探究太空環(huán)境對酵母菌出芽生殖影響的試驗方法

白易明

摘要 在地球表面適宜條件下，食用酵母可在無菌固體麥芽汁培養(yǎng)基中生存、繁殖，生殖方式為出芽生殖，且顯微鏡下可觀。本實驗在試驗箱中進行，采用培養(yǎng)皿瓶裝無菌固體麥芽汁培養(yǎng)基對食用酵母進行培養(yǎng)，分為地面組和太空組兩組實驗進行，在實驗結(jié)束后，利用350μw/cm2的紫外線照射培養(yǎng)皿殺死酵母菌細(xì)胞，待航天器返回地面后，將太空組同地面組對照研究，探究太空環(huán)境對酵母菌出芽生殖的影響。實驗關(guān)鍵性步驟經(jīng)地面預(yù)實驗驗證，具有可行性。

關(guān)鍵詞 酵母菌；出芽生殖；太空環(huán)境

中圖分類號Q

文獻標(biāo)識碼A

文章編號1674-6708（2015）155-0058-02

1 問題提出

在地球表面，酵母菌的出芽牛殖是微生物無性繁殖的重要組成，出芽生殖可能會受到地球引力等因素的影響。在太空環(huán)境下，酵母菌的出芽生殖是否受影響，出芽生殖的發(fā)生、芽體與母體的大小關(guān)系又有何變化尚不可知，本實驗將對太空環(huán)境下酵母菌出芽生殖進行探究實驗。

1.1 實驗創(chuàng)新性

1）據(jù)可查文獻，本實驗為國內(nèi)外首次對太空環(huán)境下酵母菌出芽生殖進行探究；2）行全程無液體操作，適合在太空環(huán)境下進行實驗；3）本實驗對實驗操作進行了創(chuàng)新，減少了太空操作，儀需寧航員進行開關(guān)的開啟和關(guān)閉；4）本實驗在地面實驗中利用恒溫箱保證地面組與太空組溫度、濕度條件相同，避免了在太空組使用恒溫箱，在保證科學(xué)性的情況下使太空組實驗裝置質(zhì)量、體積最小化。

1.2 實驗意義

1）探究出太空環(huán)境對酵母菌出芽生殖的影響，增加對酵母菌出芽牛殖的認(rèn)識；2）對宇航員太空食品的多樣化具有參考意義；3）為珍貴酵母菌種的保存與繁殖提供參考；4）為工業(yè)中酵母菌產(chǎn)物的制備提供參考；5）為大學(xué)《微生物學(xué)》及高中牛物教材補充有關(guān)內(nèi)容提供素材。

2 作出假設(shè)

對此實驗的進行，有以下假設(shè)。

2.1 酵母菌的出芽生殖會受到太空環(huán)境的影響

在此情況下有5種可能：1）酵母菌可以進行出芽生殖，芽體與母體的人小關(guān)系與地面有明顯差別，且繁殖速度更快；2）酵母菌可以進行出芽生殖，芽體與母體的大小關(guān)系與地面有明顯差別，且繁殖速度更慢；3）酵母菌可以進行出芽生殖，芽體與母體的人小關(guān)系與地面無明顯差別，但繁殖速度更快；4）可以進行出芽生殖，芽體與母體的大小關(guān)系與地面無明顯差別，但繁殖速度更慢；5）酵母菌不可以進行出芽生殖。

2.2 酵母菌的出芽生殖不會受到太空環(huán)境的影響

酵母菌可以進行出芽生殖，芽體與母體的人小關(guān)系與地面無明顯差別。

3 實驗設(shè)計

3.1 材料用具

小型實驗箱；蓄電池；培養(yǎng)皿；照明裝置及紫外線滅菌裝置；亞甲基藍染液；光學(xué)顯微鏡；血球計數(shù)板；食用酵母菌菌株及無菌固體麥芽汁培養(yǎng)基；恒溫箱。

3.2 實驗裝置

實驗在裝有照明裝置的實驗箱中進行，實驗箱內(nèi)固定4個相同培養(yǎng)皿，內(nèi)部放有接種有食用酵母菌的無菌固體麥芽汁培養(yǎng)基。

4 方法步驟

4.1 實驗準(zhǔn)備階段

4.1.1 裝置準(zhǔn)備

測定電池容量，設(shè)定照明及紫外線滅菌裝置安裝角度、培養(yǎng)皿所放位置、保險裝置并估算實驗所需時間。

4.1.2 材料準(zhǔn)備

1）用麥芽粉與4倍水混勻，在58℃～65℃條件下保溫3h～4h至完全糖化，調(diào)整糖液濃度為10°巴林，煮沸后用紗布過濾，調(diào)pH為6.O，加入2%左右的瓊脂配置標(biāo)準(zhǔn)無菌固體麥芽汁培養(yǎng)基^[3]，并將其分為八份，分別置于A、B、C、D、E、F、G、H八個相同培養(yǎng)皿中，用透氧薄膜對培養(yǎng)皿封口；2）采集同一菌株的食用酵母菌，將其均分為八組，分別接種于A、B、C、D、E、F、G、H八個培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)；3）將A、B、C、D、E、F、G、H八個培養(yǎng)皿放入適宜的條件下保存?zhèn)溆茫ūM量保證保存時間較短）；4）在實驗裝置封閉前將A、B、C、D四個培養(yǎng)皿按預(yù)定位置放入地面組實驗箱；E、F、G、日四個培養(yǎng)皿按預(yù)定位置放入太空組實驗箱，將兩個實驗箱開肩照明裝置；5）將兩個實驗箱放入同一恒溫箱備用，將恒溫箱溫度濕度設(shè)置為航天器實驗艙預(yù)設(shè)溫度、濕度，待航天器實驗艙封閉前將太空組實驗箱轉(zhuǎn)移至實驗艙指定位置。

4.2 地面實驗

地面組實驗全程在恒溫箱內(nèi)進行，調(diào)節(jié)地面組設(shè)備，直至接種8天后開肩紫外線滅菌裝置15min。

4.3 太空實驗

到達太空環(huán)境后，儀需要宇航員在接種8天后開啟紫外線滅菌裝置，以殺死酵母菌，照射15分鐘后關(guān)閉，太空實驗結(jié)束。

備注：太空組地面組應(yīng)保證同時開肩紫外線滅菌裝置以同時終止實驗。

4.4 地面觀察

在太空組實驗裝置返同地球后，取出A、B、C、D、E、F、G、H培養(yǎng)皿，進行如下操作：

1）對A、B、E、F四培養(yǎng)川皿中酵母菌進行取樣，用無菌接種環(huán)取少量酵母菌于載玻片上，用亞甲基藍染液進行染色，使用光學(xué)顯微鏡進行觀察比較并記錄數(shù)據(jù)；2）對C、D、E、F四培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基加熱至100℃進行融化，通過趁熱適度離心以便將菌液與瓊脂分離，洗滌后，再次離心，之后對菌液進行稀釋，并將樣品加入至血細(xì)胞計數(shù)板中進行計數(shù)操作，按照稀釋比例計算出培養(yǎng)基中酵母菌總數(shù)并記錄數(shù)據(jù)。

4.5 注意事項

1）需在酵母菌接種后盡快完成實驗準(zhǔn)備階段進行實驗，且時間越短越有利于保證實驗準(zhǔn)確性；2）盡量保證劃線接種時酵母菌分布合理，避免群體效應(yīng)引發(fā)的實驗誤差；3）在太空實驗結(jié)束后，立即同時結(jié)束地面實驗，保證酵母菌生理狀態(tài)近似相同。

5 進行實驗

按照實驗方案操作，實驗完成后，分別記錄A、B、C、D、E、F、G、H組酵母菌是否可以出芽牛殖，酵母菌數(shù)量，芽體與母體大小關(guān)系，并對實驗中出現(xiàn)的異常現(xiàn)象進行備注。

6 分析結(jié)果，得出結(jié)論

1）確定何種假設(shè)正確；

2）分析實驗結(jié)果是否可靠；

3）進行誤差分析。

7 預(yù)實驗驗證

本實驗培養(yǎng)操作參照人學(xué)課本方案進行，科學(xué)可行。實驗結(jié)束后的紫外線滅菌過程為本實驗確保變量唯一的關(guān)鍵性步驟，在預(yù)實驗階段，對這一過程進行可行性驗證。實驗證明，在實驗室環(huán)境下，將菌液接種到直徑為lOcm的無菌平皿上，將平皿放置在350μm/cm2的紫外光下進行照射處理，lOmin時酵母菌殺滅率達到98%，15min后，未檢出存活酵母菌，證明酵母菌對紫外線敏感，實驗結(jié)束后的滅菌操作可行。^[4]

參考文獻

[1]吳艷，觀察酵母出芽生殖的簡易方法[J].生物學(xué)通報，1986（11）.

[2]周宗旭，快速現(xiàn)察酵母菌出芽繁殖[J].生物學(xué)教學(xué)，1998（3）.

[3]沈萍，陳向東，微生物學(xué)（第2版）[M].北京：高等教育出版社，2006.

[4]劉振林，韓承平，魏麗莉，紫外線對真菌的殺滅作用[J].中國消毒學(xué)雜志，1990（2）：95-97.