胞增生[5]，具有抗輻射損傷作用[6]。但有關(guān)AEPS藥代動(dòng)力學(xué)方面的報(bào)道[7-11]幾乎沒(méi)有。本研究采用高效液相色譜與PMP柱前衍生方法[11-15]測(cè)定口服給藥后AEPS在大鼠血漿中的濃度，就AEPS在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試劑

1.1儀器美國(guó)Agilent 1100 LC（美國(guó)安捷倫公司）；TGL-16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司）；DZG-6050型真空干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

1.2藥品與試劑AEPS由佳木斯大學(xué)藥學(xué)院提供（含量＞99%），批號(hào)：20140716；色譜純乙腈（山東禹王實(shí)業(yè)有限化工分公司）；色譜純甲醇（天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠）；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心）；其他試劑均為分析純。

1.3動(dòng)物Wista大鼠，體重（180±10）g，由佳木斯動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

2　方法

2.1色譜條件色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：0.1 mol/L磷酸鹽溶液（pH6.7）:乙腈=83:17；流速：1.0 ml/min；λmax：245 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：50 μl。

2.2血清樣品處理取血清1 ml，加入5%高氯酸1 ml，混勻后，10 000 r/min，離心15 min（離心半徑為0.1 m），取上清液于55 ℃真空干燥箱內(nèi)干燥，殘?jiān)? ml蒸餾水溶解，加入1 ml三氟乙酸（2mol/L）水解110 ℃，2 h；水解后真空干燥，殘?jiān)苡? ml氨水中。取100 μl氨水溶液與100 μl PMP甲醇溶液（0.5 mol/L）混合，70 ℃下反應(yīng)30 min，取出后冷卻至室溫，加入0.5 ml蒸餾水，真空干燥，殘?jiān)? ml蒸餾水與1 ml氯仿溶解，充分震蕩后除去有機(jī)相，重復(fù)3次，水相過(guò)0.22 μm微孔濾膜，取50 μl進(jìn)樣。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備取大鼠血清100 μl，精密加入不同量的葡萄糖貯備液，使其濃度分別為5.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0 μg/ml，按2.2項(xiàng)下方法處理過(guò)程分析，以樣品峰面積（A）對(duì)濃度（C）做線性回歸。

泵站機(jī)電設(shè)備診斷故障的常用方式主要包括溫度檢測(cè)、鐵譜診斷、振動(dòng)檢測(cè)等。溫度檢測(cè)通過(guò)測(cè)量機(jī)電設(shè)備的運(yùn)行溫度和環(huán)境溫度，當(dāng)溫度發(fā)生異常時(shí)溫度檢測(cè)系統(tǒng)將發(fā)出警報(bào)，此刻維護(hù)檢修人員將按照設(shè)備運(yùn)行狀況對(duì)設(shè)備進(jìn)行診斷。鐵譜診斷方法主要通過(guò)觀測(cè)設(shè)備元器件的潤(rùn)滑程度以對(duì)機(jī)電設(shè)備的運(yùn)行情況進(jìn)行診斷，潤(rùn)滑油能使得泵站機(jī)電設(shè)備在高梯度和強(qiáng)磁場(chǎng)環(huán)境下維持良好的運(yùn)行形態(tài)，按照所提取的鐵屑密度制備光譜片，進(jìn)而體現(xiàn)設(shè)備元件的磨損狀況。振動(dòng)檢測(cè)主要利用振動(dòng)頻率擴(kuò)大器以促使傳感器振動(dòng)信號(hào)被放大，接著監(jiān)測(cè)振動(dòng)的峰值情況，設(shè)備檢修維護(hù)人員通過(guò)研究振動(dòng)狀況統(tǒng)計(jì)結(jié)果，可清楚掌握設(shè)備的能量轉(zhuǎn)化狀況。

2.4回收率與精密度試驗(yàn)取大鼠血清0.5 ml，精密加入不同量的AEPS貯備液，濃度分別為10.0、50.0、75.0 μg/ml。按2.2項(xiàng)下方法處理后，于同日內(nèi)連續(xù)測(cè)定5次，5 d內(nèi)重復(fù)測(cè)定，評(píng)價(jià)本方法回收率及日內(nèi)、日間RSD。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取大鼠血清0.5 ml，精密加入不同量的AEPS貯備液，濃度分別為10.0、50.0、75.0 μg/ml，一份置4 ℃冷藏保存，另一份置－20 ℃冷凍保存，連續(xù)5 d取樣，按2.2項(xiàng)下方法處理后，考察樣品在4 ℃及－20 ℃的穩(wěn)定性。

2.6試驗(yàn)方案Wista大鼠15只，體重180～240 g，禁食12 h，隨機(jī)分為5組，按200 mg/kg口服AEPS溶液，于給藥前及給藥后20、40、60、90、120、150、180、210、240、300、360、720、1080、1440 min取大鼠眼底靜脈血，將血樣以10 000 r/min離心5 min（離心半徑為0.1 m），轉(zhuǎn)移上層血清，按2.2項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣。

3　結(jié)果與討論

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線按2.3項(xiàng)下方法，結(jié)果表明血清中AEPS在5.0～100.0 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=51.097x+521.25（r=0.9988），見圖1

圖1　大鼠血清中的龍牙楤木多糖血藥濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2回收率與精密度按2.4項(xiàng)下方法，大鼠血清中AEPS的高、中、低的相對(duì)回收率分別為88.0%、93.6%、95.07%。大鼠血清中，高、中、低3種不同濃度的日內(nèi)RSD值分別為4.12%、6.28%、6.93%；日間RSD值分別為4.07%、6.50%、6.85%，見表1。

3.3穩(wěn)定性按2.5項(xiàng)下方法，大鼠血清中AEPS的穩(wěn)定性見表2。

3.5藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)大鼠單劑口服龍牙楤木多糖溶液后，血藥濃度經(jīng)3P97生物等效性軟件處理，按二室開放模型計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，見表3。

表1　大鼠體內(nèi)AEPS日內(nèi)、日間RSD

表2　大鼠血清中AEPS在不同溫度下的穩(wěn)定性

圖2　大鼠灌胃龍牙楤木多糖后血藥濃度-時(shí)間曲線(n=5)

表3　大鼠灌胃給藥AEPS后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

由表3可知，大鼠灌胃給藥后的吸收相和消除相半衰期表明，AEPS在大鼠體內(nèi)吸收較快，消除較慢，有效血藥濃度維持時(shí)間較長(zhǎng)。本研究所獲得的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，可為臨床藥學(xué)深入研究提供理論依據(jù)。

3.6小結(jié)本研究首次建立高效液相色譜與PMP

柱前衍生方法測(cè)定AEPS在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)，該方法反應(yīng)條件較溫和[16-20]，樣品用量少，RSD和重現(xiàn)性均較好，操作簡(jiǎn)單，能夠滿足龍牙楤木的藥代動(dòng)力學(xué)研究。

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Pharmacokinetics of Aralia elata Polysaccharide in Rats

Xu QianHan ZhenxianZhao Hong

【Abstract】ObjectiveTo study the Pharmacokinetics of Aralia elata polysaccharide in Rats.MethodsFollowing p.o.administration to rats,the use of high-performance liquid chromatography with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP)were used to determine pre-column derivatization in rat’s plasma polysaccharide Aralia elata.Agilent Zorbax XDB-C18column(5 μm,150 mm×4.6 mm I.D.)was used with a mobile phase consisting of 0.1 mol/L Phosphate solution (pH6.7):Acetonitrile=83:17.ResultsThe linear range of Aralia elata polysaccharide in serum was 5.0～100.0μg/ml (r=0.9988) and the High,the medium and the low concentrations of three different intraday RSD values were 4.12%,6.28%,6.93%;day RSD values were 4.07%,6.50%,6.85%;The relative recoveries were 88.0%,93.6%, 95.07%. After single dosage for medicine,the rats in vivo's medicine generation of dynamics process tallies opens the two room of models,the main medicine generation of dynamics parameter respectively is Cmax:61.15μg/ml,tmax: 94.57min, AUC: 20421.60 min(μg·ml),t1/2ka:34.37,t1/2ke:149.17.ConclusionThe methods of use high-performance liquid chromatography with PMP were used to determine pre-column derivatization in rat’s plasma polysaccharide Aralia elata is specific and reliable.

作者簡(jiǎn)介：徐倩（1982.11-），碩士學(xué)位，主管藥師。研究方向：黃銅衍生物的提取及應(yīng)用

【中圖分類號(hào)】R774.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.02.006