瑪咖多糖提取工藝的優化及其抗氧化活性

鄭朋朋，李 珊，戚麗蓉，敖新宇

（西南林業大學生命科學學院，云南昆明650224）

瑪咖多糖提取工藝的優化及其抗氧化活性

鄭朋朋，李 珊，戚麗蓉，敖新宇＊

（西南林業大學生命科學學院，云南昆明650224）

為了更好地開發和利用云南地區的功能食品瑪咖，選取瑪咖多糖作為研究對象，在單因素試驗基礎上設置響應面優化試驗對瑪咖多糖提取工藝進行優化以提高瑪咖多糖提取效率，并測定瑪咖多糖的抗氧化性強弱，評價瑪咖多糖的活性價值；采用Sephadex G－100凝膠層析純化瑪咖多糖，用去離子水進行洗脫（洗脫速度為1mL／min），通過多糖對羥自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除效率研究瑪咖多糖的抗氧化性作用。結果表明：在液料比59mL／g、浸提溫度82℃、提取時間157min的條件下，瑪咖多糖的提取率為9．60%。對純度為65．6%的瑪咖粗多糖進行純化，得到純度為90．7%的純化多糖。當粗多糖和純多糖濃度為6mg／mL時，對羥自由基和DPPH自由基的清除率達到最大，分別為63．9%、46．5%和72．8%、81．7%；粗多糖濃度為5mg／mL時，對ABTS自由基清除率達到最大，為61．4%；純多糖濃度為8mg／mL時，對ABTS自由基的清除率最大，為83．8%。

瑪咖多糖；響應面；Sephadex G－100凝膠層析；抗氧化性

瑪咖（Maca）為十字花（Cnlcifera）科獨行菜屬（Lepidium L）草本植物，原生長于秘魯海拔4 000～4 500m的安第斯山脈。在該地區，瑪咖作為藥食兼用的植物已有悠久的歷史。大量研究表明，瑪咖具有抗疲勞、抗氧化、改善性功能、減少前列腺增生、緩解更年期綜合癥、抑制癌細胞、增加骨密度等多種功效。瑪咖除含有豐富蛋白及微量元素等營養成分，還含有多種次生代謝物質，如瑪咖烯、生物堿、芥子油苷及其水解衍生物、甾醇、多酚等，這些次生代謝物質被認為與瑪咖的保健功效有著密切關系。因瑪咖獨特全面的功效，已受到世界保健食品行業的廣泛關注［1－3］。

多糖是由10個以上單糖通過糖苷鍵連接而成的聚糖，在自然界分布極廣，在植物、動物和微生物體內均有存在，是自然界含量最豐富的生物聚合物。由于多糖多種多樣的生物活性功能以及在功能性食品和臨床上的廣泛應用，使多糖生物資源的開發利用和研究日益活躍，成為食品科學、天然藥物、生物化學和生命科學研究的熱點。

由于云南省高寒山區獨特的區域優勢，在麗江市古城區、玉龍縣和曲靖市會澤縣等高寒冷涼山區開展了瑪咖人工馴化栽培與種植，截至2010年云南省瑪咖種植面積達175hm2，瑪咖產量780t，分別占全國瑪咖種植面積、產量的90%和93%，成為全國最大的瑪咖生產基地，對中國瑪咖生產起著舉足輕重的作用［4－7］。通過查閱數據庫，已有瑪咖多糖提取與生物活性的報道，其中瑪咖多糖提取工藝方法均為正交試驗，未有響應面優化瑪咖提取工藝的報道，響應面法是非常有效的優化提取方法，與正交試驗相比響應面優化試驗優化出的提取條件更準確，溶劑消耗更少，時間更加合理，提取穩定性好，已經廣泛應用于植物物質提取工藝的優化過程；抗氧化劑體外抗氧化活性的強弱是抗氧化劑的重要指標，并且體外抗氧化活性對體內活性有指導意義，對多糖的抗氧化性測定的方法多為清除羥自由基、清除氧負自由基和還原力等試驗，現在國際上比較公認的體外抗氧化性試驗為清除DPPH和ABTS自由基試驗［8－11］。因此，筆者針對瑪咖多糖的提取工藝條件進行響應面優化，采用凝膠層析進行多糖純化，并通過體外清除DPPH和ABTS自由和羥自由基試驗進一步研究瑪咖多糖的抗氧化性作用，旨在更好地開發和利用云南地區的功能食品瑪咖。

1材料與方法

1．1材料

瑪咖塊根：生產于云南省麗江市。

試劑：1，1－二苯基－2－三硝基苯肼（DPPH自由基，Sigma公司），2，2－聯氮－二（3－乙基－苯并噻唑－6－磺酸）二銨鹽（ABTS，Sigma公司）；過硫酸鉀、30%雙氧水、甲醇、乙醇、氯仿、正丁醇、濃硫酸、苯酚、葡萄糖、水楊酸、硫酸亞鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉（AR，國藥集團化學試劑有限公司）

儀器：電熱恒溫鼓風干燥箱（DHG－9240A型，上海一恒科學儀器有限公司），電子天平（BS224S，SARTORIUS公司），粉碎機（M20，KIKA－WERKE公司），80目篩子、真空旋轉蒸發儀（B490，BUCHI公司），冷凍干燥器（FD5－8，GOLD SIM公司），真空干燥箱（DZF－6030A，上海一恒科學儀器有限公司），紫外分光光度計（TU－1901，北京普析通用儀器有限責任公司），離心機（5430R，Eppendorf），水浴鍋（HWS－12，上海一恒科學儀器有限公司）。

1．2多糖的提取與測定

稱取1．0g樣品，置于50mL離心管中，按照液料比30mL／g、超聲時間10min、浸提溫度70℃、提取時間120min的條件水浴浸提；浸提完成后6 000r／min離心10min，將上清液轉移到250mL燒杯中，加一定量無水乙醇使乙醇的體積分數為80%，靜置沉淀12h；6 000r／min離心15min、收集多糖沉淀，將沉淀復溶于水中，用Sevag法除蛋白后，冷凍干燥后溶解并定容到100mL待測。

葡萄糖標準曲線繪制：準確稱取105℃恒重的葡萄糖10．0mg，溶解后定容到100mL，配成100μg／mL葡萄糖標準溶液；精確量取100μg／mL的葡萄糖標準溶液0mL、0．2mL、0．4mL、0．6mL、0．8mL和1．0mL，補水至1．0mL，分別制成0μg／mL、20μg／mL、40μg／mL、60μg／mL、80μg／mL和100μg／mL待測標準溶液，加4%苯酚1．0mL、濃硫酸5．0mL，待冷卻后，在490nm波長條件下測定吸光值，以濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標做標準曲線。

多糖測定：將待測液稀釋10倍后，取1．0mL，加4%苯酚1．0mL、濃硫酸5．0mL，放入水槽中冷卻10min，待冷卻后，在490nm波長條件下測定吸光值，多糖含量按照（1）式計算。

式中：A為樣品待測液的吸光值；m為樣品的質量。

1．3不同因素的考察

液料比：分別在液料比20mL／g、30mL／g、40mL／g、50mL／g、60mL／g和70mL／g，浸提溫度70℃，提取時間120min，醇析濃度75%條件下提取，并測定多糖提取率（下同）。

浸提溫度：分別在浸提溫度40℃、50℃、60℃、70℃、80℃和90℃，液料比60mL／g，提取時間120min，醇析濃度75%條件下提取。

提取時間：分別在提取時間30min、60min、90min、120min、150min和180min，液料比60mL／g，提取溫度80℃，醇析濃度75%條件下提取。

1．4響應面試驗設計

根據單因素試驗結果，采用Desigin－Expert 8．0．6軟件中Box－Behnken中心組合設計原理，選取液料比、浸提溫度和提取時間3個影響因素的最佳提取條件，采用3因素3水平的響應面分析方法，分別用A、B、C表示3個因素，并以－1、0、＋1分別代表因素的水平，多糖提取率（%）為響應值。采用多元回歸設計方法，擬合二次多項模型的Box－Behnken試驗設計，響應面因素與水平設計見表1［12］。

表1 瑪咖多糖提取的響應面試驗因素及水平Table 1 Factors and levels of the response surface test

1．5多糖純化

將活化的Sephadex G－100裝入2．6×50cm色譜層析柱，用去離子水平衡后準備上樣。稱取100mg粗多糖用10mL去離子水溶解后，6 000r／min離心10min，取上清液上樣，上樣濃度為10mg／mL。用去離子水進行洗脫，洗脫速度為1mL／min，每管收集5mL，隔管檢測多糖含量（苯酚－硫酸法A490nm）。按多糖含量檢測值分別合并收集單一峰組分，冷凍干燥。

1．6多糖抗氧化性的測定

羥自由基清除測定［13］：將樣品（粗多糖和純化多糖）用蒸餾水溶解后配制成質量濃度10mg／mL的溶液，并稀釋成不同濃度梯度（1mg／mL，2mg／mL，3mg／mL，4mg／mL，5mg／mL，6mg／mL，7mg／mL，8mg／mL，9mg／mL，10mg／mL），在試管中依次加入9mmol／L FeSO4溶液1．0mL和9mmol／L水楊酸－乙醇溶液1．0mL和1．0mL樣品溶液（VC溶液作參比，濃度為0．01～10mg／mL），最后加入8．8mmol／L H2O2溶液1．0mL啟動反應。將試管迅速移入37℃水浴鍋中，靜置反應30min后于510nm處測定不同質量濃度樣品液的吸光值。用蒸餾水代替H2O2測得對應質量濃度樣品溶液的本底吸光值，用蒸餾水代替樣品溶液測得對照吸光值。按式（2）計算樣品對·OH的清除率。

式中：Ax為不同樣品溶液吸光值，Ax0為樣品本底吸光值，A0為對照溶液吸光值。

DPPH自由基清除測定［14］：將樣品用蒸餾水溶解后配制成質量濃度10mg／mL的溶液，并稀釋成不同濃度梯度（1mg／mL，2mg／mL，3mg／mL，4mg／mL，5mg／mL，6mg／mL，7mg／mL，8mg／mL，9mg／mL，10mg／mL），取1．0mL不同質量濃度的樣品溶液（VC溶液作參比參比，濃度為0．01～10mg／mL）于試管中，分別加入4．0mL提前配制的DPPH溶液（0．023 7g DPPH，甲醇定容至1 000mL，濃度為6mmol／避光放置），振搖混勻后置于暗室中靜置反應30min，于517nm處測定吸光值，1．0mL不同質量濃度的樣品溶液與4．0mL甲醇混合液測定樣品本底吸光值，4．0mL DPPH 與1．0mL甲醇混合液測定對照溶液吸光值，按式（3）計算DPPH自由基清除率。

式中：Ax為不同樣品溶液吸光值，Ax0為樣品本底吸光值，A0為對照溶液吸光值。

ABTS自由基清除測定［15］：用去離子水將ABTS溶解，使ABTS濃度為7mmol／L，加入過硫酸鉀使過硫酸鉀的濃度為2．45mmol／L，然后，將該溶液在室溫下避光反應12～16h。之后再將生成的ABTS＋·溶液，用磷酸緩沖液（PBS，pH＝7．4）稀釋至適當濃度，使其在30℃、734nm波長條件下的吸光值為0．700±0．002，便得到ABTS自由基工作液。在試管中加入2．0mL不同質量濃度樣品溶液（VC溶液作參比，濃度為0．01～10mg／mL），再加入2．0mL的ABTS自由基工作液，混合、搖勻，在室溫下反應6min后，在734nm條件下測定其吸光值。用蒸餾水代替樣品溶液作為空白對照，ABTS自由基清除率由下式計算：

式中：Ax為不同樣品溶液吸光值，Ax0為樣品本底吸光值，A0為對照溶液吸光值。

2結果與分析

2．1多糖葡萄糖標準曲線

由Qrigin8．0對試驗數據處理，得到標準曲線的線性回歸方程：A＝8．358 95C－0．004 81；R2＝0．998，并做出葡萄糖標準曲線（圖1）。

圖1 葡萄糖標準曲線Fig．1 The standard curve of glucose

2．2不同因素對瑪咖多糖提取率的影響

2．2．1液料比 由圖2可知，液料比在20～60mL／g時，瑪咖多糖的提取率隨著液料比的增加而逐漸增大，當液料比為60mL／g時，瑪咖多糖的提取率達到最大值，液料比再增加，多糖提取率不再增加，表明最佳液料比為60mL／g附近。浸提多糖的過程，實際是多糖再固液兩相的分配過程，溶劑確定的情況下，多糖的分配系數是一定的，可以通過增加提取溶劑的量而增大提取率，當溶劑量超過一定值后，會增加后續造作的難度，使多糖有所損失，從而導致實際提取率下降。

2．2．2浸提溫度 由圖2還可知，浸提溫度在40～80℃時，浸提溫度升高，瑪咖多糖的提取率也隨之增大，浸提溫度為80℃時，瑪咖多糖的提取率達到最大，繼續升高浸提溫度多糖提取率有所下降，表明最佳浸提溫度為80℃附近。理論上，溫度升高，提取率增大，這是因為溫度越高，分子的熱運動越劇烈，細胞越易破碎，從而使多糖進入水相增加提取率，當溫度超過某一溫度后，雖然增加了多糖的溶出，但可引起多糖與其他物質之間的有機反應，或者導致多糖裂解反應，使實際多糖提取率下降。

2．2．3提取時間 提取時間在30～150min時，提取時間增長，瑪咖多糖的提取率也隨之增大，提取時間為150min時，瑪咖多糖的提取率達到最大，繼續增加時間多糖提取率略有下降，表明最佳提取時間為150min附近（圖2）。時間越長，提取率應不斷增加，但由于液料比一定，提取一定時間后，體系會達到提取平衡，故提取率在平衡值附近波動，不再增加。

圖2 不同液料比、浸提溫度和提取時間的瑪咖多糖提取率Fig．2 Effect of different liquid－solid ratio，temperature and time on Maca polysaccharide extraction rate

2．3響應面優化試驗

2．3．1響應面優化結果 由表2可知響應面優化瑪咖多糖提取的試驗設計及各處理的提取率，采用經Design－Expert 8．0．6軟件對表2試驗結果進行多元回歸擬合，建立二次多項式回歸模型，對各因素進行二次多項式回歸擬合后，得到二次多項式回歸方程：

多糖提取率＝9．59－0．023A＋0．14B＋0．038C－0．023AB－0．022AC＋4．5×10－3BC－0．077A2－0．24B2－0．086C2。

表2 響應面優化瑪咖多糖提取的試驗設計及結果Table 2 Design and results of response surface optimization for Maca polysaccharide extraction

對其進行方差分析可知，該回歸模型達到極顯著水平（P＜0．01）。模型中的B、C、A2、B2、C2對響應值影響極顯著（P＜0．01），A、AB、AC對響應值影響顯著（P＜0．05），表明試驗因素對響應值不是簡單的線性關系。此模型的決定系數R2＝0．989，說明響應值的變化有98．9%來源于所選變量，該方程與實際情況擬合良好，試驗誤差小，能夠正確反映多糖提取率與液料比、浸提溫度和提取時間之間的關系。失擬項P＝0．21＞0．05，差異不顯著，表明建立的二次多項式回歸模型能運用于瑪咖多糖提取優化的理論預測。

2．3．2響應面分析 響應面圖直觀地反映各因素對響應值的影響，而存在極值的條件應在等勢線圖的圓心處。由圖3～圖5可以看出，液料比（A）與浸提溫度（B）及液料比（A）與提取時間（C）之間的交互作用最為顯著。液料比、浸提溫度、提取時間對瑪咖多糖提取的影響均極顯著，表現為曲線較陡。

2．3．3最佳提取條件 選擇合適的液料比、浸提溫度、提取時間可獲得較高的瑪咖多糖的提取率，通過Design－Expert8．0．6軟件分析，預測最佳提取條件為：液料比58．67mL／g，浸提溫度82．22℃，提取時間156．67min，此條件下最大提取率達9．621%。考慮到實際操作的方便性，將各因素修正為液料比59mL／g、浸提溫度82℃、提取時間157min，在修正條件下進行驗證試驗，瑪咖多糖的提取率為9．60%，與理論預測值相符合。

圖3 液料比與浸提溫度相互作用瑪咖多糖的提取率Fig．3 Maca polysaccharide extraction rate under interaction between liquid－solid ratio and extraction temperature

圖4 液料比與提取時間相互作用瑪咖多糖的提取率Fig．4 Maca polysaccharide extraction rate under interaction between liquid－solid ratio and extraction time

圖5 浸提溫度與提取時間相互作用瑪咖多糖的提取率Fig．5 Maca polysaccharide extraction rate under interaction between extraction temperature and extraction time

圖6 瑪咖多糖的洗脫曲線Fig．6 The elution curve of Maca polysaccharide

2．4多糖純化

苯酚－硫酸法隔管檢測各管多糖含量得到洗脫曲線。由圖6可知，18管～40管出現單一峰，合并從18管～40管的洗脫液，預冷后進行冷凍干燥，得到純化的瑪咖多糖。進過層析純化瑪咖多糖的純度由粗多糖的65．5%提高到純多糖的90．7%。

2．5瑪咖多糖的抗氧化性

2．5．1羥自由基的清除率 圖7A可以看出，在試驗質量濃度范圍內，隨著質量濃度的增加，瑪咖多糖對·OH清除率呈逐漸上升趨勢，在1～6mg／mL時粗多糖和純多糖清除作用不斷增加，6～10mg／mL時多糖清除作用趨于穩定，粗多糖與純多糖清除作用相比，純多糖的清除作用更強，最大的清除作用分別為63．9%和72．8%。VC在質量濃度0．002～0．010mg／mL時，隨著質量濃度的增加，其對·OH清除率增加迅速，超過0．010mg／mL后，清除率基本沒有變化，維持在87．6%。與VC相比較，瑪咖多糖對·OH清除能力弱于VC。

圖7 瑪咖多糖對羥自由基、DPPH和ABTS自由基的清除作用Fig．7 Scavenging effect of Maca polysaccharide to free radicals of hydroxyl，DPPH and ABTS

2．5．2PPH自由基清除率 圖7B可以看出，在試驗質量濃度范圍內，隨著質量濃度的增加，瑪咖粗多糖和純多糖對DPPH自由基清除率呈逐漸上升趨勢，兩者趨勢基本一致，但是清除率均低于相同質量濃度條件下VC對DPPH自由基的清除率；在6mg／mL之后多糖清除效率趨于穩定，分別為81．7%和46．5%。VC在質量濃度0．002～0．020mg／mL時，隨著質量濃度的增加，其對DPPH自由基清除率增加迅速，超過0．020mg／mL后，清除率變化不大，維持在97%左右。與相同質量濃度的VC相比，瑪咖粗多糖和純多糖對DPPH自由基的清除率低于VC。

2．5．3ABTS自由基清除率 從圖7C可以看出，隨著質量濃度的增加，瑪咖多糖對ABTS自由基清除率呈逐漸上升趨勢，粗多糖在5mg／mL之后清除作用趨于穩定，清除率為61．4%；純多糖在8mg／mL之后趨于穩定，清除率為83．8%；VC在質量濃度0．002～0．010mg／mL時，隨著質量濃度的增加，其對ABTS自由基清除率增加迅速，超過0．010mg／mL后，清除率基本沒有變化，維持在96．4%左右。相比VC，瑪咖多糖對ABTS自由基清除率要低于VC。

3結論與討論

在單因素試驗的基礎上，運用響應面優化試驗對瑪咖多糖提取工藝進行優化，獲得最佳提取條件，結果表明，液料比、浸提溫度、提取時間對瑪咖多糖提取影響顯著，對提取過程的影響不是簡單的線性關系，由此建立的回歸模型擬合程度良好，預測最佳提取條件為液料比58．67mL／g、浸提溫度82．22℃、提取時間156．67min，此條件下最大提取率達9．621%。考慮到實際操作的方便性，將各因素修正為液料比59mL／g、浸提溫度82℃、提取時間157min，在修正條件下進行驗證試驗，瑪咖多糖的提取率為9．60%，與理論預測值相符合，因此采用響應面法優化得到的浸提條件參數準確可靠，具有實用價值；Sephadex G－100凝膠層析純化瑪咖多糖得到一種純化瑪咖多糖；通過清除自由基試驗評價瑪咖多糖的抗氧化能力表明，瑪咖純多糖對3種自由基的清除效率均大于瑪咖粗多糖，純多糖對羥自由基、DPPH自由基和ABTS自由基的最大清除效率為72．8%、81．7%和83．8%；雖然與VC相比瑪咖多糖抗氧化性要弱，但是瑪咖多糖，尤其是純多糖的抗氧化能力較強，因此瑪咖具有較好的使用價值，純化瑪咖多糖可以進行進一步研究和開發，以期成為功能性食品和藥物。

［1］尹子娟，楊成金，尹品耀，等．瑪咖的營養成分及功效研究進展［J］．云南農業科技，2012（5）：61－64．

［2］甘 瑾，馮 穎，張 弘．三種色型瑪咖芥子油苷組分及含量分析［J］．中國農業科學，2012，45（7）：1365－1371．

［3］王 未，毛日文，趙 婷，等．瑪咖營養成分分析［J］．江蘇農業科學，2013，41（4）：285－286．

［4］楊少華，李國政，薛潤光，等．云南瑪咖產業發展現狀及促進對策分析［J］．世界科學技術：中醫藥現代化，2012，14（4）：1921－1925．

［5］胡 強，康平德，楊少華．云南瑪咖種子產業化發展的現狀、優勢與對策［J］．種子，2013，32（1）：59－62．

［6］李 磊．瑪咖的食品營養與安全評價及開發前景［J］．食品工業科技，2012，33（5）：376－379．

［7］牛曉云．瑪咖高產栽培技術［J］．云南農業科技，2012 （2）：32－32．

［8］孫曉東，唐 輝，杜 萍，等．麗江瑪咖的營養成分分析及多糖體外的抗氧化作用［J］．光譜實驗室，2013，30（5）：2365－2371．

［9］郝利民，張建春，魯吉珂．云南種植瑪咖中多糖提取工藝的優化研究［J］．食品工業科技，2013，34（3）：262－264．

［10］陳燕青，鄭 靜，陸海翔．羧甲基瑪咖多糖制備及抗氧化性研究［J］．中國食品添加劑，2010（2）：94－96．

［11］浦躍武．超聲波提取瑪咖多糖的工藝研究［J］．食品科技，2010（3）：174－177．

［12］趙 鵬．響應面法優化金銀花多糖羧甲基化工藝及抗氧化性研究［J］．天然產物研究與開發，2015，27（1）：114－119．

［13］胡位榮，孫 茹，李昭露，等．霸王花水溶性多糖提取工藝及其對羥自由基的清除作用［J］．食品科學，2013，34（14）：104－107．

［14］王倩倩，楊曉艷，馬 驥．莢果蕨多糖的組成分析及其抗氧化活性［J］．光譜實驗室，2013，30（4）：1647－1651．

［15］白海娜，王振宇，劉瑞海，等．白藜蘆醇與黑木耳多糖協同清除ABTS自由基活性的研究［J］．現代食品科技，2014，30（3）：64－68．

（責任編輯：孫小嵐）

Optimization of Polysaccharide Extraction Technology from Maca and Its Antioxidant Activity

ZHENG Pengpeng，LI Shan，QI Lirong，AO Xinyu1＊
（College of Life Science，Southwest Forestry University，Kunming，Yunnan 650224，China）

The polysaccharide extraction technology from Maca was optimized by the response surface optimization test based on the results of single－factor test to improve the extraction rate of Maca polysaccharide．Maca polysaccharide was purified by Sephadex G－100gel chromatography under the condition of 1mL／min elution speed．The antioxidant activity of Maca polysaccharide was determined by studying the scavenging effect of Maca polysaccharide on hydroxyl radical，DPPH radical and ABTS radical to further develop and utilize functional food Maca in Yunnan．Results：The polysaccharide extraction rate can reach 9．60%under the extraction conditions of 59mL／g liquid／solid ratio，82℃and 157min．The polysaccharide with 90．7%purity can be purified from crude polysaccharide with 65．6%purity．The highest scavenging rate of crude polysaccharide with 6mg／mL concentration and purified polysaccharide with 6mg／mL concentration to hydroxyl radical and DPPH radical is 63．9%，72．8%，and 46．5%，81．7% separately．The highest scavenging rate of crude polysaccharide with 5mg／mL concentration and purified polysaccharide with 8mg／mL concentration to ABTS radical is 61．4%and 83．8%respectively．

Maca polysaccharide；response surface；Sephadex G－100gel chromatography；antioxidant activity

Q539

A

1001－3601（2016）02－0085－0143－06

2015－05－18；2015－12－30修回

云南省優勢特色重點學科生物學一級學科建設項目（50097505）

鄭朋朋（1990－），男，在讀碩士，研究方向：生物化學與分子生物學。E－mail：zhengpp12＠163．com

＊通訊作者：敖新宇（1978－），男，副教授，從事生物化學與分子生物學研究。E－mail：54700875＠qq．com