艾納香化學(xué)成分在不同組織中的分布

黃 梅，于福來，龐玉新＊，陳 策，劉立偉，陳振夏，官玲亮

（1.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，海南 儋州571737；2.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南儋州571737；3.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東廣州510006）

艾納香化學(xué)成分在不同組織中的分布

黃 梅1，2，3，于福來1，2，龐玉新1，2＊，陳 策1，2，3，劉立偉1，2，3，陳振夏1，2，官玲亮1，2

（1.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，海南 儋州571737；2.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南儋州571737；3.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東廣州510006）

為探明營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期與生殖生長(zhǎng)期艾納香主要化學(xué)成分在不同組織中的分布規(guī)律，為艾納香適宜采收部位的確定提供理論依據(jù)，采用GC法測(cè)定l-龍腦含量，紫外可見分光光度法測(cè)定總黃酮含量，并分析不同組織部位化學(xué)成分含量的變化差異。結(jié)果表明：1）l-龍腦含量，在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，嫩葉中的含量最高，為6.25mg/g，與其他組織部位呈顯著性差異（P＜0.05），但功能葉、老葉和枯葉中的含量也較高，分別為5.11mg/g、4.80mg/g和4.33mg/g；生殖生長(zhǎng)期，嫩葉中l(wèi)-龍腦含量最高，為2.30mg/g，與其他6個(gè)組織部位呈顯著性差異（P＜0.05），其中側(cè)枝、花枝、花蕾和花朵中未檢測(cè)到l-龍腦。2）總黃酮含量，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，功能葉的含量最高，為97.56mg/g，與嫩葉、老葉無顯著性差異，但與嫩梢、嫩莖、枯葉則呈顯著性差異（P＜0.05）。生殖生長(zhǎng)期，功能葉中總黃酮含量最高，為111.39mg/g，與花蕾、嫩葉無顯著性差異，但三者與枯葉、側(cè)枝、花枝都呈顯著性差異（P＜0.05）。因此，以l-龍腦為指標(biāo)，用于提取艾片時(shí)，宜選擇營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期采收，并采收全部葉片（包含枯葉、老葉、功能葉和嫩葉）及嫩梢；以總黃酮為指標(biāo)，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期與生殖生長(zhǎng)期都較為合適，應(yīng)采集老葉、功能葉和嫩葉。

艾納香；l-龍腦；總黃酮；營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期；生殖生長(zhǎng)期；組織部位

艾納香〔Blumeabalsamifera（L.）DC.〕是菊科艾納香屬的多年生木質(zhì)草本植物或者亞灌木。別名冰片艾、大風(fēng)艾等，分布于貴州、海南、廣東、廣西和云南等地。在黎族、苗族和壯族中均有悠久的用藥歷史。主要藥效物質(zhì)為左旋龍腦（l-龍腦）和黃酮類成分，具有祛風(fēng)除濕、溫中活血和鎮(zhèn)痛等功效［1-4］。艾納香在海南的生長(zhǎng)發(fā)育情況為當(dāng)年1—12月為營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段，其中9-12月，艾納香生物產(chǎn)量較高，為傳統(tǒng)的采收期，12月下旬開始陸續(xù)萌發(fā)花芽，進(jìn)入生殖生長(zhǎng)階段，次年2月下旬開始開花，3月下旬果實(shí)開始成熟，整個(gè)生長(zhǎng)周期持續(xù)14～15個(gè)月。

不同組織部位的中藥材中化學(xué)成分含量差異明顯，杭亮等［5］研究發(fā)現(xiàn)，丹參的葉和根中總丹參酮和總黃酮等成分的含量較高，莖中較低。黃永林等［6］發(fā)現(xiàn)，艾納香葉的總黃酮含量大于小枝條和莖。由此可見，中藥材中的有效成分在不同的組織部位含量具有一定差異。但目前并無相關(guān)文獻(xiàn)系統(tǒng)研究艾納香不同生長(zhǎng)時(shí)期各組織部位的有效成分分布規(guī)律。因此探討傳統(tǒng)采收期9—12月l-龍腦在各組織部位的變化規(guī)律，對(duì)合理采收艾納香組織部位進(jìn)行艾片提取具有重要意義。12月下旬開始，海南產(chǎn)艾納香開始陸續(xù)萌發(fā)花芽，進(jìn)入生殖生長(zhǎng)期，艾納香的主要化學(xué)成分在組織部位中是如何變化的，是否適宜繼續(xù)采收進(jìn)行艾片提取也是值得探討的問題。基于此，筆者對(duì)艾納香營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期與生殖生長(zhǎng)期不同組織部位中l(wèi)-龍腦及總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，以期為艾納香不同部位的適時(shí)采收部位提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 艾納香營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期不同組織 從2014年9月開始直至2014年12月，每月20日左右，分別隨機(jī)選取種植于海南儋州的艾納香30株，分為3次重復(fù)。采集其嫩梢（頂端到10～20cm處未木質(zhì)化部分，帶葉芽的莖尖）、嫩莖（綠色，未完全木質(zhì)化的莖稈）、嫩葉（嫩梢上的葉片，即頂端到10～20cm處未木質(zhì)化莖上的葉片）、功能葉（頂端向下25cm以下未出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)的葉片）、老葉（出現(xiàn)1個(gè)斑點(diǎn)的葉片到黃色尖端部分變成黑褐色的葉片）和枯葉（全部為黑褐色的葉片）共6個(gè)組織部位。置陰涼處晾干后，真空包裝放至冰箱中低溫保存。

1.1.2 艾納香生殖生長(zhǎng)期不同組織 隨機(jī)選取健康成熟2年生艾納香植株，分別于2014年4月對(duì)每個(gè)植株的側(cè)枝、嫩葉、功能葉、枯葉、花枝、花蕾和花朵共計(jì)7個(gè)組織部位進(jìn)行取樣，以尼龍編織網(wǎng)袋收集，置于通風(fēng)干燥處陰干、保存。

以上材料經(jīng)中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所鑒定為艾納香。

1.2 儀器與試劑

安捷倫7890A氣相色譜儀、安捷倫G4513A16位自動(dòng)進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測(cè)器（FID），安捷倫科技有限公司；UNICO2012-PCS紫外分光光度計(jì)，尤尼柯上海儀器有限公司；Sartarius CPA225D電子分析天平，賽多利斯公司；KQ-500DB型超聲儀，昆山舒美超聲儀器有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品批號(hào)為100080-200707，純度為92.5%，中國(guó)藥品生物制品檢定所；左旋龍腦對(duì)照品，純度＞98%阿法埃莎化學(xué)有限公司；乙酸乙酯，水楊酸甲酯，純度＞99.5%，天津光復(fù)精細(xì)化工研究所；氫氧化鈉、硝酸鋁Al（NO3）3·9H2O、亞硝酸鈉NaNO2、乙醇等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3l-龍腦與總黃酮的含量測(cè)定

l-龍腦與總黃酮的含量測(cè)定參照文獻(xiàn)［7］的方法進(jìn)行。采用SPSS19.0對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 艾納香營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期化學(xué)成分在不同組織中的分布

由表中可知，1）l-龍腦平均含量。9—12月，嫩葉＞功能葉＞老葉＞枯葉＞嫩梢＞嫩莖。嫩葉中l(wèi)-龍腦的含量最高，為6.25mg/g，與其他組織部位的含量存在顯著性差異。9—10月，功能葉中l(wèi)-龍腦含量高于老葉，11—12月老葉中的l-龍腦含量高于功能葉，但二者9—12月的平均含量無顯著性差異。枯葉中的l-龍腦含量稍低，其含量與老葉無顯著性差異，但與功能葉呈顯著差異。嫩梢和嫩莖中的l-龍腦含量較少，分別為1.03mg/g和0.26mg/g，與各種葉中的含量有顯著性差異。因此，在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，l-龍腦含量以嫩葉最高，功能葉、老葉與枯葉較高。

2）總黃酮平均含量。9—12月，功能葉＞嫩葉＞老葉＞嫩梢＞嫩莖＞枯葉。功能葉中含量最高，為97.57mg/g，嫩葉、功能葉、老葉中的總黃酮含量分布規(guī)律一致，即9月與11月含量較高，而10月、12月含量較低，且三者間無顯著性差異，但與嫩梢、嫩莖和枯葉均存在顯著性差異。嫩梢中的總黃酮含量（39.15mg/g）高于嫩莖（21.77mg/g）和枯葉（4.33mg/g），且呈顯著性差異。因此，在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，總黃酮含量以功能葉、嫩葉和老葉較高。

2.2 艾納香生殖生長(zhǎng)期化學(xué)成分在不同組織中的分布

由圖示可知，1）各組織部位中l(wèi)-龍腦的分布規(guī)律為嫩葉＞功能葉＞枯葉＞側(cè)枝＝花枝＝花蕾＝花朵。側(cè)枝、花枝、花蕾和花朵中未檢測(cè)出l-龍腦，嫩葉中的l-龍腦含量最高，為2.30mg/g，與其他5個(gè)組織部位含量都呈顯著性差異，功能葉與枯葉中含量無顯著性差異。

2）各組織部位中總黃酮的含量分布規(guī)律為功能葉＞花蕾＞嫩葉＞花朵＞枯葉＞花枝＞側(cè)枝。功能葉中總黃酮含量最高，為111.39mg/g，功能葉、花蕾和嫩葉三者的含量無顯著性差異，但與其他組織部位含量呈顯著性差異，枯葉、花朵與花枝中含量無顯著性差異。

表 艾納香各組織部位營(yíng)養(yǎng)期化學(xué)成分含量Table Content ofl-borneol and total flavone in different tissues ofB.balsamiferaduring vegetative growth period

圖示 艾納香生殖生長(zhǎng)期各組織部位l-龍腦及總黃酮的分布Fig. Distribution ofl-borneol and total flavone in different tissues ofB.balsamiferaduring reproductive growth period

3 結(jié)論與討論

1）艾納香營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期與生殖生長(zhǎng)期各組織部位化學(xué)成分含量均呈現(xiàn)顯著性差異，應(yīng)區(qū)別采收。

l-龍腦含量，在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和生殖生長(zhǎng)期，嫩葉的含量最高，分別為6.25mg/g和2.30mg/g。功能葉、老葉和枯葉在2個(gè)生長(zhǎng)期含量也較高。因此，以l-龍腦含量為指標(biāo)，用于提取艾片時(shí)，綜合l-龍腦含量及人工因素，應(yīng)采收全部葉片（包含枯葉，老葉、功能葉和嫩葉）及嫩梢。

總黃酮含量，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和生殖生長(zhǎng)期，功能葉的含量最高，分別為97.57mg/g和111.39mg/g。其中嫩葉和老葉在2個(gè)生長(zhǎng)期時(shí)含量都較高，因此，以總黃酮為指標(biāo)，應(yīng)采集功能葉、嫩葉和老葉。

近年來，對(duì)艾納香不同部位的化學(xué)成分變異規(guī)律研究較少，僅見黃永林等［6］對(duì)艾納香的葉、小枝條、莖的總黃酮含量差異進(jìn)行探索發(fā)現(xiàn)，三者之間具有一定差異性，葉的含量大于小枝條和莖，與本研究結(jié)果相似。研究結(jié)果表明，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和生殖生長(zhǎng)期里艾納香各組織部位的化學(xué)成分分布存在明顯差異，這對(duì)確定艾納香適宜采收部位提供了一定的理論依據(jù)。

2）用于提取艾片時(shí)，宜營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期采收；用于黃酮類成分分析時(shí)，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和生殖生長(zhǎng)期都較為適宜。

試驗(yàn)結(jié)果表明，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的l-龍腦含量較生殖生長(zhǎng)期高，且根據(jù)其生長(zhǎng)規(guī)律，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量要大于生殖生長(zhǎng)期，故提取艾片時(shí)，宜選擇營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期。與主產(chǎn)區(qū)貴州的傳統(tǒng)采收習(xí)慣相符。對(duì)于總黃酮而言，由于營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期與生殖生長(zhǎng)期的含量都較高，花蕾中的含量為103.52mg/g，僅次于功能葉（111.39mg/g），且二者無顯著性差異（P＞0.05），因此在2個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期采集都較為合適，至于黃酮類物質(zhì)的藥效差異，還需進(jìn)一步研究。

［1］中國(guó)科學(xué)院植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志［M］.北京：科學(xué)出版社，1988.

［2］官玲亮，龐玉新，王 丹，等.中國(guó)民族特色藥材艾納香研究進(jìn)展［J］.植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2012，13（4）：695-698.

［3］江蘇新醫(yī)學(xué)院，中藥大辭典（上冊(cè)）［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1985.

［4］楊本雷.中國(guó)彝族藥學(xué)［M］.昆明：云南民族出版社，2004：156-157.

［5］杭 亮，王俊儒，楊東風(fēng)，等.紫花丹參和白花丹參不同部位有效成分的分布特征［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008，36（12）：217-222.

［6］黃永林，趙志國(guó)，文永新.不同部位艾納香中總黃酮的含量測(cè)定［J］.廣西植物，2006，26（4）：453-455.

［7］龐玉新，黃 梅，于福來，等.黔瓊產(chǎn)艾納香中主要化學(xué)成分含量差異分析［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，30（4）：448-452.

（責(zé)任編輯：孫小嵐）

Distribution ofl-borneol and Total Flavone in Different Tissues ofBlumeabalsamifera

HUANG Mei1，2，3，YU Fulai1，2，PANG Yuxin1，2＊，CHEN Ce1，2，3，LIU Liwei1，2，3，CHEN Zhenxia1，2，GUAN Lingliang1，2
（1.InstituteofTropicalcropsGermplasmResources，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/Southern ChinaKeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasmEnhancement，DepartmentofAgriculture，Danzhou，Hainan571737；2.HainanEngineeringResearchCenterforBlumeaBalsamifera，Danzhou，Hainan57173；3.School ofTraditionalChineseMedicine，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou，Guangdong510006，China）

The content ofl-borneol and total flavone in different tissues ofB.balsamiferaduring the vegetative and reproductive growth period was detected by GC and UV respectively and variation ofl-borneol and total flavone content in different tissues ofB.balsamiferaduring the vegetative and reproductive growth period was analyzed to discuss the distribution regulation of main chemical components in different tissues ofB.balsamiferaand to provide the theoretical basis for selecting suitable tissues.Results：1）Thel-borneol content in young leaf is the highest（6.25mg/g）during vegetative growth period and significantly higher than other tissues ofB.balsamifera.Thel-borneol content in functional leaf，old leaf and dead leaf is 5.11mg/g，4.80mg/g and 4.33mg/g during vegetative growth period respectively.Thel-borneol content in young leaf is the highest（2.30mg/g）during reproductive growth period and significantly higher than other six tissues ofB.balsamifera.l-borneol component is not detected in lateral branch，flowering branch，flower bud and flower during reproductive growth period.2）The total flavone content in functional leaf is the highest（97.56mg/g）during vegetative growth period and no significant difference with young leaf and old leaf but significant difference with young branch，young stem and dead leaf.The total flavone content in functional leaf is the highest（111.39mg/g）during reproductive growth period and no significant difference with young leaf and flower bud.The total flavone content in functional leaf，flower bud and young leaf is significantly higher than dead leaf，lateral branch and flowering branch.The young branch and all kinds of leaves（dead leaf，old leaf，functional leaf and young leaf）should be harvested during vegetative growth period whenl-borneol is used as the index.The old leaf，functional leaf and young leaf should be harvested during vegetative and reproductive growth period when total flavone is used as the index.

Blumeabalsamifera；l-borneol；total flavone；vegetative growth period；reproductive growth period；tissue

S567

A

2016-03-10；2016-08-31修回

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“艾納香葉片形態(tài)與左旋龍腦關(guān)聯(lián)及其遺傳連鎖機(jī)制”（81303171），“黎藥‘娜龍’的品種整理及用藥規(guī)律研究”（81374065）

黃 梅（1989-），女，研究實(shí)習(xí)員，碩士，從事南藥GAP規(guī)范化栽培研究。E-mail：huangmei122＠126.com

＊通訊作者：龐玉新（1975-），男，副研究員，博士，從事南藥GAP規(guī)范化栽培、南藥質(zhì)量控制和南藥資源開發(fā)與利用研究。E-mail：blumeachina＠126.com

1001-3601（2016）09-0374-0030-03