CirQ-life保恩素膠囊毒性研究

卜榮華， 呂文平， 鐘海燕， 張迎慶， 李小莉

(1 湖北工業大學食品與制藥工程學院， 湖北 武漢 430068; 2 香港海宸科技有限公司，香港 999077)

?

CirQ-life保恩素膠囊毒性研究

卜榮華1， 呂文平1， 鐘海燕2， 張迎慶1， 李小莉1

(1 湖北工業大學食品與制藥工程學院， 湖北 武漢 430068; 2 香港海宸科技有限公司，香港 999077)

[摘要]目的：觀察CirQ-life保恩素膠囊的安全性。方法：采用小鼠急性毒性試驗、小鼠骨髓微核試驗、大鼠30 d喂養等試驗方法進行各項實驗。結果：小鼠急性經口毒性最大耐受劑量(MTD)均大于8414 mg/kg(BW)，為無毒物，其對小鼠骨髓染色體無明顯損傷作用。30 d喂養試驗表明CirQ-life保恩素膠囊各劑量組對大鼠體重、食物利用率、血液學、血液生化、臟體系及病理組織等指標與正常對照組比較，均無顯著性差異。結論：在本實驗劑量范圍和條件下， CirQ-life保恩素膠囊屬實際無毒食品，短期使用無毒副作用。

[關鍵詞]急性毒性； 遺傳毒性； 30天喂養試驗

CirQ-life保恩素膠囊是由蜂王漿、牛初乳、甘草提取物、大豆異黃酮、亞麻籽提取物等組成的女用營養性食品，能幫助成熟婦女改善由于內源性雌激素分泌不足引起的中樞神經系統、骨、血管壁等器官的疾病[1-2]，牛初乳、甘草、亞麻籽能調節雌激素水平，降血脂，抗氧化，健腦，明目，增強機體免疫功能，對更年期婦女預防或減輕心血管疾病、延緩衰老、提高機體免疫力有一定的幫助[3-6]。為觀察該產品的安全性，筆者對CirQ-life保恩素膠囊進行了小鼠急性毒性試驗、小鼠骨髓微核試驗及大鼠30 d喂養試驗研究 ，以期為該產品的安全性毒理學評價提供實驗依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1受試物樣品CirQ-life保恩素膠囊，內為淺灰色粉末，由香港海宸科技有限公司提供。人體推薦每日攝入量為2粒/天，即610 mg/人·d。

1.1.2試驗對象選用SPF級健康動物。昆明種小鼠20只，雌雄各半，體重18~22 g；昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重25~30 g； Wistar種大鼠80只，雌雄各半，體重75~93 g。試驗動物均由湖北省疾病控制中心動物研究所提供，實驗動物生產許可證號SCXK(鄂)2008-0005。實驗動物飼養條件：動物房溫度20~24℃，相對濕度為50%~70%。飼料、墊料均由湖北省疾病控制中心動物研究所提供。

1.1.3主要儀器與試劑希森美康KX-21全自動血球計數儀，日本希森美康公司生產；魅力2000型全自動生化分析儀，美國MD公司生產。生化試劑均購自珠海貝索生物技術有限公司。

1.2方法

1.2.1急性經口毒性試驗采用最大耐受劑量法[7]。選取適應飼養后的健康小鼠20只，雌、雄各半，體重18~22 g，取12 200 mg(40粒)CirQ-life保恩素膠囊，用蒸餾水稀釋至58.0 mL。經口一次性灌胃0.4 mL/10 g(BW)。灌胃前，小鼠禁食不禁水過夜；灌胃后。自由飲食。觀察2周，記錄小鼠一般狀態、體重變化、中毒表現及死亡情況。

1.2.2小鼠骨髓細胞微核試驗采用間隔24 h兩次經口灌胃法[7]。選取健康昆明種小鼠50只，體重25~30 g，雌雄各半，隨機分為5組，10只/組，分別為CirQ-life保恩素膠囊305，610，1220 mg/kg(BW)3個劑量組、陽性對照組(環磷酰胺cp：40 mg/kg(BW))和空白對照組。以0.2 mL/l0 g(BW)灌胃，連續2d。末次給樣后6 h，頸椎脫臼處死動物，取股骨用小牛血清沖洗骨髓腔，制成細胞器懸液涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光學顯微鏡下，每只動物計數1000個嗜多染紅細胞(PCE)，微核發生率以含微核的PCE千分率計，按χ2檢驗統計處理。計數200個嗜多染紅細胞，計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比值(PCE/NCE)。

1.2.330 d喂養試驗采用短期喂養實驗法[8]。選取健康大鼠80只，雌雄各半，雄鼠體重為84.20±6.93 g，雌鼠體重83.75±6.78 g。將實驗動物隨機分成CirQ-life保恩素膠囊低、中、高 3個劑量和空白對照4個組，每組20只，雌雄各半。CirQ-life保恩素膠囊低、中、高三個組劑量分別為305, 610, 1220 mg /kg(BW)(約為人體推薦量的25, 50, 100倍)。以每天1 mL/100 g (BW)灌胃，空白對照組給予相同容量的蒸餾水，連續30d。實驗期間動物自由攝食飲水，每天觀察動物的活動和生長情況，每周稱量并記錄動物體重和食物攝入量。實驗末，禁食16 h，取血測定血液常規和血液生化指標。取血后處死動物作大體解剖，稱肝、腎、脾、睪丸、卵巢重量，計算臟/體比值。將肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢等臟器固定保存，高劑量和空白對照組大鼠的主要臟器進行病理切片檢查。

1.2.4統計分析實驗數據采用SPSS11.0軟件包進行處理分析。

2結果與討論

2.1急性經口毒性試驗

以劑量為8414 mg/kg·BW的CirQ-Life保恩素膠囊分別給兩種性別的昆明種小鼠灌胃，觀察14 d，小鼠進食、行為活動均正常，未見明顯中毒癥狀或不良反應，且無小鼠死亡。第15天將小鼠處死進行解剖檢查，肝、脾、腎、胃、腸、心、肺等主要臟器未見明顯異常改變。CirQ-Life保恩素膠囊對雌、雄昆明種小鼠的最大耐受劑量(MTD)大于8 414 mg/kg·BW。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版)中的急性毒性分級標準，CirQ-Life保恩素膠囊屬實際無毒物質(表1)。

表1　Cir-Q Life保恩素膠囊急性毒性試驗結果

2.2小鼠骨髓細胞微核試驗

CirQ-Life保恩素膠囊各劑量組微核率與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)，而環磷酰胺組與陰性對照組比較差異有非常顯著性(P<0.01)。說明所用動物敏感，試驗可靠。由試驗結果可知，CirQ-Life保恩素膠囊對小鼠骨髓細胞未見損傷作用(表2)。

表2　CirQ-Life保恩素膠囊對小鼠骨髓微核發生率的影響

與空白組比較：*p<0.05,**p<0.01

2.3大鼠30 d喂養試驗

2.3.1對大鼠表征、行為、體重的影響試驗期間大鼠毛發有光澤、口鼻無潰瘍，自由攝食、飲水正常，生長發育良好，體重呈增長趨勢，未見明顯中毒癥狀。CirQ-Life保恩素膠囊各劑量組大鼠體重、攝食量和食物利用率與對照組以及各組劑量之間比較，差異均無顯著性意義(P>0.05)，表明受試物對大鼠生長無不良影響(表3)。

2.3.2對大鼠血常規的影響CirQ-Life保恩素膠囊各劑量組血常規指標與對照組比較，差異均無顯著性意義(P>0.05)，表明該受試樣品30 d喂養試驗血常規指標正常(表4)。

2.3.3對大鼠血液生化指標的影響CirQ-Life保恩素膠囊各劑量組血清生化指標與對照組比較，均無顯著性差異(P>0.05)，說明該受試樣品經30 d喂養試驗，對實驗動物的生化指標均無影響(表5)。

表3　CirQ-Life保恩素膠囊對大鼠體重和食物食物利用率的影響±S，n=10)

表4　CirQ-Life保恩素膠囊對大鼠血常規的影響

表5　CirQ-Life保恩素膠囊對大鼠血液生化指標的影響

表6　CirQ-Life保恩素膠囊對大鼠血液生化指標的影響

2.3.4對大鼠主要臟器濕重及臟體比的影響與對照組比較，CirQ-Life保恩素膠囊雌性中劑量組大鼠卵巢臟體比差異有顯著性意義(P<0.05)，但卵巢濕重與對照組相比無顯著性差異(P>0.05)，故認為無生物學意義。其他雌雄各劑量組大鼠臟器濕重及臟體比與對照組比較，差異均無顯著性意義(P>0.05)。提示CirQ-Life保恩素膠囊對大鼠主要臟器濕重及臟體比無明顯影響(表7~表8)。

表7　CirQ-Life保恩素膠囊對大鼠肝、脾、腎濕重及臟體比的影響

表8　CirQ-Life保恩素膠囊對大鼠性腺濕重及臟體比的影響

與空白組比較：*p<0.05

2.3.5病理組織學檢查CirQ-Life保恩素膠囊各組大鼠心、肝、脾、腎、胃、小腸和性腺等器官的大體檢查，未見異常。高劑量組和對照組雌、雄各2例大鼠出現少許肝細胞濁腫和輕度脂肪變性，匯管區和干索間有少許炎細胞浸潤。其為實驗動物的自發性感染，高劑量組大鼠肝臟出現輕度病理改變的數量和性質與對照組比較均無顯著性差異(p>0.05)。其余動物的心、肝、脾、腎、胃、十二指腸、睪丸、卵巢組織結構均正常，未見與CirQ-Life保恩素膠囊有關的病理組織學改變。

3結論

本實驗結果顯示，小鼠的急性毒性MTD均大于8 414 mg/kg(BW)；在試驗劑量305 ~1 220 mg/kg范圍內，未發現對試驗小鼠骨髓嗜多染紅細胞有致突變作用，CirQ-Life保恩素膠囊各劑量組小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率均在正常值范圍內(P>0.05)； 30 d喂養試驗，未發現對試驗大鼠的生長發育、 血液學、生化、臟體比及組織病理學有明顯不良影響。 表明該食品在本實驗劑量范圍和條件下，短期食用對動物無毒副作用，初步認為CirQ-Life保恩素膠囊無毒，屬安全性食品。由于CirQ-Life保恩素膠囊為女用營養性食品，故未做小鼠精子畸形試驗。后續將進行Ames試驗、哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗等工作。

[參考文獻]

[1]Satoshi M, Kazu-Michi S，Yoichiro I，et al．Royal jelly has estrogenic effects in vitro and in vivo[J]．Journal of Ethnopharmacology，2005，101(1/3)：215-220．

[2]An J，Tzagarakis-Foster C，Scharschmidt TC, et al. Estrogen receptor beta-selective transcriptional activity and recruitment of coregulators by phytoestrogens [J]．J Biol Chem，2001，276(21)：17808-17814．

[3]徐麗，生慶海，郭順堂．不同劑量牛初乳粉對小鼠免疫調節作用的研究 [J]．食品科學，2005，11：54-57．

[4]王建平，阿里木帕塔爾，張丹鳳．牛初乳粉的保健功能研究[J]． 新疆農業科學，2008，39(2)：91-94．

[5]Bianga Furhman，Nina Volkova. Antiatherosclerotic effects of Licorice Extracts Supplementation on Hypercholesterolemic Patients : Increased Resistance of LDL to Atherogenic Modification, Reduced Plasma lipid levels, and Decreased systolic Blood Pressure [J]. Nutrition, 2002, 18：268．

[6]趙利，黨占海．亞麻籽的保健功能和開發利用[J]．中國油脂，2006，31(3)：71-74．

[7]中華人民共和國衛生部．GB15193．1保健食品檢驗與評價技術規范[S]．北京：中國標準出版社，2003：177-199．

[8]中國國家標準匯編．GB15193-2003食品安全性毒理評價程序和方法[S]．北京：中國標準出版社，2004：17-55．

[責任編校： 張眾]

Study of Cir-Q Life Baoensu Capsules on The Toxicity

BU Ronghua1, LV Wenping1, ZHONG Haiyan2，ZHANG Yingqing1，LI Xiaoli1

(1FoodandPharmaceuticalEngin.College，HubeiUniv.ofTech.，Wuhan430068,China；2HongKonghaiSenBiotechnologyLimited，Hongkong999077，China)

Abstract：The study observed the toxicological safety of Cir-Q Life Baoensu capsules,through acute toxicity tests, bone marrow cell micronucleus test and feeding tests of thirty days. Results are as follows. The daily maximum toxicity dose of Cir-Q Life Baoensu in mice was 8414 mg (BW) which was innocuous substance. Cir-Q Life Baoensu on the bone marrow cell micronucleus test was negative. Compared with control group，the body weight，food utilization rate，full blood count，blood biochemistry，organ/body weigh ratios, and the histopathological examination had no significant differences on the rats after thirty-day feeding．It has been proven that Cir-Q Life Baoensu capsules is actually non-toxic and may be regarded as the safe foods used in the human body.

Keywords：Cir-Q Life Baoensu capsules； acute toxicity； Micronucleus； 30-day feeding study

[中圖分類號]TS218

[文獻標識碼]：A

[文章編號]1003-4684(2016)01-0089-04

[作者簡介]卜榮華(1979-)， 女， 湖北武漢人，湖北工業大學碩士研究生，研究方向為食品和保健食品[通訊作者] 李小莉(1959-)，女，湖北武漢人，湖北工業大學教授，研究方向為新藥研發及天然提取物的藥理學

[收稿日期]2015-10-08