甲狀腺腫瘤與循環RNA研究進展

肖海鵬，喻 爽

中山大學附屬第一醫院內分泌科，廣東 廣州 510080

?

甲狀腺腫瘤與循環RNA研究進展

肖海鵬，喻 爽

中山大學附屬第一醫院內分泌科，廣東 廣州 510080

［摘要］甲狀腺癌是內分泌系統最常見的腫瘤。研究發現，外周血循環RNA含量在多種惡性腫瘤患者血清中特異性表達，是潛在的腫瘤診斷的生物學標志和藥物治療靶點。血清甲狀腺特異mRNA（包括促甲狀腺受體mRNA和甲狀腺球蛋白mRNA）被報道在甲狀腺腫瘤患者中異常表達，可以作為腫瘤診斷及其復發轉移的分子標志物。近年研究顯示，非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA）在細菌、真菌和哺乳動物等多種生物體的活動中可作為癌基因或抑癌基因，對腫瘤的發生、發展發揮調控作用，并且在循環血中穩定存在，ncRNA有希望成為腫瘤診斷的新型無創標志物。該研究介紹與甲狀腺腫瘤相關的循環RNA最新研究進展，并著重討論循環mRNA、微小RNA（miRNA）、長鏈非編碼RNA（long non-coding，lncRNA）及環狀RNA（circRNA）在甲狀腺腫瘤發生、轉移中的作用。

［關鍵詞］甲狀腺腫瘤；循環RNA；信使 RNA；非編碼RNA

肖海鵬，醫學博士、教授、博士生導師，中山大學附屬第一醫院院長、黨委書記，中山大學附屬第一醫院內分泌科學科帶頭人、首席專家。現任中國醫師協會內分泌代謝科分會副會長、甲狀腺疾病學組主任委員，中國醫師協會全國醫師定期考核內分泌專業編委會副主任委員，廣東省醫師協會內分泌科醫師分會主任委員，廣東省醫師協會第三屆理事會常務理事，中華醫學會廣東省內分泌學會副主任委員，美國甲狀腺學會（ATA）委員，美國內分泌學會繼續教育委員會（CME）委員，歐洲醫學教育聯盟（AMEE）委員。同時擔任SCI 學術期刊Cardiovascular Endocrinology審稿專家，《中華醫學雜志》《中華內分泌代謝雜志》《中國糖尿病學雜志》及《中華健康管理學雜志》等多家國內核心期刊的編委和特約審稿專家。主持和參與“循環microRNA和甲狀腺癌”及“甲狀腺疾病診治”等多項國家自然科學基金和廣東省科技計劃課題。近5年，以第一或通信作者在JACC、JCEM等權威雜志發表SCI文章10余篇，參與編寫著作10余部。其領導的團隊在甲狀腺腫瘤的診治和機制方面研究達國際先進水平，例如首次報道了血清miRNA鑒別甲狀腺結節良惡性的診斷價值，提出miRNA的差異表達與BRAF基因突變相互作用于甲狀腺乳頭狀癌的發生、發展，深入探討miR-20b、miR-218-2與甲狀腺腫瘤的發生的機制等，這些創新性的研究使該課題組在甲狀腺腫瘤分子標志物的研究方面處于國內外領先地位。

Circulating RNA in thyroid cancer

XIAO Haipeng, YU Shuang
（Department of Endocrinology, the First A ffi liated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China）

Correspondence to:XIAO Haipeng E-mail:xiaohp@mail.sysu.edu.cn

［Abstract］Thyroid cancer is the most common endocrine gland malignanct tumor.Numerous studies have found that the content of peripheral blood circulating RNA in various cancer types is aberrantly expressed, which couldbe a potential biological diagnostic marker and therapeutic target.Tissue-speci fi c messenger RNA has a dysregulated expression and may be used for the diagnosis and residual/metastatic detection of thyroid cancer.Recent studies have showed that non-coding RNA（ncRNA）could act as oncogene or tumor suppressor gene in bacteria, fungi and mammals.It plays a regulatory role in occurrence and development of tumors and stably exists in peripheral blood.It is hopeful that it will become a new marker for diagnosis of tumors.This review introduces some latest research progress on circulating RNA associated with thyroid cancer; and emphatically discuss the role of mRNA, microRNA（miRNA）, long non-coding RNA（lncRNA）and circular RNA（circRNA）in thyroid tumorigenesis and metastasis

［Key words］Thyroid tumor; Circulating RNA; mRNA; Non-coding RNA

甲狀腺癌是內分泌系統最常見的腫瘤，其發病率占全身惡性腫瘤的2%，占內分泌系統惡性腫瘤的95%［1］。2015年美國甲狀腺協會（American Thyroid Association，ATA）指南指出甲狀腺癌呈逐年上升趨勢，每年新診斷的甲狀腺癌由2009年的37 200例增長至2014年的63 000例，發病率由1975年的4.9/10萬增長到2009年的14.3/10萬，其中甲狀腺癌的增長幾乎均由甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）的發生率增加所致［2］。甲狀腺乳頭狀癌屬于分化型甲狀腺癌（differentiated thyroid cancer，DTC），約占所有甲狀腺癌的90%。PTC生長緩慢，預后良好；然而，由于其發病率及復發率（20%～40%）高，死亡率占甲狀腺癌總死亡率的50%以上［3］。此外，至2019年，PTC將成為女性的第三大腫瘤，其國家醫療支出將達190億～210億美元，給家庭和社會帶來巨大的經濟負擔［2］。

目前對于甲狀腺腫瘤鑒別診斷常見方法包括臨床檢查、甲狀腺核素掃描、甲狀腺B超和細針抽吸活檢（fine needle aspiration，FNA）等［4］。其中FNA是最重要的檢查項目，但是FNA僅能進行細胞學檢查，而且這項技術與穿刺者的經驗以及標本量直接相關，可漏診1/3的甲狀腺惡性腫瘤，其中包括甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺濾泡狀腺瘤的鑒別，給臨床的診斷和治療帶來了不利［5］。再者，FNA為有創檢查，患者接受程度較低，故存在較大的局限性，臨床迫切需要尋找一種新的無創診斷生物學標志物。

隨著對腫瘤相關基因研究的深入，目前人們對PTC發病的分子機制有了進一步認識。研究表明，BRAF基因、RAS基因的突變及RET/PTC基因重排與PTC的發生及其侵襲性等均存在不同程度的相關性［6］，其中BRAF基因突變與PTC關系最為密切。BRAFV600E突變與PTC的多灶性、淋巴結轉移及較高的臨床病理分期密切相關，從而預示較差的腫瘤預后［7-8］。然而，由于該基因突變僅存在于40%～45%的PTC患者中［7］，其作為診斷及預后標志具有一定的局限性。此外，由于利用組織樣本進行分子生物學檢測也存在著一定的局限性，如標本來源的限制、無法連續檢測及隨訪等，因此腫瘤患者外周血核酸分子檢測成為醫務工作者關注的熱點。

1 腫瘤循環 RNA

血漿、血清中游離RNA的發現是科學發展史上的一個重大突破。傳統觀念一直認為，游離RNA不可能穩定存在于血漿、血清中，因為RNA本身極不穩定且血液循環中存在的大量核酸酶也會影響其穩定性。直到20世紀80年代末，幾篇報道清楚地闡明了可擴增的循環RNA的存在［9-10］，并且幾個研究小組檢測到惡性黑素瘤、乳腺癌和肺癌患者的血清中和腫瘤相關RNA［11-13］。在此研究的基礎上，2000年Poon等［14］在孕男胎的孕婦血漿中發現了Y染色體特異性鋅指蛋白（Y chromosome specific zinc finger protein，ZFY）mRNA，自此開辟了孕婦血漿血清中游離RNA的研究，也進一步證實循環RNA的存在。

目前對于腫瘤RNA在循環血中能穩定存在及來源還未完全闡明，有研究指出血漿RNA可以通過與DNA形成雜交體而免受Rnase的降解。El-Hefnawy等［15］通過實驗發現Rnase-H對于RNA的回收無效，但是Rnase-H可以降解RNA-DNA雜交體，所以推測雜交體這種假說不是保護RNA免遭RNase降解的機制；另一方面El-Hefnawy等［15］的研究提示，內源性RNA在體內能穩定存在數小時，推測可能由于循環RNA與脂質結合，形成囊泡或脂蛋白，防止核糖核酸酶降解。既往研究推測循環RNA的來源包括被動過程和主動過程，被動過程即腫瘤細胞壞死后游離RNA進入循環血中；主動過程指循環RNA通過以凋亡小體或者微粒體形式從細胞中釋放。García等［16］的研究提示，在不同的疾病中，不同的RNA從囊泡中釋放至循環血中，并且推測RNA的富集與其特定的序列有關。Bolukbasi等［17］發現在惡性膠質細胞瘤中，被富集的RNA均有一長度為25 bp的莖環結構，其具有miR-1289和CTGCC序列結合位點，并發現該囊泡的形成與miR-1289在細胞中表達水平相關。

2 循環mRNA與PTC

隨著分子生物技術發展，甲狀腺相關mRNA被報道作為腫瘤診斷及其預后的分子標志物，尤其是甲狀腺特異性mRNA，主要包括促甲狀腺激素受體（thyroid-stimulating hormone receptor，TSHr）mRNA和甲狀腺球蛋白（thyroglobulin）mRNA。Wagner等［18］利用quantitative RT-PCR檢測72例患者術前TSHr mRNA的表達（36例DTC和36例甲狀腺良性結節），其研究結果提示，在FNA細胞學檢測為不確定的患者中，TSHr mRNA靈敏度和特異度分別為75%和78%，并指出TSHr mRNA結合FNA將提高檢測的靈敏度和特異度，分別達到95%和89%。同樣，Chia等［19］研究檢測60例FNA不能確診的甲狀腺腫瘤樣本，與術后病理比較，其TSHr mRNA檢測的準確率達68%。因此，雖然FNA仍有不可替代的地位，但TSHr mRNA可能可以作為FNA不能確診患者的補充診斷方法。

血清甲狀腺球蛋白是目前臨床用于甲狀腺腫瘤預后和復發的監測因子，血清甲狀腺球蛋白水平術后監測腫瘤術后復發具有較高的靈敏度，但是仍存在一定的缺陷：對于甲狀腺腫瘤術后TSH抑制治療的患者監測甲狀腺球蛋白缺乏靈敏度；此外，在甲狀腺球蛋白抗體陽性的患者中，血清甲狀腺球蛋白水平下降［20-21］。研究提示，循環甲狀腺球蛋白mRNA在評估PTC復發及轉移具有一定作用，可能可以彌補甲狀腺球蛋白檢測的缺陷。Chinnappa等［22］檢測19例病理提示轉移DTC患者甲狀腺球蛋白mRNA的表達，其靈敏度達到100% ，同時隨訪48例甲狀腺球蛋白mRNA陰性DTC患者，其中44例在術后隨訪中均無復發，其特異度達到94%，并提出與血清甲狀腺球蛋白水平有較好的相關性。然而，Elisei等［23］隨訪9例甲狀腺球蛋白mRNA為陽性DTC患者4年，在隨訪期間9例患者均未發生復發，提示甲狀腺球蛋白mRNA作為腫瘤復發因子缺乏一定的準確性。對于甲狀腺球蛋白mRNA在甲狀腺腫瘤的術后評估的作用，目前文獻報道缺乏一致性，可能由于檢測引物設計與不同實驗條件所致［24］。此外，TSHr mRNA不僅可以作為PTC診斷的標志，而且其作為評估PTC復發及轉移也有一定的作用。Barzon等［25］的研究提示，TSHr mRNA在PTC復發及轉移評估中有較高的特異度（80.6%）及較低的靈敏度（40%）。Chia等［26］研究術前及術后TSHr mRNA的表達，發現在術后第一天TSHr mRNA持續高表達，提示腫瘤有轉移及未切除病灶的可能。Milas等［27］指出，在甲狀腺球蛋白抗體陽性的患者中，檢測TSHr mRNA表達的意義高于血清甲狀腺球蛋白水平的鑒定。

3 非編碼RNA與PTC

在哺乳動物基因組中，有70%～90%的序列可被轉錄，而僅1%～2%的序列可編碼蛋白。那些不編碼蛋白的RNA序列，即非編碼RNA（noncoding RNA，ncRNA）［28］。根據轉錄本的序列長度，ncRNA可分為長度小于200 bp的短鏈非編碼RNA，如微小RNA（microRNA，miRNA）、與PIWI蛋白相互作用的piRNA（PIWI-interacting RNA）、轉錄本長度超過200 bp的長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA），以及新近發現的環狀RNA（circular RNA，circRNA）。由于缺少有效的開放閱讀框，ncRNA不具備蛋白編碼功能，曾一度被認為是基因組轉錄過程中產生的廢物。然而，近年來的研究表明，ncRNA可參與染色質修飾和轉錄調節等，從多個層面調控基因的表達，與細胞、組織乃至整個生物體的諸多生物學行為有密切聯系。

miRNA是在真核生物中發現的一類內源性的具有調控功能的非編碼單鏈小分子RNA，長為20～25個核苷酸［29］。人類超過半數miRNA位于與腫瘤相關的基因區域或脆性位點，miRNA與甲狀腺腫瘤的關系引起了人們高度的重視。有關PTC的多個研究結果顯示，腫瘤組織的miR-221、miR-222、miR-146b基因表達水平呈一致性增高［30-32］，雖然甲狀腺腫瘤組織的miRNA表達譜與甲狀腺腫瘤發病相關，但是檢測技術復雜、創傷大，極大地限制了其臨床應用。相對而言，外周血容易獲得和檢測，便于臨床應用和推廣。在血漿或血清中miRNA以相當穩定的形式存在，不受內源性RNase活性的影響。2012年，我們課題組首次探討利用高通量的測序技術，建立甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺良性結節和正常對照者血清miRNA表達譜，分析血清miRNA的表達差異，探討可能區分甲狀腺癌與甲狀腺良性結節和正常對照者的血清miRNA診斷分子標志物［33］。

我們的研究提示，不同的miRNA在血清和組織中表達呈現出不一致，血清let-7e可能是由于機體循環免疫細胞對腫瘤的反應，而miR-151-5p和miR-222可能是由于腫瘤細胞的凋亡或腫瘤細胞的主動分泌過程所致。因此，對于血清miRNA的來源，可能是由于機體對于疾病狀態的整體調節，是由多條途徑導致的，而非單一因素導致血清miRNA的差異表達［33］。在我們研究的基礎上，Lee等［34］研究術后有復發和無復發PTC患者，提示miR-222和miR-146b在復發的PTC患者中明顯升高；相比于正常對照，血漿miR-222和miR-146b在PTC中明顯升高，并且在腫瘤切除后其血漿表達水平顯著下降，提出miR-222和miR-146b與PTC腫瘤的復發密切相關，可能可以作為腫瘤復發的預測因子。

lncRNA是長度大于200個核苷酸的非編碼RNA，其本身缺乏明顯的開放閱讀框，不參與蛋白質編碼功能，以RNA形式在多種層面上調控基因的表達水平［35］。近年有研究表明，lncRNA參與了X染色體沉默、基因組印記、染色質修飾、轉錄激活、轉錄干擾和核內運輸等多種重要的調控過程［36］。隨著對lncRNA研究的深入，發現在腫瘤細胞中某些特定的lncRNA的表達水平會發生明顯改變，這可能與許多生物學過程有密切聯系。lncRNA在甲狀腺癌中的作用機制的研究尚處于起步階段。Jendrzejewski等［37］研究認為一個名為乳頭狀甲狀腺癌易感候選基因3（papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3，PTCSC3）的lncRNA基因位于下游3.2 kb的rs94428914q.13.3基因位點。PTCSC3的表達被認為有甲狀腺特異性，并且在甲狀腺瘤組織和甲狀腺細胞系中大幅下調。Yoon等［38］報道了一種新的下調基因，NAMA（non-coding RNA associated with MAP kinase pathway and growth arrest）非編碼RNA與MAP激酶信號通路和生長阻滯相關，它與PTC活化BRAF突變V600E高度關聯。

由于lncRNA片段大于200 bp，對于在循環血中穩定存在的可能性一直被質疑，但近期有相關的文獻報道在循環血中穩定存在并作為腫瘤特異分子標志物。Zhou等［39］檢測70例GC患者和70例正常對照組血漿中8個既往被報道lncRNA的表達，其中H19在血漿中穩定表達，在GC組中水平明顯升高，其靈敏度和特異度分別達到82.9%和72.9%，提示其作為診斷標志物的可能性。Li等［40］的研究顯示，血清HOTAIR在宮頸癌中表達升高，并且與淋巴結轉移及腫瘤分期密切相關。我們課題組前期通過芯片篩查PTC中lncRNA的表達譜，也正在進行血清lncRNA的檢測，試圖為甲狀腺腫瘤的分子診斷標志物提供新的思路。

circRNA是新近確認的一類特殊的非編碼分子，是繼miRNA和lncRNA后RNA家族的一顆極具發展潛力的新星，也是RNA領域最新的研究熱點。與傳統的線性RNA（linear RNA，含5’和3’末端）不同，circRNA分子呈封閉環狀結構，不受RNA外切酶影響，表達更穩定，不易降解。circRNA具有在細胞質中含量豐富、結構保守并且能穩定存在的特點。目前在功能上研究提示有3種可能機制：circRNA分子富含miRNA結合位點，在細胞中起到miRNA海綿的作用，進而解除miRNA對其靶基因的抑制作用，升高靶基因的表達水平。這一作用機制被稱為競爭性內源RNA機制。通過與疾病關聯的miRNA相互作用，circRNA在疾病中發揮著重要的調控作用［41］。此外，有研究提出，circRNA可能通過RNA-binding protein與蛋白相結合形成RNA-protein complex而發揮功能；另外，circRNA可能含有內部核糖體進入序列，從而參與蛋白質的翻譯過程［41-42］。研究提示circRNA在細胞質中穩定存在，在血清中由于內源性核酸酶的作用，存在的時間小于15 s［42］，但是這一說法目前也受到了質疑，Li等［43］的研究提示與正常組織相比，Hsa_circ_002059在胃癌組織中顯著下降，并且血漿中的Hsa_circ_002059表達在腫瘤切除后與術前差異有統計學意義，提出Hsa_ circ_002059在循環血中存在并作為分子標志物的可能性。目前對于circRNA的研究尚處于起步的階段，對于其來源、作用機制等需要進一步的探討。

4 總結

迄今為止，雖然腫瘤相關RNA釋放入人體外周血形成循環RNA以及它們在血液中的存在形式尚未完全清楚，但其在臨床上的應用價值正在逐步被人們所了解。隨著越來越多的研究者投身到ncRNA 與甲狀腺腫瘤研究領域中，發現各類ncRNA作用機制的多樣和復雜，因此目前對ncRNA功能的認識仍然只是冰山一角。循環ncRNA作為研究熱點處于起步階段，其能否成為甲狀腺腫瘤早期診斷的分子標志，能否預測腫瘤預后，與腫瘤個體化治療是否有關，以及能否作為腫瘤分子靶向治療的有效靶標，諸多問題仍有待通過研究獲得答案。相信隨著生命科學技術的不斷進步，特別是新一代測序技術與基因芯片技術的廣泛應用，將有助于我們更加全面真實地揭示各類RNA的功能和作用機制，也為甲狀腺腫瘤的無創診斷、靶向治療提供新的思路及依據。

［參考文獻］

［1］SIEGEL R, NAISHADHAM D, JEMAL A.Cancer statistics, 2013［J］.CA Cancer J Clin, 2013, 63（1）:11-30.

［2］HAUGEN B R, ALEXANDER E K, BIBLE K C, et al.2015 A merican Thyroid Association management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer［J］.Thyroid, 2015.［Epub ahead of print］.

［3］SAMPSON E, BRIERLEY J D, LE L W, et al.Clinical management and outcome of papillary and follicular（differentiated）thyroid cancer presenting with distant metastasis at diagnosis［J］.Cancer, 2007, 110（7）:1451-1456.

［4］GUPTA M, GUPTA S, GUPTA V B.Correlation of fine needle aspiration cytology with histopathology in the diagnosis of solitary thyroid nodule［J］.J Thyroid Res, 2010:379051.

［5］CIBAS E S, ALI S Z.The Bethesda system for reporting thyroid cytopathology［J］.Thyroid, 2009, 19（11）:1159-1165.

［6］YIP L.Molecular markers for thyroid cancer diagnosis, prognosis, and targeted therapy［J］.J Surg Oncol, 2015, 111（1）:43-50.

［7］LI F, CHEN G, SHENG C, et al.BRAFV600Emutation in papillary thyroid microcarcinoma:a meta-analysis［J］.Endocr Relat Cancer, 2015, 22（2）:159-168.

［8］KIM T H, PARK Y J, LIM J A, et al.The association of the BRAF（V600E）mutation with prognostic factors and poor clinical outcome in papillary thyroid cancer:a meta-analysis［J］.Cancer, 2012, 118（7）:1764-1773.

［9］BAZANOVA N V, SE?TS I F.Can the presence of an RNA-lipoprotein complex in human blood serum give evidence of a cancerous disease？［J］.Eksp Onkol, 1989, 11（2）:37-39.

［10］C H O M C Z Y N S K I P, S A C C H I N.S i n g l estep method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction［J］.Anal Biochem, 1987, 162（1）:156-159.

［11］KOPRESKI M S, BENKO F A, KWAK L W, et al.Detection of tumor messenger RNA in the serum of patients with malignant melanoma［J］.Clin Cancer Res, 1999, 5（8）:1961-1965.

［12］CHEN X Q, BONNEFOI H, PELTE M F, et al.Telomerase RNA as a detection marker in the serum of breast cancer patients［J］.Clin Cancer Res, 2000, 6（10）:3823-3826.

［13］FLEISCHHACKER M, BEINERT T, ERMITSCH M, et al.Detection of amplifiable messenger RNA in the serum of patients with lung cancer［J］.Ann N Y Acad Sci, 2001, 945:179-188.

［14］POON L L, LEUNG T N, LAU T K, et al.Presence of fetal RNA in maternal plasma［J］.Clin Chem, 2000, 46（11）:1832-1834.

［15］EL-HEFNAWY T, RAJA S, KELLY L, et al.Characterization of amplifiable, circulating RNA in plasma and its potential as a tool for cancer diagnostics［J］.Clin Chem, 2004, 50（3）:564-573.

［16］GARCíA J M, GARCíA V, PE?A C, et al.Extracellular plasma RNA from colon cancer patients is confined in a vesicle-like structure and is mRNA-enriched［J］.RNA, 2008, 14（7）:1424-1432.

［17］BOLUKBASI M F, MIZRAK A, OZDENER G B, et al.miR-1289 and “Zipcode”-like sequence enrich mRNAs in microvesicles［J］.Mol Ther Nucleic Acids, 2012, 1:e10.

［18］WAGNER K, ARCIAGA R, SIPERSTEIN A, et al.Thyrotropin receptor/thyroglobulin messenger ribonucleic acid in peripheral blood and fine-needle aspiration cytology:diagnostic synergy for detecting thyroid cancer［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2005, 90（4）:1921-1924.

［19］CHIA S Y, MILAS M, REDDY S K, et al.Thyroid-stimulating hormone receptor messenger ribonucleic acid measurement in blood as a marker for circulating thyroid cancer cells and its role in the preoperative diagnosis of thyroid cancer［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2007, 92（2）:468-475.

［20］HAUGEN B R, PACINI F, REINERS C, et al.A comparison of recombinant human thyrotropin and thyroid hormone withdrawal for the detection of thyroid remnant or cancer［J］.J Clin Endocrinol Metab, 1999, 84（11）:3877-3885.

［21］SPENCER C A, BERGOGLIO L M, KAZAROSYAN M, et al.Clinical impact of thyroglobulin（Tg）and Tg autoantibody method differences on the management of patients with differentiated thyroid carcinomas［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2005, 90（10）:5566-5575.

［22］CHINNAPPA P, TAGUBA L, ARCIAGA R, et al.Detection of thyrotropin-receptor messenger ribonucleic acid（mRNA）and thyroglobulin mRNA transcripts in peripheral blood of patients with thyroid disease:sensitive and specific markers for thyroid cancer［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2004, 89（8）:3705-3709.

［23］ELISEI R, VIVALDI A, AGATE L, et al.Low specificity of blood thyroglobulin messenger ribonucleic acid assay prevents its use in the follow-up of differentiated thyroid cancer patients［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2004, 89（1）:33-39.

［24］GUPTA M, TAGUBA L, ARCIAGA R, et al.Detection of circulating thyroid cells by reverse transcription PCR for thyroid-stimulating hormone receptor and thyroglobulin:the importance of primer selection［J］.Clin Chem, 2002, 48（10）:1862-1865.

［25］BARZON L, BOSCARO M, PACENTI M, et al.Evaluation of circulating thyroid specific transcripts as markers of thyroid cancer relapse［J］.Int J Cancer, 2004, 110（6）:914-920.

［26］CHIA S Y, MILAS M, REDDY S K, et al.Thyroid-stimulating hormone receptor messenger ribonucleic acid measurement in blood as a marker for circulating thyroid cancer cells and its role in the preoperative diagnosis of thyroid cancer［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2007, 92（2）:468-475.

［27］MILAS M, MAZZAGLIA P, CHIA S Y, et al.The utility of peripheral thyrotropin mRNA in the diagnosis of follicular neoplasms and surveillance of thyroid cancers［J］.Surgery, 2007, 141（2）:137-146.

［28］ESTELLER M.Non-coding RNAs in human disease［J］.Nat Rev Genet England, 2011, 12（12）:861-874.

［29］BARTEL D P.MicroRNAs:genomics, biogenesis, mechanism, and function［J］.Cell, 2004, 116（2）:281-297.

［30］HE H, JAZDZEWSKI K, LI W, et al.The role of microRNA genes in papillary thyroid carcinoma［J］.Proc Natl Acad Sci U S A, 2005, 102（52）:19075-19080.

［31］NIKIFOROVA M N, TSENG G C, STEWARD D, et al.MicroRNA expression profiling of thyroid tumors:biological significance and diagnostic utility［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2008, 93（5）:1600-1608.

［32］WEBER F, TERESI R E, BROELSCH C E, et al.A limited set of human microRNA is deregulated in follicular thyroid carcinoma［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2006, 91（9）:3584-3591.

［33］YU S, LIU Y, WANG J, et al.Circulating microRNA profiles as potential biomarkers for diagnosis of papillary thyroid carcinoma［J］.J Clin Endocrinol Metab, 2012, 97（6）:2084-2092.

［34］LEE J C, ZHAO J T, CLIFTON-BLIGH R J, et al.MicroRNA-222 and microRNA-146b are tissue and circulating biomarkers of recurrent papillary thyroid cancer［J］.Cancer, 2013, 119（24）:4358-4365.

［35］CALEY D P, PINK R C, TRUJILLANO D, et al.Long noncoding RNAs, chromatin, and development［J］.Sci World J, 2010, 10:90-102.

［36］MERCER T R, DINGER M E, MATTICK J S.Long noncoding RNAs:insights into functions［J］.Nat Rev Genet, 2009, 10（3）:155-159.

［37］JENDRZEJEWSKI J, HE H, RADOMSKA H S, et al.The polymorphism rs944289 predisposes to papillary thyroid carcinoma through a large intergenic noncoding RNA gene of tumor suppressor type［J］.Proc Natl Acad Sci U S A, 2012, 109（22）:8646-8651.

［38］YOON H, HE H, NAGY R, et al.Identification of a novel noncoding RNA gene, NAMA, that is downregulated in papillary thyroid carcinoma with BRAF mutation and associated with growth arrest［J］.Int J Cancer, 2007, 121（4）:767-775.

［39］ZHOU X, YIN C, DANG Y, et al.Identification of the long non-coding RNA H19 in plasma as a novel biomarker for diagnosis of gastric cancer［J］.Sci Rep, 2015, 5:11516.

［40］LI J, WANG Y, YU J, et al.A high level of circulating HOTAIR is associated with progression and poor prognosis of cervical cancer［J］.Tumour Biol, 2015, 36（3）:1661-1665.

［41］MEMCZAK S, JENS M, ELEFSINIOTI A, et al.Circular RNAs are a larger class of animal RNAs with regulatory potency［J］.Nature, 2013, 495（7441）:333-338.

［42］LI J, YANG J, ZHOU P, et al.Circular RNAs in cancer:novel insights into origins, properties, functions and implications［J］.Am J Cancer Res, 2015, 5（2）:472-480.

［43］LI P, CHEN S, CHEN H, et al.Using circular RNA as a novel type of biomarker in the screening of gastric cancer［J］.Clin Chim Acta, 2015, 444:132-136.

收稿日期：（2015-12-21）

通信作者：肖海鵬 E-mail:xiaohp@mail.sysu.edu.cn

中圖分類號：R736.1

文獻標志碼：A

文章編號：1007-3639（2016）01-0025-06

DOI:10.3969/j.issn.1007-3969.2016.01.004