HPLC法測定延腎膠囊中川芎嗪的含量

楊麗鈴，馮　兵

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HPLC法測定延腎膠囊中川芎嗪的含量

楊麗鈴，馮兵

[摘要]目的建立延腎膠囊中川芎嗪的含量HPLC測定方法。方法檢測院內制劑延腎膠囊中川芎嗪的含量。采用Symmetry C-18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動相為甲醇-醋酸銨（PH＝8.6）-四氫呋喃緩沖液（20∶75∶5），檢測波長為285 nm，流速1.0 m1/min。結果川芎嗪在2.0～40.0 μg/m1范圍內呈良好線性關系，r＝0.9996（n＝6），平均回收率為100.70%，RSD＝1.62%。結論高效液相色譜法能夠準確測定延腎膠囊中川芎嗪的含量，該法操作簡單，重現性好，可用于該制劑的含量測定和質量控制。

[關鍵詞]延腎膠囊；川芎嗪；含量測定；高效液相色譜法

延腎膠囊是本院研制的院內制劑，其主要由川芎、三七、黃芪、淫羊藿、當歸、生地等8味中藥飲片組方而成，具有活血化瘀、益氣固腎、利水滲濕等功效，臨床主要用于治療慢性腎炎、慢性腎功能衰竭1～3期、急性腎功能衰竭恢復期[1-2]。為了控制延腎膠囊的質量標準，參考有關文獻[3-6]，本研究建立了高效液相色譜儀測定延腎膠囊中的川芎嗪含量方法，該法準確可靠，重現性好。

1　儀器與試劑

1.1儀器高效液相色譜儀（Agi1ent 1100，美國）；SQP電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；PHS-3C型PH計（上海智光儀器儀表有限公司）；KQ- 4200超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；HSG-C-4電熱恒溫水浴鍋（上海儀表供銷有限公司）1.2試劑鹽酸川芎嗪對照品（中國藥品生物制品鑒定所批號，130926-200305）；甲醇（美國TEDIA，色譜純），醋酸銨（成都市科龍化工試劑廠），乙醇（重慶川東化工有限公司化學試劑廠）；延腎膠囊（本院自制，批號141101）；超純水（自制）。

2　方法與結果

2.1溶液制備

2.1.1對照品溶液制備精密稱取鹽酸川芎嗪對照品10 mg置于10 m1容量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液（濃度1.0 mg/m1）。再精密量取該儲備液1 m1置于10 m1容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度作為對照品溶液（濃度0.1 mg/m1）。

2.1.2供試品溶液制備精密稱取膠囊內容物約0.5 g，置于100 m1具塞錐形瓶中，加入甲醇50 m1，放置過夜后超聲處理1 h，搖勻濾過，取殘渣按上述方法再提取2次，合并濾液。加入1 mo1/L的鹽酸甲醇溶液適量，調PH至2.0，置于60℃恒溫水浴箱蒸干，殘渣加10 m1甲醇使之溶解，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.1.3陰性對照溶液制備取不含川芎的延腎膠囊其他各味藥材，按處方工藝混勻制備不含川芎的延腎膠囊樣品，按“2.1.2”項中的方法，制備陰性對照溶液。

2.2色譜條件色譜柱：Symmetry C-18（150 mm× 4.6 mm，5 μm）色譜柱；流動相：甲醇-醋酸銨（PH＝8.6）-四氫呋喃緩沖液（20∶75∶5）；流速1.0 m1/min；檢測波長285 nm；柱溫：30℃，進樣量：10 μ1。在此色譜條件下，進行系統適應性試驗，結果顯示陰性對照品溶液在川芎嗪出峰處未檢測出峰（圖1）。

圖1　川芎嗪系統適應性HPLC色譜圖A：對照品；B：供試品；C：陰性對照

2.3線性關系考察精密量取對照品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0 m1，分別置于6個10 m1容量瓶中，加甲醇稀釋定容至刻度。取上述各溶液10 μ1注入高效液相色譜儀，照“2.2”項下方法測定，以峰面積（Y）對鹽酸川芎嗪對照品濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程為y＝2005x-148.9（r＝0.9996，圖2），結果表明鹽酸川芎嗪在2.0～40.0 μg/m1范圍內呈良好線性關系。

圖2　鹽酸川芎嗪標準曲線

2.4精密度試驗取鹽酸川芎嗪對照品溶液，按照“2.2”項下方法連續測定6次，記錄色譜圖。結果RSD為1.12%，說明該法精密度良好，符合儀器分析要求。

2.5穩定性試驗取供試品溶液，在室溫下分別放置0、2、4、6、8、12 h后進樣測定含量，結果RSD為1.65%，說明供試品溶液在12 h內穩定。

2.6重復性試驗取延腎膠囊樣品按“2.1.2”項處理，用“2.2”項色譜條件連續測定6次，記錄峰面積，計算含量。結果川芎嗪平均含量為3.012 mg/g，RSD 為1.54%，表明該法重復性好。

2.7回收率試驗取已知川芎嗪含量的延腎膠囊樣品（批號為141101）約0.3 g，精密稱量6份，用供試品制備方法制備溶液，分別精密加入川芎嗪對照品溶液0.2 m1，按“2.2”項色譜條件測定含量，計算回收率。結果見表1。

2.8含量測定精密稱取3批延腎膠囊內容物，按溶液配制方法分別制備成供試品溶液，用“2.2”項色譜條件進樣，記錄峰面積，根據線性回歸方程計算川芎嗪含量，結果顯示3批樣品的含量分別為1.346、1.258、1.303 mg。

3　討論

延腎膠囊中含有8種中藥材，為了避免其他物質干擾并測定川芎嗪的含量，因此實驗中制備陰性對照溶液。前期預實驗中，選取甲醇-醋酸銨（PH＝8.6）-四氫呋喃作為流動相，通過不斷調節其比例，最終使峰形變窄對稱，同時PH呈堿性能抑制生物堿電離，與其他成分順利洗脫。鹽酸川芎嗪在甲醇中易溶，加入鹽酸甲醇溶液能夠使游離的川芎嗪酸化，避免川芎嗪的損失。川芎嗪易升華，因此，在制備供試品溶液過程中，溫度不宜過高，恒溫水浴鍋溫度應控制在60℃左右。本實驗建立了高效液相色譜法測定延腎膠囊中川芎嗪含量的方法，具有專屬性強、靈敏度高、檢測結果迅速而準確等特點，為延腎膠囊的質量控制和保證患者用藥安全提供了可靠的參考依據。

【參考文獻】

[1]袁發煥，李一標，光麗霞.延腎膠囊延緩殘腎損傷的實驗研究[J].中國現代醫學雜志，2004，14（18）: 1-5.

[2]郭麗萍，袁發煥，張耀全.延腎膠囊對部分腎切除大鼠腎臟CB表達的影響[J].中國中西醫結合腎病雜志，2006，7（3）: 143-145.

[3]王芳，石悅，曹健.高效液相色譜法測定延腎膠囊中淫羊藿苷含量[J].中國藥業，2014，23（4）: 37-38.

[4]朱美曉，黃志芳，肖紅斌，等.HPLC法測定川產道地藥材川芎中川芎嗪的含量[J].藥物分析雜志，2011，31（1）: 103-106.

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表1　樣品回收率試驗結果

Determination of tetramethy1Pyrazine content in Yanshen caPsu1e by HPLC

Yang Li1ing，Feng Bing

DePartment of NePhro1ogy，Xinqiao HosPita1 of the Third Mi1itary Medica1 UniVersity，Chongqing，400037，China

[Abstract]ObjectiVe To estab1ish a method for the determination of tetramethy1Pyrazine content in Yanshen caPsu1e by HPLC. Methods The content of tetramethy1Pyrazine in the three batches of Yanshen caPsu1e made by Xinqiao HosPita1 was detected. The chromatograPhic co1umn was Symmetry C-18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；the mobi1e Phase was the mixture of methano1-ammonium acetate（PH＝8.6）-tetrahydrofuran（20:75:5）；the detection waVe1ength was set at 285 nm，and the f1ow rate was 1.0 m1/min. Resu1ts The tetramethy1Pyrazine Presented a good 1inear re1ation within the range of 2.0-40.0 μg/m1（r＝0.9996，n＝6）. The aVerage recoVery was 100.70%with RSD of 1.62%. Conc1usion The HPLC method can accurate1y detect the content of tetramethy1Pyrazine in Yanshen caPsu1e. The method is simP1e and has good reProducibi1ity，which can be used for the content detection and qua1ity contro1 of Yanshen caPsu1e.

[Key words]Yanshen caPsu1e；tetramethy1Pyrazine；content determination；HPLC

收稿日期：（2015-05-17）

文章編號1004-0188（2016）02-0148-03

doi:10.3969/j.issn.1004-0188.2016.02.012

中圖分類號R 285

文獻標識碼A

作者單位：400037重慶，第三軍醫大學新橋醫院腎內科通訊作者：馮兵，E-mai1:fxb12@yahoo.com.cn