維藥硬尖神香草中熊果酸的薄層鑒別方法研究

夏提古麗·阿不利孜　凱撒·蘇萊曼　阿迪力·艾斯托拉　魏鴻雁*

1.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆　烏魯木齊　830002；2.新疆維吾爾自治區(qū)和田地區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆　和田　848000

?

維藥硬尖神香草中熊果酸的薄層鑒別方法研究

夏提古麗·阿不利孜1凱撒·蘇萊曼1阿迪力·艾斯托拉2魏鴻雁1*

1.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆烏魯木齊830002；2.新疆維吾爾自治區(qū)和田地區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆和田848000

【摘要】目的：以熊果酸為對照品，建立新疆維吾爾藥材硬尖神香草的薄層色譜鑒別方法。方法：收集兩個產(chǎn)地8個批次的硬尖神香草生藥材，根據(jù)2010版《中國藥典》附錄VI B(薄層色譜法)中相關(guān)項下方法進(jìn)行薄層鑒別，以熊果酸作為對照品，考察不同展開系統(tǒng)、顯色劑、溫度、濕度、點樣量和不同廠家硅膠板對尖神香草中熊果酸薄層鑒別的影響，從中選出維藥硬尖神香草中熊果酸薄層鑒別的最佳條件。結(jié)果：吸取供試品溶液和對照品溶液各3μl點于青島海洋化工有限公司產(chǎn)高效硅膠板上，在三氯甲烷-丙酮(12∶1)系統(tǒng)中展開，噴以10%硫酸乙醇顯色，供試品與熊果酸對照品在同樣的位置顯紫色的斑點，所得的薄層色譜分離效果較好。結(jié)論：研究建立的硬尖神香草藥材中熊果酸的薄層鑒別方法操作簡便，重現(xiàn)性好，專屬性強，可以用于維吾爾藥硬尖神香草的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】硬尖神香草；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層鑒別；熊果酸

硬尖神香草HyssopucuspidatusBoriss為唇形科植物，主要產(chǎn)于新疆北部阿勒泰地區(qū)[1]，維吾爾醫(yī)常用名稱為神香草。神香草的維吾爾名“祖帕”，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，維吾爾藥分冊》、《維吾爾藥志》。具有清除異常黏液質(zhì)、溫肺平喘、祛寒止咳、燥濕祛痰、發(fā)汗解毒、消炎退腫的功效，臨床用于濕寒性和黏液質(zhì)性呼吸器官疾病，如寒性哮喘、咳嗽感冒、濕性痰多、胸膜炎、氣管炎、肺炎及水腫等病。研究發(fā)現(xiàn)，硬尖神香草全草含有黃酮類、三萜類、烷烴類、甾體類和揮發(fā)油等成分。熊果酸是三萜成分的代表性成分之一，是廣泛分布的五環(huán)三萜類化合物，在多科植物中以游離或糖苷的形式存在[2]，具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，如抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、降血糖、抗菌等[3]。研究以熊果酸對照，建立硬尖神香草藥材的薄層鑒別方法，為硬尖神香草的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器Metter AE163電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);KQ3200DA超聲儀(昆山市超聲儀器公司);薄層G板(50mm×100mm)、薄層H板(50mm×100mm)、高效板(200×100mm)青島海洋化工有限公司；HSGF 254板(50mm×100mm，煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司)。

1.2試藥神香草采自阿勒泰地區(qū)(見表1)，經(jīng)新疆阿勒泰地區(qū)哈薩克醫(yī)院庫里夏西主任藥師鑒定為唇形科植物硬尖神香草HyssopucuspidatusBoriss.;熊果酸(批號：110742-201421，中國藥品生物制品檢定所)，所用試劑均為分析純。

表1　硬尖神香草藥材來源

2方法與結(jié)果

2.1溶液制備

2.1.1對照品溶液的制備精密稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品10mg，加甲醇溶解制得濃度為1mg/ml的熊果酸對照品溶液。

2.1.2供試品溶液的制備取硬尖神香草粉末10g，加甲醇15ml，密塞，超聲(700W，40Hz)提取20min，濾過，取濾液作為供試品溶液[4]。

依照2010版《中國藥典》附錄VI B (薄層色譜法)中相關(guān)項下方法進(jìn)行照薄層分析[5]，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，放入展開劑中展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外燈(254nm，365nm)下檢視。

2.2展開系統(tǒng)選擇分別吸取供試品溶液和熊果酸對照品溶液，點于自制薄層板上，放入展開劑中展開，參考文獻(xiàn)[6] ，選擇展開劑為三氯甲烷-丙酮(12∶1)，石油醚-丙酮-甲醇(8∶2∶0.3)，環(huán)已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(20∶5∶4∶2)，環(huán)已烷-丙酮-乙酸乙酯(6∶2∶1)為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外燈(254nm，365nm)下檢視。供試品色譜中，在于對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點。結(jié)果見圖1。

結(jié)果顯示展開劑①(石油醚-丙酮-甲醇)和展開劑②(三氯甲烷-丙酮 )效果比較好，對照品溶液與供試品溶液在365nm紫外燈下相同位置顯熒光斑點，在日光下顯紫色斑點，且其余成分分離效果較好，斑點清晰，數(shù)目較多，拖尾現(xiàn)象不明顯，Rf值在0.3~0.8之間；展開劑 ③(環(huán)已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇)對照品溶液與供試品溶液斑點不在同一位置，拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，斑點不清晰；展開劑④(環(huán)已烷 -丙酮-乙酸乙酯)與①和②相比分離效果較差。由于展開劑①的組分較展開劑②復(fù)雜而且Rf值也比較理想，因此選定展開劑②為最佳展開劑。

2.3顯色劑選擇分別吸取供試品溶液和熊果酸對照品溶液，點與自制硅膠薄層板上，放入“2.2”確定的展開劑中展開，取出，晾干，用不同的顯色劑顯色(10%硫酸乙醇、5%磷鉬酸、5%硫酸乙醇溶液)，結(jié)果顯示在相同展開劑條件下，10%硫酸乙醇顯色效果較好，在日光下，對照品與供試品在同一位置顯紫色斑點，在365mm紫外燈下相同位置顯熒光。

2.4溫度考察分別在溫度為10℃、20℃、30℃、40℃條件下，按“2.2”項下的薄層鑒別方法進(jìn)行試驗。結(jié)果，不同的溫度對硬尖神香草藥材的薄層鑒別沒有影響。

2.5濕度考察分別吸取供試品溶液和熊果酸對照品溶液，在相對濕度為30%、40%、60%、80%條件下按“2.2”項下薄層鑒別方法進(jìn)行試驗。結(jié)果不同的濕度對硬尖神香草薄藥材的薄層鑒別沒有影響。

2.6點樣量考察分別吸取2、3、4、5、6、7、8μl供試品溶液和對照品溶液，點于同一硅膠板上(200mm×100mm)，放入“2.2”項下確定的展開劑中展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液顯色。結(jié)果硬尖神香草中熊果酸含量較高，因此供食品和對照品溶液點樣量3μl即可，點樣量過大有斑點擴(kuò)散現(xiàn)象。

2.7不同薄層板的考察吸取供試品和對照品溶液各3μl，點于不同硅膠板上放入“2.2”項下確定的展開劑中展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液顯色。結(jié)果表明，青島海洋H板Rf值比較理想，熊果酸等成分分離度好，斑點清晰，無擴(kuò)散和拖尾現(xiàn)象。

2.8硬尖神香草中熊果酸薄層鑒別按照“2.1.2”項下提取方法制備8個硬尖神香草供試品溶液，吸取對照品和供試品3μl，點于青島海洋化工廠產(chǎn)高效硅膠板之上，放入“2.2”項下確定的展開劑中展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液顯色分別置日光和紫外燈365nm下檢視。結(jié)果如圖3、4所示。

3討論

熊果酸是硬尖神香草的主要化學(xué)成分之一，也是活性成分之一，在硬尖神香草中含量可達(dá)0.9%，可作為生藥材薄層鑒別的對照品，且以熊果酸為對照品的硬尖神香草藥材薄層鑒別方法尚無文獻(xiàn)報道。本研究采用三氯甲烷-丙酮(12∶1)為展開劑進(jìn)行薄層鑒別，

該方法操作簡便、可靠、分離度好、斑點清晰，并進(jìn)行了方法學(xué)驗證，結(jié)果顯示本薄層色譜鑒別法重現(xiàn)性好、專屬性強。8批硬尖神香草藥材進(jìn)行試驗結(jié)果顯示，供試品與對照品在相同位置顯紫色，其余成分的色譜行為相似；顯色后在365nm下檢視，比日光下檢視更為清晰。

參考文獻(xiàn)

[1]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會．中國植物志(第六十六卷)[M]．北京：科學(xué)出版社，1977：243-244．

[2]彭海兵，儲金秀．熊果酸對矽肺大鼠的早期抗氧化作用[J]．環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2015，32(5)：476-480.

[3]劉忠慶，廖洪利． 熊果酸的抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].西南國防醫(yī)藥，2014，24(6)：682-683．

[4]帕麗達(dá)·阿不力孜，阿提坎木·瓦合甫．HPLC法測定維藥神香草及混淆品大苞荊芥中齊墩果酸個熊果酸的含量測定[J]．中成藥，2014，36(12)：2570-2573．

[5]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄VIB．

[6]張秋紅，劉素清． 熊果酸成分薄層分析條件綜述[J].時珍國醫(yī)國藥，2014，11(12)：1133-1134．

TLC Identification of Ursolic Acid in the Uyghur MedicineHyssopucuspidatusBoriss

XIA Tiguli·A Bulizi1KAI Sa·Sulaiman1A Dili·Aisituola2WEI Hongyan1*

1.XinJiang Institute of Chinese Traditional Medica and Ethical Materia Medica,Urumqi 830002,China;2.Hotan Uyghur Medical Research Institute,Hotan,848000,China

Abstract:Objective To set up the TLC identification of Hyssopu cuspidatus Boriss with ursolic acid as standard compound.Method According to the Chinese Pharmacopoeia (2010 Revision) Appendix VI B (TLC), different extract methods and solvents,developing system,comogemc agents, temperature, humidity, drawing amounts and thin layer boards were investigated for optimizing TLC identification of ursolic acid. Results Drawing 3μl solution on efficient layer board (200mm×100mm,Qingdao Ocean Chemical Co.Ltd), developing system trichloromethane-acetone(12∶1) was applied.After spaying with 10% sulfuric acid in ethanol, significant purple color appeared on the sample solution with the ursolic acid at same position.Conclusion The established TLC identification on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss(ursolic acid as the standard compound) is simple, repeatable and specific. It can improve and lay a foundation on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss.

Key words:Hyssopu cuspidatus Boriss;Quality Standards;TLC;Ursolic Acid

(收稿日期：2015.12.23)

【中圖分類號】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)04-0013-02

作者簡介：夏提古麗·阿不利孜 (1984-)，女，助理研究員,主要從事中藥民族藥學(xué)研究。E-mail：XATGUL212@163.com通信作者：魏鴻雁(1969-)，女，研究員,主要從事藥學(xué)研究。E-mail：whywlmq@sina.com

基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)公益性科院院所項目(KY2015128)，新疆維吾爾自治區(qū)科研機構(gòu)創(chuàng)新發(fā)展專項資金(2014018)。