急性冠脈綜合征患者血小板功能與CYP2C19及GPIaC807T基因多態性的相關性研究

張 強 金一琦 劉艷琪 童 敏 龔俊榮 劉 靜 宋 祺 陳文婷 呂 克

急性冠脈綜合征患者血小板功能與CYP2C19及GPIaC807T基因多態性的相關性研究

張 強1金一琦2劉艷琪1童 敏1龔俊榮1劉 靜1宋 祺1陳文婷1呂 克1

目的 本研究探討急性冠脈綜合征患者血小板功能與CYP2C19和GPIaC807T基因多態性的相關關系，以及不同基因型患者對抗血小板治療效果的差異。方法 入選282例確診的急性冠脈綜合征（Acute Coronary Syndrome，ACS）患者，測定細胞色素P450（CYP）2C19和血小板膜糖蛋白（platelet membrane Glycoprotein，GP）IaC807T基因型，以及花生四烯酸（Arachidonic Acid，AA）和二磷酸腺苷（Adenosine Diphosphate，ADP）誘導的血小板聚集率。結果 抗血小板治療前，攜帶GPIaC807T等位T基因的ACS患者血小板聚集率高于CC基因型患者，而CYP2C19不同基因型患者間的血小板聚集率差異無統計學意義。雙聯抗血小板治療對CYP2C19慢代謝型的效果較快代謝型和中等代謝型差；而對GPIaC807T CC基因型患者相比攜帶T等位基因的患者治療效果更顯著。結論 GPIaC807T的基因多態性可能是影響急性冠脈綜合癥發生和抗血小板療效差異的另一因素。攜帶GPIa T等位基因的CYP2C19慢代謝型ACS患者可能需要更積極的抗血栓治療方案。

急性冠脈綜合征（ACS）；CYP2C19；GPIaC807T基因多態性；血小板聚集率

流行病學資料表明我國急性冠脈綜合征（ACS）年發病率為50/10萬，且逐年增加［1］。血小板在不穩定動脈粥樣斑塊局部的粘附和聚集作用在ACS的進程中發揮著至關重要的作用［2-3］。

既往研究證實ACS患者能從雙聯抗血小板治療（DAPT）獲益［4］。藥理學研究也證實為了達到迅速抑制血小板功能的目的，需要在抗血小板治療的初始階段給予負荷劑量［5］。有研究顯示，ACS患者接受標準雙聯抗血小板治療方案反應的變異性大［6］，有近1/3患者對抗血小板治療的反應低，因此增加了血栓的風險。氯吡格雷是一種前體藥物，必須經過一系列生物轉化，才能發揮抗血小板聚集的作用［7］。CYP2C19基因在氯吡格雷轉化為活性代謝產物的過程中發揮著重要作用，該基因存在多種突變等位基因，中國人群的變異主要是CYP2C19*2 和CYP2C19*3 兩種類型，這兩種突變基因型均能造成CYP2C19 酶活性的降低或完全喪失，從而對氯吡格雷的療效產生重要的影響［8-9］。

血小板膜糖蛋白（GP）位于血小板表面，在止血過程中發揮重要作用［10］，研究證據表明GP的多態性可導致GPIa/IIa表達的差異達3～4倍［11］，攜帶T807等位基因的個體GPIa/IIa表達水平高，而攜帶C807基因的個體表達水平低，這可能是動脈血栓的遺傳風險之一［12］。迄今為止，有關探討GPIaC807T多態性對動脈血栓影響研究的結論不一，尤其缺乏對ACS患者接受負荷劑量雙聯抗血小板治療后影響的相關研究。

本研究評估接受冠脈介入治療（PCI）和標準雙聯抗血小板藥物治療的ACS患者的血小板功能，并進一步研究CYP2C19基因型和GPIaC807T多態性與抗血小板治療反應之間的關系，探討GPIaC807T多態性在ACS病理機制中的作用。

1 研究方法

本研究方法經醫院倫理委員會批準，研究對象均知情同意。入選2013年5月～2014年5月接受PCI的ACS患者282例，排除：近一周內曾接受影響血小板功能的藥物治療者；已知對阿司匹林、氯吡格雷過敏者；血小板計數＜100×109/L，或＞300×109/L者。所有研究對象年齡均≤80歲，且均為漢族人群。記錄研究對象的基線資料、臨床和冠脈造影資料。PCI圍術期根據冠脈介入指南給予抗血栓藥物治療。研究對象接受雙聯抗血小板治療負荷劑量前和24小時后分別采集肘靜脈血液，進行血小板聚集率檢測。入院第2天晨空腹采血，檢測生化、血小板α-顆粒膜蛋白（GMP-140），采用標準程序分離全血基因組，利用基因芯片試劑盒，PCR擴增后測定CYP2C19和GPIaC807T基因型。

2 統計學分析

應用SPSS 13.0統計軟件進行分析，計量資料以（均數±標準差）表示，計數資料以頻率和百分比表示。P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 研究對象的基線特征和CYP2C19、GPIaC807T多態性分布

共納入282例ACS患者（男性，188例；女性，94例，平均年齡（66.3±10.8）歲，測定CYP2C19基因型，CYP2C19*1/*1有 117例（41.5%），CYP2C19*1/*2 有 94例（33.3%），CYP2C19*1/*3 有25例（8.9%），CYP2C19*2/*2有28 例（9.9%），CYP2C19*2/*3 有17 例（6.0%），CYP2C19*3/*3 有1例（0.4%）。分為：快代謝組（CYP2C19*1/*1），117例（41.5%）；中等代謝組（CYP2C19*1/*2 和CYP2C19*1/*3），119例（42.2%）；慢代謝 組（CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3 和 CYP2C19*3/*3），46例（16.3%）。測定GPIa基因型，CC型86例（30.5%）；TC型129 例（45.7%）；TT型67例（23.8%）。兩個基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

分別按兩個基因型分組，分析ACS患者的臨床基線情況和血清學指標，無論按何種基因型分組，患者各組間的基線特征、LDL、GMP-140、血小板計數等都差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究中冠脈介入治療均成功，無嚴重血栓、出血并發癥。

3.2 血小板聚集

將ACS患者分別按CYP2C19基因型分為快代謝、中等代謝和慢代謝三組；按GPIaC807T基因型分為CC、CT和TT三組。在雙聯抗血小板治療前，快代謝、中等代謝和慢代謝三組間血小板聚集率差異無統計學意義（P＞0.05）（表1）；而GPIaC807T基因型CC組患者的血小板聚集率低于TT組和TC組（表2）。雙聯抗血小板治療顯著降低快代謝和中等代謝組患者的血小板聚集率，而對慢代謝組患者的療效不顯著；治療后，慢代謝組患者的血小板聚集率高于另兩組患者。雙聯抗血小板治療對GPIaC807T基因型分組的CC、CT和TT三組患者血小板聚集率均有降低；但治療后，CC組患者的血小板聚集率低于另兩組患者。上述結果提示，GPIa T等位基因攜帶者可能有血小板聚集能力增強的趨勢。盡管雙聯抗血小板治療對三個基因型ACS患者的的血小板聚集均有抑制作用，但相對于GPIa T等位基因攜帶者，尤其TT基因型患者，CC基因型患者可能對抗血小板治療更敏感。

4 討論

研究顯示血小板在ACS這一血栓性心血管疾病的病理機制中起了重要作用［2-3］。DAPT是目前治療ACS的規范，但由于氯吡格雷的藥代學特征，在轉化為活性代謝產物的過程受CYP2C19基因的影響，從而影響抗血小板治療的效果。本研究入選282例漢族ACS患者，基因分型檢測顯示其中慢代謝組占16.3%。DAPT前，慢代謝組患者的血小板聚集率與快、中代謝組患者差異無統計學意義（P＞0.05），但DAPT對慢代謝組患者的療效不顯著。該結果進一步證實了本研究對象中CYP2C19*2 和CYP2C19*3 兩種突變基因型造成CYP2C19 酶活性的降低或完全喪失，從而降低了氯吡格雷的抗血小板療效，與既往研究結果一致［8-9］。

本研究探討了另一與血小板聚集相關的血小板膜糖蛋白（GP）IaC807T基因多態性的臨床意義。GP作為血小板表面糖蛋白在止血中發揮關鍵作用。GPIa /IIa（整合素α2β1）是血小板一個主要的膠原蛋白受體，在血小板粘附過程中起著重要作用。有越來越多的證據表明，C807T基因多態性與GPIa/IIa的表達密切相關［10-11］。數個病例對照研究也提示缺血性卒中與GPIaC807T基因型相關，T807攜帶者具有更高高血栓性疾病的風險［12-13］。本研究探討了GPIaC807T基因多態性對血小板功能，以及對DAPT反應的影響。研究結果顯示TT基因型ACS患者ADP誘導的血小板聚集率高于CC和TC基因型ACS患者。既往也有研究提示TT基因型人群血小板聚集率≥50%的比例高于CC和CT基因型人群［13］。我們進一步分析了C807T不同的基因型ACS患者對DAPT的反應，在給予阿司匹林和氯吡格雷治療后再次評估血小板聚集率顯示，DAPT對三組基因型患者的血小板聚集率均有降低，差異具有統計學意義，但對CC基因型組患者血小板聚集率的降低尤為顯著，這與Gurbel等［6］的研究結果一致，他們對18例穩定性心絞痛患者給予相同的氯吡格雷治療，發現CC基因型患者對治療較T等位基因攜帶患者更為敏感。GP IaC807T基因型與血小板聚集率之間的相關關系提示，該基因的多態性可能在影響ACS患者血小板聚集方面起著重要的作用。

表1 ACS組患者根據CYP2C19基因型分組患者的血小板聚集率

表2 ACS組患者根據GPIaC807T基因型分組患者的血小板聚集率

本研究的結果提示除了CYP2C19基因型影響了DAPT的療效，GPIaC807T的基因多態性也與ACS的發生發展明顯相關。T等位基因攜帶者與ACS發生和預后不良的風險增加有關。而C等位基因攜帶者則對雙聯抗血小板治療更為敏感。這一結論的臨床意義在于有助于識別出血栓事件的高危患者，并對強化抗血小板方案治療這部分患者提供理論依據。

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Polymorphisms of Glycoprotein IaC807T and CYP2C19 and the Association With Platelet Function in Patients With the Acute Coronary Syndrome

ZHANG Qiang1JIN Yiqi2LIU Yanqi1TONG Min1GONG Junrong1LIU Jing1SONG Qi1CHEN Wenting1LV Ke11 Department of Cardiovascular，Nanjing Medical University Affiliated Suzhou Hospital，Suzhou Jiangsu 215002，China，2 Department of Vascular Surgery

Objective In the current study，we explored the relationship between Cytochrome P450（CYP）2C19，glycoprotein Ia（GPIa）C807T polymorphisms and platelet function; and the differences to dual antiplatelet treatment among different genotypes of acute coronary syndrome（ACS）patients． Methods We conducted a study in 282 patients diagnosed with ACS． The CYP2C19 and GPIaC807T genotypes of patients were determined，and platelet aggregation and plasma concentrations of α-granule membrane protein （GMP-140） were assessed following stimulation with arachidonic acid and adenosine diphosphate． Results Before dual antiplatelet treatment（DAPT），platelet aggregation was significantly lower in individuals with the CC group than in those with the T allele; but there there was no difference among three kinds of metabolism phenotypes of CYP2C19． DAPT reduced platelet aggregation in all three genotypes of GPIaC807T，and patients carrying the CC genotype were more sensitive to DAPT than those with the T allele． In patients of poor metabolizers of CYP2C19，platelet aggregation after DAPT was higher than the individuals of expensive metalolizers and intermediate metalolizers． Conclusion The GPIaC807T polymorphism might be a risk factor for the development and relapse of ACS． The GP Ia T allele and the poor metabolizers of CYP2C19 may help to identify a group of patients who need more aggressive antithrombotic treatment．

Acute coronary syndrome（ACS），CYP2C19，GPIaC807T gene polymorphism，Platelet aggregation rate

R541．4

A

1674-9316（2016）22-0074-04

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．22．045

蘇州市科技發展計劃（社會發展）項目（SZD09119）

1南京醫科大學附屬蘇州醫院心血管內科，江蘇 蘇州215002；2血管外科通訊作者：呂克，E-mail：jackie01cn@aliyun．com