茵陳五苓散對高脂血癥大鼠的調脂及抗凝血作用

李若夢　吳　凝　趙琳琳　王東生　(中南大學湘雅醫院中西結合科，湖南　長沙　410008)

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茵陳五苓散對高脂血癥大鼠的調脂及抗凝血作用

李若夢吳凝趙琳琳王東生(中南大學湘雅醫院中西結合科，湖南長沙410008)

〔摘要〕目的研究茵陳五苓散( YCL)對高脂血癥大鼠的調血脂以及抗凝血作用。方法60只SD大鼠隨機分為正常對照組、模型組、YCL低、中、高劑量組及血脂康組，正常對照組給予基礎飼料喂養，其余各組用高脂飼料喂養復制高脂血癥模型大鼠，造模成功后給予相應藥物治療，觀察各組大鼠血脂、肝腎功能、凝血功能、血液流變學指標的變化情況，ELISA檢測組織因子( TF)和組織因子途徑抑制物( TFPI)含量。結果經YCL治療，高脂血癥大鼠總膽固醇( TC)、甘油三酯( TG)及低密度脂蛋白膽固醇( LDL－C)均出現不同程度下降，高密度脂蛋白膽固醇( HDL－C)有不同程度升高，全血黏度(高中低切)、血漿黏度、血細胞比容及血小板黏附率降低; YCL各組凝血酶原時間( PT)、活化部分凝血活酶時間( APTT)均有所延長，纖維蛋白原( FIB)下降，TF含量減少、TFPI升高，與正常對照組相比，YCL各組的丙氨酸氨基轉移酶( ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶( AST)、尿素氮( BUN)和肌酐( Cr)無明顯變化。結論YCL對血脂有較好的調節效果，同時有一定的抗凝血作用，對肝腎功能無明顯影響。

〔關鍵詞〕茵陳五苓散;高脂血癥;抗凝血作用;血液流變學;組織因子

隨著飲食結構和生活習慣的改變，高脂血癥現已成為威脅人類健康的重要危險因素之一，它與冠心病、糖尿病等疾病發生發展密切相關。茵陳五苓散( YCL)是張仲景所著《金匱要略》中的經方，在清熱利濕退黃治療肝炎、高膽紅素血癥等方面成效顯著〔1〕。隨著人們對該方研究的不斷深入，其調脂及抗凝血作用頗受關注〔2〕。本實驗擬觀察YCL對高脂血癥大鼠血脂水平的調節作用，并觀察其對凝血功能、血液流變學以及組織因子和組織因子途徑抑制物變化的影響。

1材料與方法

1. 1材料

1. 1. 1動物雄性SD大鼠由中南大學湘雅醫學院實驗動物學部提供，共60只，體重( 200±20) g，動物許可證號: SYXK(湘) 2011－0001。

1. 1. 2主要試劑YCL由中南大學湘雅醫院中藥房提供，藥物組成:茵陳30 g，澤瀉15 g，茯苓9 g，豬苓9 g，白術9 g，桂枝4 g。將藥材洗凈后水煎2次，藥液過濾濃縮成每毫升含1 g生藥，4℃冰箱保存。血脂康片(北京北大維信生物科技有限公司，國藥準字Z10950029) ;膽固醇(北京鼎國生物技術有限責任公司，批號814101100) ;甲硫氧嘧啶(江蘇常州國營武進制藥廠，批號20020111) ;膽酸鈉(北京奧博星生物技術有限公司，批號20080417) ;血脂試劑盒(溫州東甌生物工程有限公司) ; ELISA試劑盒購自美國R＆B公司。

1. 1. 3主要儀器半自動生化分析儀( SS00PP型，法國SECOMAM公司)，全自動血液流變儀( LBY－N6K型，北京普利生公司)，血凝分析儀( CA－7000型，日本Sysmex株式會社)。

1. 2方法

1. 2. 1動物模型制備采用高脂飼養喂飼法進行高脂血癥大鼠模型的制備，具體配方: 4%膽固醇、10%豬油、0．2%甲基硫氧嘧啶、0．1%膽酸鈉、85．7%基礎飼料(其中面粉20%、米粉2%、玉米20%、麩皮25%、豆料20%、骨粉2%、魚粉2%)。混勻后壓制成高脂飼料，飼喂大鼠8 w后，比較模型組大鼠(喂食高脂飼料)與空白組(喂食普通飼料)的總膽固醇( TC)、甘油三酯( TG)、低密度脂蛋白膽固醇( LDL－C)變化，三者出現明顯升高提示造模成功。

1. 2. 2動物分組及給藥采用隨機分組法將雄性SD大鼠分為6組，每組10只。正常對照組給予普通飼料喂養，其余5組大鼠給予高脂飼料喂養制備高脂血癥大鼠模型，造模成功后，各組給予相應藥物或生理鹽水灌胃治療4 w，按成人用藥量和人與大鼠的體表面積比值獲得YCL中劑量組大鼠灌胃量，低劑量組用量為中劑量組的一半，高劑量組用量為中劑量組的2 倍:低劑量組灌胃YCL濃縮液4 g·kg－1·d－1，中劑量組灌胃YCL濃縮液8 g·kg－1·d－1，高劑量組灌胃YCL濃縮液16 g· kg－1·d－1;陽性藥物對照(血脂康)組:灌胃血脂康(血脂康片溶于生理鹽水中配制成100 mg/ml的終濃度灌胃大鼠) 150 mg·kg－1·d－1;正常對照組:灌胃生理鹽水2 ml· 100 g－1·d－1;模型組:灌胃生理鹽水2 ml·100 g－1·d－1。上述6組的灌胃液體總量一致。

1. 2. 3觀察指標各組大鼠在末次給藥后禁食12 h，2%戊巴比妥45 mg/kg腹腔麻醉，分離頸靜脈，插管取血，分離血清檢測血脂、肝腎功能各項指標;收集抗凝血漿檢測血液流變學及凝血功能等指標，采用ELISA法測定各組大鼠組織因子( TF)及組織因子途徑抑制物( TFPI)表達情況，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1. 3統計學方法采用SPSS19．0軟件，計量資料采用±s表示，組間差異采用方差分析。

2結果

2. 1 YCL對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響與正常對照組比較，模型組大鼠的血脂水平明顯增高( P＜0．01)，說明高脂血癥模型大鼠造模成功;與模型組相比，YCL低、中、高各劑量組的TC、TG及LDL－C均出現不同程度下降，HDL－C不同程度升高( P＜0．05或P＜0．01) ; YCL中、高劑量組的降脂效果優于血脂康組( P＜0．05)，見表1。

2. 2 YCL對高脂血癥大鼠肝腎功能的影響與正常對照組比較，YCL各劑量組的丙氨酸氨基轉移酶( ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶( AST)、尿素( BUN)、肌酐( Cr)差異無統計學差異( P＞0．05)，見表2。

2. 3 YCL對高脂血癥大鼠血液流變學的影響與正常對照組相比，模型組大鼠的血液流變學指標均嚴重異常( P＜0．01) ;與模型組相比，YCL低、中、高劑量組的全血黏度、血漿黏度、血細胞及血小板黏附率等各項指標均有所改善( P＜0．05或P＜0．01)，YCL中、高劑量組對血液流變學的改善效果優于血脂康組( P＜0．05)，見表3。

表1各組大鼠血脂變化比較( mmol/L±s，n=10)

表1各組大鼠血脂變化比較( mmol/L±s，n=10)

與模型組比較: 1) P＜0．05，2) P＜0．01;與血脂康組比較: 3) P＜0．05;下表同

組別　TC　TG　HDL－C　 LDL－C正常對照組　1．68±0．382)0．59±0．102)1．52±0．152)1．00±0．132)模型組　2．93±0．20　 1．31±0．18　 0．59±0．13　 1．89±0．16 YCL低劑量組2．35±0．221)1．64±0．121)0．90±0．161)1．46±0．141)YCL中劑量組2．15±0．182) 3)0．82±0．112) 3)1．36±0．112) 3)1．13±0．122) 3)YCL高劑量組2．08±0．122) 3)0．79±0．102) 3)1．30±0．152) 3)1．20±0．192) 3)血脂康組　2．39±0．212)1．01±0．152)1．18±0．142)1．39±0．212)

表2各組大鼠肝腎功能比較(±s，n=10)

表2各組大鼠肝腎功能比較(±s，n=10)

組別　ALT( U/L)　 AST( U/L) BUN( mmol/L) Cr(μmol/L)正常對照組　62．3±6．1　 112．1±17．2　 12．5±2．9　 32．5±2．3模型組　67．8±7．8　 117．6±28．5　 15．4±5．9　 34．1±3．9 YCL低劑量組　65．2±5．5　 109．2±16．3　 13．9±5．3　 32．4±5．9 YCL中劑量組　64．6±4．8　 108．5±21．8　 13．1±4．8　 33．9±3．8 YCL高劑量組　66．4±8．5　 110．1±18．2　 12．0±2．1　 30．1±5．6血脂康組　63．9±5．2　 105．7±20．5　 11．6±2．8　 31．8±7．2

表3各組血液流變學變化比較(±s，n=10)

表3各組血液流變學變化比較(±s，n=10)

組別　　全血低切( mPa·s)全血中切( mPa·s)全血高切( mPa·s)血漿黏度( mPa·s)　血細胞比容( %)　血小板黏附率( %)正常對照組　20．8±5．822)　13．5±2．392)　5．31±0．882)　1．94±0．162)　0．50±0．012)　44．5±1．782)模型組　33．9±8．47　21．6±2．89　6．65±0．74　2．29±0．21　0．56±0．02　57．9±2．11 YCL低劑量組　28．6±5．321)　18．4±2．441)　6．31±0．541)　2．21±0．201)　0．52±0．051)　50．9±3．141)YCL中劑量組　22．1±5．562) 3)　1．54±3．262) 3)　5．50±0．642) 3)　1．93±0．162) 3)　0．49±0．012) 3)　45．8±2．452) 3)YCL高劑量組　23．2±5．782) 3)　1．62±2．562) 3)　5．48±0．532) 3)　1．94±0．432) 3)　0．50±0．022) 3)　45．6±2．032) 3)血脂康組　27．8±6．122)　18．8±3．122)　6．12±0．582)　2．15±0．172)　0．51±0．022)　48．1±1．922)

2. 4 YCL對高脂血癥大鼠凝血功能的影響與正常對照組相比，模型組大鼠的凝血功能異常，PT、APTT均下降，FIB上升( P＜0．01) ;與模型組相比，YCL低、中、高劑量組對凝血功能的各項指標均有所改善( P＜0．05或P＜0．01)，其中YCL中、高劑量組對凝血功能的改善效果優于血脂康組( P＜0．05)，見表4。

表4各組凝血功能比較(±s，n=10)

表4各組凝血功能比較(±s，n=10)

組別　PT( s)　APTT( s)　FIB( g/L)正常對照組　18．44±1．122)　37．38±1．232)　2．75±0．282)模型組　10．44±2．12　 21．76±1．49　 4．02±0．16 YCL低劑量組　15．77±1．301)　30．83±2．031)　3．65±0．321)YCL中劑量組　17．78±2．012) 3)33．12±1．782) 3)　3．21±0．262) 3)YCL高劑量組　18．12±1．872) 3)34．52±2．132) 3)　3．03±0．422) 3)血脂康組　14．21±2．391)　31．89±2．111)　3．62±0．391)

2. 5 YCL對高脂血癥大鼠TF、TFPI表達的影響與正常對照組相比，模型組的TF表達上升、TFPI表達下降( P＜0．01) ;與模型組相比，YCL中、高劑量組的TF表達有所下降、TFPI表達上升( P＜0．01)，血脂康組并未表現出明顯的降低TF或升高TFPI的效果( P＞0．05)，見表5。

表5各組大鼠TF、TFPI表達比較(±s，n=10)

表5各組大鼠TF、TFPI表達比較(±s，n=10)

組別　TF( pg/ml)　TFPI( ng/ml)正常對照組　75．12±1．432)　25．18±2．042)模型組　90．32±2．98　20．12±3．12 YCL低劑量組　87．76±3．47　23．34±1．761)YCL中劑量組　86．16±3．652)　24．65±1．942)YCL高劑量組　85．45±4．532)　24．12±2．082)血脂康組　88．33±3．852)　21．78±3．01

3討論

高脂血癥引發的血液狀態異常是并發心腦血管疾病的重要危險因素，由于血液中脂類物質增多能使血管內皮細胞受損，導致血流狀態發生改變〔3〕，紅細胞、血小板等血液成分集聚性增高，血液黏滯度增高，血流速度減慢〔4〕。由于血管內皮細胞受損，血脂更容易附著在血管壁上，單核細胞吞噬脂類物質引起炎癥反應形成脂質核心，導致血管內壁硬化、狹窄，血流量減少、血流速度減慢造成局部微循環障礙，引起凝血因子的活性增強，促使血小板聚集，形成微血栓，導致心腦血管疾病的發生〔5〕。因此，有效的控制血脂水平是改善心腦血管病發生發展的重要手段〔6〕。在血液凝固的過程，血液中的多種凝血因子之間活性失衡。TF是外源性凝血系統的啟動因子〔7〕，同時它還可以作為輔助因子參與內源性凝血，其活性異常或表達過度可導致凝血亢進。TFPI是TF的抑制物〔8〕，對維持體內正常的凝血狀態起著重要作用。在高脂血癥患者體內，二者之間的平衡受到破壞，呈現出血液高凝狀態〔9〕。

YCL通過清熱利濕來調整體內脂質代謝〔10〕。中醫認為高脂血癥的形成與痰瘀痹阻、臟腑功能不足有關，嗜食肥甘厚膩、脾胃功能失調、三焦氣化失司，從而出現津液代謝異常。水濕代謝出現異常，則易在體內郁而化熱，煉津成痰〔11〕，故而可采用清熱利濕之法治療高脂血癥。

在本研究中，高脂血癥大鼠模型經過YCL各濃度的干預，血脂代謝紊亂現象得到改善，說明調脂作用頗佳，同時能延長高脂血癥大鼠PT、APTT及降低FIB含量，改善血液高凝狀態。高脂血癥大鼠的血液流變學指標異常，表現為血液、血漿黏度增高，YCL各劑量組干預后，血液流變學各項指標均有改善，明顯降低血液高黏滯性，并且能有效地降低TF、升高TFPI的表達，具有較好的抗凝血作用，并且臨床用藥安全性較好。

4參考文獻

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11王東生，周衡，奚彩昆，等．茵陳五苓散治療高脂血癥的臨床觀察〔J〕．中國醫藥學報，2001; 16( 5) : 36－9．

〔2015－07－16修回〕

(編輯李相軍)

Lipid modulation and anticoagulative function of yinchenwulin powder on hyperlipidemia rats

LI Ruo-Meng，WU Ning，ZHAO Lin-Lin，et al.
Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Xiangya Hospital，Central South University，Changsha 410008，Hunan，China

【Abstract】Objective To investigate the effects of yinchenwulin powder on blood lipids and anticoagulative function of hyperlipidemia rat．Methods Sixty SD rats were randomly divided into normal control，model，three different dosages of yinchenwulin powder( high，middle，low) and xuezhikang groups．The normal control was fed with routine forage，and the others were fed with high fat forage for establishment the hyperlipidemia rats model．The blood lipid spectrum，hepatic and renal function，coagulation function，blood rheology and the contents of tissue factor( TF) and TFPI were measured．Results Compared with those of model group，the levels of TC，TG and LDL in yinchenwulin powder groups( high，middle，low) were decreased，the level of HDL was increased; and the whole blood viscosity，plasma viscosity，hematocrit，and platelet adhesion ratio were decreased; PT and APTT were prolonged; TF was decreased while TFPI was increased．There were no obvious differences between normal group and three different dosages of yinchenwulin powder groups in the hepatic and renal functions．Conclusions Yinchenwulin powder could regulate the blood lipid effectively，and it also has anticoagulative effect，and it has no harm to the hepatic and renal function．

【Key words】Yinchenwulin powder; Hyperlipidemia; Anticoagulative effect; Blood rheology; Tissue factor

通訊作者:王東生( 1964－)，男，博士生導師，教授，主要從事中西醫結合心腦血管病防治研究。

基金項目:國家自然科學基金( 81173198)

〔中圖分類號〕R28

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202( 2016) 02-0259-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 002

第一作者:李若夢( 1983－)，女，博士在讀，主治醫師，主要從事中西結合心腦血管疾病治療研究。