HPLC波長切換法測定復方紅根草片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量

唐德智

南寧食品藥品檢驗所，廣西　南寧　530001

?

HPLC波長切換法測定復方紅根草片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量

唐德智

南寧食品藥品檢驗所，廣西南寧530001

【摘要】目的： 建立HPLC波長切換法同時測定復方紅根草片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的測定方法。方法：采用Waters SunFire C18(4.6mm×250mm，5μm) 色譜柱；流動相：甲醇-水(52∶48)；流速：1.0ml/min；檢測波長：225nm(0~10min，穿心蓮內酯)，254nm(10~30min)。結果：穿心蓮內酯在0.031～0.553μg范圍內線性關系良好(r=0.9999，n=6)，平均回收率為99.95%，RSD為1.5%(n=9)；脫水穿心蓮內酯在0.049～0.887μg范圍內性關系良好(r=0.9998，n=6)，平均回收率為99.31%，RSD為1.1%(n=9)。結論：該方法簡便、快捷、準確，可用于該制劑的質量控制。

【關鍵詞】復方紅根草片；穿心蓮內酯；脫水穿心蓮內酯；波長切換

復方紅根草片是由金銀花、穿心蓮、紅根草、魚腥草、野菊花5味中藥制成的中藥制劑，具有清熱解毒的功效，臨床用于急性咽喉炎、扁桃體炎、腸炎、痢疾等。原質量標準簡單，僅規(guī)定常規(guī)檢查，無定性定量檢測指標，不能有效控制藥品質量[1]。方中穿心蓮具有清熱解毒、涼血、消腫的功效，而穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯是穿心蓮藥材的主要有效成分。《中國藥典》2010年版一部將穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯作為穿心蓮藥材的含量測定質量控制指標[2]。研究參考有關文獻 [3-5]，采用HPLC波長切換法同時測定復方紅根草中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，方法準確，操作簡便，可用于該制劑的質量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器Waters 2695高效液相色譜儀，2489UV檢測器(美國沃特斯公司)；UV-2550型紫外可見分光光度計(日本島津公司)；S180H型超聲波清洗器(德國Elma公司)；XS205DU型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2試藥穿心蓮內酯對照品(批號：110797-200307)、脫水穿心蓮內酯對照品(批號：110854-201007)均購于中國食品藥品檢定研究院；復方紅根草片(市售藥品，每片重0.31g，批號：130109、130307、130501、130904、131106)；甲醇、磷酸為色譜純，水為超純水。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Waters SunFireTM C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇-水(52∶48)；檢測波長：0~10min 225nm(穿心蓮內酯),10~30min 254nm(脫水穿心蓮內酯)；流速：1.0ml·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10μl。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液制備分別精密稱取干燥至恒重的穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品各適量，置同一50ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，配制成1ml含穿心蓮內酯61.4μg 、脫水穿心蓮內酯98.6μg的混合對照品儲備溶液，備用。

2.2.2供試品溶液的制備取本品內容物，混勻，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，浸漬30min，超聲處理30min(功率300W，頻率40kHz)，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備按處方比例及工藝制備缺穿心蓮藥材的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.3方法學考察

2.3.1專屬性試驗分別精密吸取供試品溶液、陰性樣品溶液和混合對照品溶液的稀釋液各10μl，在上述色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄液相色譜圖，結果見圖1。由色譜圖可見，在與對照品色譜峰相應的位置上，有相同保留時間的色譜峰，陰性樣品對測定無干擾。

2.3.2線性關系考察精密吸取“2.2.1”項下混合對照品儲備溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0ml分別置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成系列濃度混合對照品溶液，取上述對照品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進樣量x(μg)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標，進行線性回歸，繪制標準曲線。穿心蓮內酯回歸方程：Y=2.45×106x+8.39×103，r=0.9999，脫水穿心蓮內酯回歸方程：Y=1.72×106x+1.61×104，r=0.9998。結果表明穿心蓮內酯在0.031～0.553μg、脫水穿心蓮內酯在0.049～0.887μg范圍內，與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.3精密度試驗精密吸取“2.3.2”項下中間質量濃度的混合對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，每次10μl，記錄色譜峰峰面積，結果穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯峰面積的RSD分別為1.1%、0.7%。

2.3.4穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液(批號：130501)，按上述色譜條件，分別于1、2、4、8、12、24h進樣分析，記錄色譜峰面積，結果表明穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯峰面積的RSD分別為1.2%、1.5%，表明供試品溶液在24h內穩(wěn)定。

2.3.5重復性試驗稱取同一批樣品(批號：130501)0.5g，平行稱取6份，按“3.2”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，測得穿心蓮內酯平均含量為1.48mg/g，RSD為1.5%，脫水穿心蓮內酯平均含量為2.42mg/g，RSD為1.3%，。

2.3.6加樣回收率試驗精密稱取已知含量的同一批號樣品(批號：130501)約0.25g，平行稱取9份，置具塞錐形瓶中，分別加入穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液, 按上述色譜條件測定,計算回收率。結果穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的回收率分別為：99.95%(RSD=1.5%，n=9)；99.31%(RSD=1.1%，n=9)。結果表明，采用本方法測定復方紅根草片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，方法回收率良好。

2.4樣品測定取5批復方紅根草片，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，每批平行制備3份，按上述色譜條件測定，每份樣品重復測定2次，以外標法計算樣品中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，結果見表1。

表1　樣品含量測定結果　(n=3)

3討論

3.1在供試品溶液制備過程中，分別考察了不同濃度乙醇、甲醇等溶劑進行超聲提取，結果以50%甲醇超聲提取效率較好。同時比較超聲提取法與回流法，結果表明，超聲提取法提取的含量高于回流法提取的含量，故選擇超聲提取法制備供試品溶液。

3.2取穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品溶液，置UV-2550紫外可見分光光度計下于190～400nm波長范圍內進行紫外光譜掃描，結果穿心蓮內酯在225nm處有最大吸收，脫水穿心蓮內酯在254nm處有最大吸收。為保證各成分在檢測波長處有最大吸收，根據穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯在色譜圖中出現順序的不同，依次改變檢測波長，來達到同時測定復方紅根草片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的目的。

3.3未見同時測定復方紅根草片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的報道，實驗采用HPLC切換波長的方法，同時測定復方紅根草片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，該方法簡便、準確，可用于該制劑的質量控制。

參考文獻

[1]衛(wèi)生部藥品標準.中藥成方制劑(第2冊)[S].1990:170.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部) [S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:205.

[3]鐘名誠.復方紅根草片質量標準的研究[J].中國藥品標準，2006,7(5):25-29.

[4]姚潔，陳健文.HPLC法測定玉葉清火膠囊中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2012,10(6):35-36.

[5]張若良，鐘國慶，劉小玉.HPLC法測定穿黃清熱膠囊中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量[J].江西中醫(yī)藥大學學報，2014,26(5):64-70.

(收稿日期：2015.12.20)

【中圖分類號】R284.1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)04-0045-02

作者簡介：唐德智，男，副主任中藥師。E-mail：tangdz7497@163.com