填精補髓、活血化痰開竅法對血管性癡呆大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的影響

徐云龍劉 穎邰曉峰趙建軍

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填精補髓、活血化痰開竅法對血管性癡呆大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的影響

徐云龍1劉 穎1邰曉峰2趙建軍1

【摘要】目的 探討填精補髓、活血化痰開竅法對血管性癡呆（VD）大鼠海馬組織腦源性神經營養因子（BDNF）、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）含量的影響。方法 采用雙血管阻塞（2VO）改良法復制VD大鼠模型，以鹽酸多奈哌齊片為陽性對照組，觀察填精補髓、活血化痰開竅法對大鼠海馬組織BDNF及bFGF含量的影響。結果 與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量升高（P＜0.05）；與模型組比較，陽性對照組，中藥高劑量組，中藥中劑量組海馬組織BDNF含量升高（P＜0.05），陽性對照組，中藥高劑量組海馬組織bFGF含量升高（P＜0.05）。結論 填精補髓，活血化痰開竅法可通過提高VD大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量，改善其學習與記憶能力。

【關鍵詞】填精補髓，活血化痰開竅法；血管性癡呆；腦源性神經營養因子；堿性成纖維細胞生長因子

作者單位：1 130021 長春中醫藥大學附屬醫院；2 130117 長春中醫藥大學 通訊作者：趙建軍，E-mail：936768008@qq.com

血管性癡呆（vascular dementia，VaD）是指由各種腦血管病引起腦組織損害而產生的癡呆綜合征，其患病率位居老年期癡呆類型的第二位。現代醫家治療VD多用填精補髓，活血化痰之法，且療效較好［1］。為進一步驗證填精補髓﹑活血化痰開竅法對VD的療效，本研究采用結扎雙側頸總動脈的方法建成VD大鼠模型，觀察填精補髓﹑活血化痰開竅法對VD大鼠海馬組織腦源性神經營養因子（BDNF）和堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選用4～7月齡，體重220～280 g wistar大鼠，雌雄各半，購自長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。動物合格證編號：SCXK-（吉）2011-0004。

1.2 實驗用藥

填精補髓﹑活血化痰開竅方：石菖蒲﹑郁金﹑山藥﹑山萸肉﹑龜板膠﹑川芎﹑紅花﹑肉蓯蓉﹑益智仁組成。以上藥由四川新綠色藥業科技發展股份有限公司生產，批號：1503001。鹽酸多奈哌齊片：衛材（中國）藥業有限公司生產，批準文號：國藥準字H20050978。規格：5 mg/片。

1.3 主要儀器

BDNF酶聯檢測試劑盒：長春市博邁生物器材經銷部。bFGF-4酶聯檢測試劑盒：長春市京濤生物技術有限公司。

1.4 分組及給藥

實驗大鼠中隨機分為假手術組﹑模型組﹑陽性對照藥組﹑填精補髓﹑活血化痰開竅方高﹑中﹑低劑量組，除去死亡后每組選取10只。各治療組在造模后第2 d開始給藥治療，中藥高劑量組（2.0 g/kg體重）﹑中劑量組（1.0 g/kg體重）﹑低劑量組（0.5 g/kg體重），該給藥劑量分別相當于該藥物臨床每天服用劑量的等效劑量4倍﹑2倍和等效劑量。陽性對照組鹽酸多奈哌齊片（0.77 mg/ kg體重）。連續灌胃給藥28 d，每天給藥1次，給藥體積為10 ml/ kg體重。假手術對照組﹑模型組給予同體積蒸餾水。

1.5 模型制備

采用雙血管阻塞（2VO）改良法復制VD大鼠模型［2］。

動物購入后常規飼養，適應環境7 d。戊巴比妥鈉（3 mg/kg腹腔注射）將大鼠麻醉后，仰臥位固定，頸部仔細剪毛并消毒，頸部正中切口，長約 2 cm，切開皮膚后，逐層鈍性分離皮下組織及肌肉等，充分暴露雙側頸動脈，以手術線在兩側頸總動脈近心端﹑遠心端分別雙結扎。縫合皮膚，回籠飼養。假手術組動物操作同模型組，但不結扎動脈血管。

1.6 檢測指標及方法

檢測各組大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的變化。斷頭處死大鼠，冰盤上快速取腦，取海馬組織稱重，移至玻璃勻漿管中，并加入等倍體積的預冷生理鹽水，于冰盤上勻漿，充分研碎，使組織勻漿化。制備好的50%勻漿3 500 r/min離心10 min，提取上清。后采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測海馬組織BDNF和bFGF含量。

1.7 統計學處理

采用Excel 2000統計學軟件對本次的研究數據進行處理分析，結果用（均數±標準差）（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量升高，二者差異有統計學意義（P＜0.05）。與模型組比較，陽性對照組，填精補髓﹑活血化痰開竅法高劑量組，中劑量組海馬組織BDNF含量升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，陽性對照組，填精補髓﹑活血化痰開竅法高劑量組海馬組織bFGF含量升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。結果見表1。

表1　填精補髓、活血化痰開竅法對VD大鼠海馬組織BDNF、bFGF含量的影響（±s，n=10）

表1　填精補髓、活血化痰開竅法對VD大鼠海馬組織BDNF、bFGF含量的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較：*P＜0.05

組別　　劑量　B D N F（p g / m l）b F G F（p g / m l）假手術組模型組陽性對照組高劑量組中劑量組低劑量組9 9 .9 ± 1 0 .0 8*1 0 9 .2 ± 5 .6 4 1 1 7 .3 ± 9 .6 2*1 1 7 .8 ± 9 .8 1*1 1 6 .8 ± 9 .8 1*1 1 5 .0 ± 9 .1 2 --0 .7 7 m g / k g 2 .0 g / k g 1 .0 g / k g 0 .5 g / k g 7 .1 4 ± 0 .6 9*7 .8 3 ± 0 .7 8 8 .4 8 ± 0 .5 5*8 .7 9 ± 0 .7 3*8 .4 2 ± 0 .6 6 8 .2 3 ± 0 .5 4

3 討論

神經營養因子（NeurotroPhic factors，NTF）經研究發現對神經系統有營養及保護作用。研究證實在腦缺血后腦內神經營養因子表達增加，可以起到保護受損腦細胞及促進神經細胞功能恢復的作用。

腦源性神經營養因子（BDNF）和堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）為NTF家族重要成員，有研究顯示BDNF主要由海馬和大腦皮質的神經元產生［3］。它不但能促進神經元存活，還可以通過調節突觸傳遞和可塑性，有改善學習﹑記憶和認知行為的作用［4］。bFGF作為神經營養因子，能保護神經元，促進神經生長。有研究顯示，外源性的bFGF在皮下注射入VD大鼠后，能遷移至海馬，使海馬神經干細胞增殖，修復受損組織，從而改善VD大鼠的運動能力及學習記憶的能力［5］。

血管性癡呆在中醫認為本病屬“癡證”“呆癡”等范疇，且中醫認為本病主要病機在于髓虛毒損，髓虛指腎精不足，髓海虧虛。毒損指瘀毒﹑熱毒﹑痰毒等毒邪破壞形體，損傷腦絡［6］。故本病應采用填精補髓治本，活血化痰開竅治標。通過觀察填精補髓﹑化痰開竅法對VD大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的影響。結果表明：VD大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量較假手術組升高，提示VD大鼠大腦受到缺血損傷刺激后，可應激性激活海馬組織內的BDNF和bFGF表達，發揮其修復神經元的作用［7］。填精補髓﹑活血化痰開竅法高劑量組﹑中劑量組﹑陽性對照組較模型組能提高VD大鼠海馬組織BDNF的含量，證明中藥高劑量組﹑中劑量組能增加VD大鼠海馬組織內BDNF的含量，達到改善VD大鼠學習及記憶能力的目的。而中藥高劑量組和陽性對照組可提高VD大鼠海馬組織bFGF的含量，且高于模型組，說明填精補髓﹑化痰開竅法高劑量組能增加VD大鼠海馬組織內bFGF的含量，從而提高VD大鼠的認知功能。

參考文獻

［1］韓德軍，楊錫燕，田金洲，等.中藥治療癡呆隨機對照文獻治法及用藥規律分析［J］.中醫雜志，2014，55（12）：1051-1054.

［2］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2002：1060.

［3］Kawamoto Y，Nakamura S，Nakano S，et al.Immunohistochemical localization of brain-derived neurotrophic factor in adult rat brain［J］.Neuroscience，1996，74（4）：1209-1226.

［4］Pandya CD，Kutiyanawalla A，Pillai A.BDNF-TrkB signaling and neuroprotection in schizophrenia ［J］.Asian journal of psychiatry，2013，6（1）：22-28.

［5］葉建新，林航，穆軍山，等.bFGF對血管性癡呆大鼠海馬神經干細胞的影響［J］.中國比較醫學雜志，2009，19（11）：1-5.

［6］王永炎.關于提高腦血管疾病療效難點的思考［J］.中國中西醫結合雜志，1997，17（4）：195-196.

［7］張晉霞，傘云琨，李晶，等.養血清腦顆粒對血管性癡呆大鼠海馬CA1區BDNF和bFGF蛋白表達的影響［J］.世界科學技術-中醫藥現代化，2015，17（11）： 2246-2251.

Effect of Tianjingbusui and Huoxuehuatankaiqiao on the Contents of Basic Fibroblast Growth Factor and Brain-derived Neurotrophic Factor in Hippocampus of Vascular Dementia Rats

XU Yunlong1LIU Ying1TAI Xiaofeng2ZHAO Jianjun11 Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130021，China，2 Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China

【Abstract】

Objective To explore the effect of tianjingbusui huoxuehuatankaiqiao on the contents of basic fibroblast growth factor（bFGF）and brain-derived neurotrophic factor（BDNF）in hippocampus of vascular dementia（VD）rats.Methods The vessel occlusion（2VO）was modified to establish the VD model，and the contents of bFGF and BDNF in hippocampus were observed.Results Compared with normal group，the contents of bFGF and BDNF were increased（P＜0.05）in model group.Compared with model group，the contents of BDNF were increased（P＜0.05）in the high，middle dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group，the contents of bFGF were increased（P＜0.05）in the high dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group.Conclusion The tianjingbusui and huoxuehuatankaiqiao could increase the contents of bFGF and BDNF，and improve the learning and memory capability.

【Key words】Tianjingbusui，Huoxuehuatankaiqiao，Vascular dementia，Brain derived neural nutrition factor，Basic fibroblast growth factor

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.02.138

【中圖分類號】R285.5

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）02-0186-02-0186-03