大柴胡顆粒治療高脂飼料致豚鼠膽囊炎的機(jī)制

盧金福許惠琴張志芬王兆龍李　娟　喻　斌呂高虹(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇　南京　003)

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大柴胡顆粒治療高脂飼料致豚鼠膽囊炎的機(jī)制

盧金福1許惠琴1張志芬2王兆龍2李娟喻斌1呂高虹1
(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京210023)

〔摘要〕目的探討大柴胡顆粒治療慢性膽囊炎的機(jī)制。方法將豚鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型組、低、高劑量大柴胡顆粒組( 4、8 g/kg)組、消炎利膽片組( 1．2 g/kg)。采用飲飼法復(fù)制膽囊炎豚鼠模型，觀察大柴胡顆粒對膽囊炎豚鼠血清內(nèi)皮素( ET)、一氧化氮( NO)、腫瘤壞死因子( TNF)－α含量的影響。利用免疫組化的方法，觀察膽囊組織腫瘤壞死因子( TNF)－α表達(dá)情況。結(jié)果大柴胡顆粒大劑量組可顯著提高膽囊炎豚鼠血清ET含量( P＜0．01)，并可顯著降低膽囊組織TNF－α表達(dá)( P＜0．05)。但大柴胡顆粒組對血清NO、TNF－α含量均未見明顯影響。結(jié)論大柴胡顆粒對膽囊炎豚鼠的保護(hù)作用可能與提高血清ET水平及降低膽囊組織TNF－α表達(dá)有關(guān)，其他的相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

〔關(guān)鍵詞〕大柴胡顆粒;慢性膽囊炎;高脂飼料

1江蘇省中藥藥效與安全性評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

2南通精華制藥股份有限公司

第一作者:盧金福( 1964－)，男，副教授，博士，主要從事中藥藥理學(xué)研究。

大柴胡顆粒( DG)是在大柴胡湯基礎(chǔ)上研制而成的現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑。大柴胡湯出自張仲景的《傷寒論》，具有外解少陽、內(nèi)瀉熱結(jié)的功效，用于治療少陽陽明合病。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用于膽囊炎、膽石癥等疾病的治療。前期研究發(fā)現(xiàn)DG能顯著降低膽汁總膽紅素水平，能明顯減輕膽囊組織炎細(xì)胞的浸潤、組織水腫等病變，顯示其對實(shí)驗(yàn)性慢性膽囊炎有較好的治療作用，但其詳細(xì)的機(jī)制不甚清楚，本文從多種生化指標(biāo)的變化及免疫組化的角度試圖對大柴胡顆粒治療慢性膽囊炎的機(jī)制作進(jìn)一步的探索。

1材料與方法

1. 1藥品與試劑膽囊炎飼料〔1〕:在普通飼料中加入酪蛋白1%、蔗糖1．5%、豬油1%、纖維素1%、膽酸0．02%、膽固醇0．05%，由南京青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場提供。消炎利膽片( XYLD，惠州大亞制藥股份有限公司)。DG南通精華制藥有限公司。腫瘤壞死因子( TNF)－α、內(nèi)皮素( ET)試劑盒(放免法)，北京華英生物技術(shù)研究所。一氧化氮( NO)試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1. 2實(shí)驗(yàn)儀器DNA Expert GENios酶標(biāo)儀，奧地利。r－911全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀，中國科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司生產(chǎn)。TP 1020自動(dòng)脫水機(jī):德國LEICA公司產(chǎn)品; RM2235型石蠟切片機(jī):德國LEICA公司產(chǎn)品; CS－Ⅵ型攤片烤片機(jī):湖北孝感宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司。Tissue－Tek TEL組織包埋中心:日本SAKURA公司產(chǎn)品; LEICA DM 1000光學(xué)顯微鏡:德國Leica公司產(chǎn)品;隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠; MiniSee圖像采集系統(tǒng)。

1. 3動(dòng)物豚鼠，普通級(jí)，350～450 g，雌雄兼用，由南京青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場提供。

1. 4分組及給藥方法取健康豚鼠，隨機(jī)分組，即空白對照組、模型組、消炎利膽片組、低、高劑量大柴胡顆粒組。除空白對照組喂以普通飼料外，其余動(dòng)物均喂以膽囊炎專用高脂飼料，空白對照組和模型組灌胃等體積的生理鹽水，消炎利膽片組給予消炎利膽片1．2 g/kg，低、高劑量大柴胡顆粒組分別給予4 g/kg、8 g/kg，連續(xù)給藥30 d，末次給藥后禁食12 h后，豚鼠稱重，頸總動(dòng)脈取血，分離血清，測定血清中TNF－α、ET含量、NO。取膽囊用甲醛固定，石蠟包埋、切片，用免疫組化法檢測膽囊組織TNF－α受體的表達(dá)。

1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11．0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2. 1各組大鼠血清ET、NO、TNF－α水平檢測膽囊炎豚鼠血清NO、TNF－α含量未見明顯變化，但模型組ET有明顯降低，大劑量大柴胡顆粒組給藥后有顯著提高。見表1。

表1各組大鼠血清ET、NO、TNF-α水平檢測(±s，n=13)

表1各組大鼠血清ET、NO、TNF-α水平檢測(±s，n=13)

與空白對照組比較: 1) P＜0．01，與模型組比較: 2) P＜0．05

組別　ET( pg/ml)　 NO(μmol/L)　 TNF－α( ng/ml)空白對照組　84．74±11．58　 3．18±1．33　 1．22±0．39模型組　73．63±9．221)　4．67±7．63　 1．17±0．45消炎利膽片組　89．74±14．112)　3．96±3．56　 1．28±0．48低劑量大柴胡顆粒組　71．04±10．51　 3．94±4．86　 1．14±0．38高劑量大柴胡顆粒組　84．93±10．942)　22．49±34．40　 1．26±0．23

2. 2大柴胡顆粒對高脂飼料致膽囊炎豚鼠膽囊組織TNF－α表達(dá)的影響根據(jù)病理組織檢查半定量的結(jié)果進(jìn)行賦值: +給予1分，?給予2分，?給予3分，并對賦值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比( 1．00±0)，模型組膽囊組織TNF－α陽性表達(dá)率顯著提高( 2．29±0．49)，但高劑量大柴胡顆粒組給藥后膽囊組織TNF－α陽性表達(dá)率顯著下降( 1．71±0．49)。消炎利膽片組與小劑量大柴胡顆粒組膽組織，TNF－α〔( 2．43±0．53)、( 2．14±0．69)〕無明顯差異( P＞0．05)，見圖1。

圖1各組大鼠膽囊組織TNF-α表達(dá)( DAB，×200)

3討論

慢性膽囊炎從臨床癥狀分析，其應(yīng)歸屬于中醫(yī)學(xué)的“脅痛”、“膽脹”范疇。唐孫思邈在《備急千金要方》膽腑論篇中也提到“病苦腹中氣滿，飲食不下，咽干，頭痛，灑灑惡寒，脅痛，名曰膽實(shí)熱也”。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，本病多因結(jié)石刺激、細(xì)菌感染、病毒性肝炎、化學(xué)性損害、寄生蟲及急性膽囊炎遷延等引起，一般采用解痙止痛、控制感染、利膽、手術(shù)等治療〔2〕。目前，慢性膽囊炎的動(dòng)物模型主要有飲飼法〔1〕、石膽酸型〔3〕等。中醫(yī)認(rèn)為，膽囊炎的發(fā)病與飲食不節(jié)、精神抑郁等多種因素相互作用有關(guān)，其發(fā)病機(jī)制與濕熱內(nèi)盛、肝膽氣滯或氣郁化熱有關(guān)。因此本研究同樣從飲食不節(jié)的角度采用飲飼法造模，以此觀察藥物的作用。ET不僅存在于血管內(nèi)皮，也廣泛存在于各種組織和細(xì)胞中，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，對維持基礎(chǔ)血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)起重要作用。有關(guān)ET與膽囊炎的關(guān)系，McCartney等〔4〕用ELISA法對膽囊炎患者膽囊組織的ET含量進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)ET含量與膽囊炎炎癥程度呈反比關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，模型組ET有明顯的降低，給予大柴胡顆粒后有顯著提高，參照佘靖等〔5，6〕的研究結(jié)果，大柴胡顆粒對膽囊炎的治療作用較為肯定。然而，國內(nèi)的文獻(xiàn)報(bào)道與此不完全一致，有人認(rèn)為ET含量與膽囊炎無明顯關(guān)系，而NO隨膽囊炎發(fā)展而升高，但也有人認(rèn)為，脅肋疼痛較重者血漿ET水平明顯高于脅肋疼痛較輕者及正常人，NO水平別無明顯差異;脘腹痞滿較重者血漿NO水平明顯高于脘腹痞滿較輕者，ET無明顯差異。ET/NO是一對重要的由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，具有多種生理效應(yīng)，對兩者在膽囊炎發(fā)生發(fā)展中的作用有待進(jìn)一步深入研究。大柴胡顆粒的大劑量能顯著抑制膽囊炎組織TNF－α含量的提高，提示大柴胡顆粒對慢性膽囊炎的治療作用，然而TNF－α的血清水平未見升高，這可能與膽囊炎是局部炎癥或炎癥不夠嚴(yán)重有關(guān)。

4參考文獻(xiàn)

1王玉春，蘇富琴，苗術(shù)，等．金茵顆粒劑抗豚鼠膽囊炎的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕．醫(yī)學(xué)研究雜志，2008; 37( 9) : 90－1．

2楊維建，李娟，汪佳明，等．慢性膽囊炎中醫(yī)治療研究進(jìn)展〔J〕．西部中醫(yī)藥，2011; 24( 12) : 95－7．

3余成浩．清膽顆粒劑治療膽囊炎的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究〔D〕．成都:成都中醫(yī)藥大學(xué)，2003．

4 McCartney SA，Greaves RR，Warner TD，et al．Endothelin content，expression，and receptor type in normal and diseased human gallbladder〔J〕．Dig Dis Sci，2002; 47( 8) : 1786－92．

5佘靖，張炳厚，劉紅旭，等．肝膽濕熱型慢性膽囊炎一氧化氮、內(nèi)皮素水平及中藥治療影響〔J〕．中國中醫(yī)藥信息雜志，2001; 8( 5) : 42－4．

6王華．慢性膽囊炎肝膽濕熱證與客觀指標(biāo)關(guān)系的研究〔D〕．濟(jì)南:山東中醫(yī)藥大學(xué)，2009．

〔2014－03－17修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

通訊作者:許惠琴( 1961－)，女，教授，博士，主要從事中藥藥理學(xué)研究。

基金項(xiàng)目:江蘇省科技成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)課題( BA2010094) ;江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(中藥學(xué)，2011)

〔中圖分類號(hào)〕R575

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202( 2016) 02-0296-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 019