龍葵多糖對四氯化碳致小鼠肝損傷的保護作用及其機制

鄭岳，孫偉，盧坤玲，鄭繼堯，王益民，李健( 秦皇島市第一醫院，河北秦皇島066000； 燕山大學)

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·基礎研究·

龍葵多糖對四氯化碳致小鼠肝損傷的保護作用及其機制

鄭岳1，孫偉1，盧坤玲1，鄭繼堯1，王益民1，李健2(1 秦皇島市第一醫院，河北秦皇島066000；2 燕山大學)

摘要：目的探討龍葵多糖對四氯化碳(CCl4)所致肝損傷的保護作用及其機制。方法選擇昆明種小鼠40只，隨機均分為百賽諾組、龍葵多糖低劑量組、龍葵多糖高劑量組、對照組、模型組。百賽諾組、龍葵多糖低劑量組、龍葵多糖高劑量組分別予百賽諾200 mg/kg、龍葵多糖200 mg/kg、龍葵多糖400 mg/kg灌胃，對照組、模型組給予等體積生理鹽水灌胃，均連續灌胃14天。末次灌胃1 h，對照組腹腔注射豆油溶液，其余四組腹腔注射含2% CCl4的豆油溶液。禁食12 h，龍葵多糖低劑量組、龍葵多糖高劑量組分別予龍葵多糖200、400 mg/kg灌胃，百賽諾組予百賽諾200 mg/kg灌胃，對照組和模型組予等體積生理鹽水灌胃。灌胃30 min，摘除眼球取血，檢測血清AST、ALT；斷頸處死小鼠，取肝臟，檢測肝臟指數及肝組織勻漿脂質過氧化產物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)。結果與對照組比較，模型組肝臟指數增加(P<0.01)；龍葵多糖高劑量組及百賽諾組肝臟指數均較模型組降低(P均<0.05)。與對照組比較，模型組血清AST、ALT水平均升高，肝組織勻漿SOD水平降低、MDA水平升高(P均<0.05)；與模型組比較，龍葵多糖低、高劑量組及百賽諾組血清AST、ALT水平均降低，肝組織勻漿SOD水平均升高，MDA水平均降低(P均<0.05)。結論龍葵多糖對CCl4所致的肝損傷具有保護作用，其機制可能與增加肝組織抗氧化能力有關。

關鍵詞：肝損傷；龍葵多糖；四氯化碳；抗氧化作用；小鼠

龍葵全草及果實含有紅色素、氨基酸、維生素、多糖類、生物堿類等多種物質[1~3]，具有清熱消腫、消炎止咳、抗腫瘤等作用[4]，目前已應用于食品、染料、醫藥等領域[5]。研究表明，龍葵多糖主要通過調節免疫細胞實現對機體的免疫調節，是一種免疫增強劑，通過提高抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質過氧化而發揮保護生物膜的作用[6]。但龍葵多糖是否具有肝保護作用，國內外鮮見報道。2015年3~6月，本研究觀察了龍葵多糖對四氯化碳(CCl4)致小鼠肝損傷的保護作用，現分析結果并探討其機制。

1材料與方法

1.1材料健康雄性昆明種小鼠40只，6～8周齡，體質量(20±2)g，購自中國醫學科學院實驗動物中心。顆粒飼料喂養，實驗期間自由攝食、飲水。龍葵多糖[制備：取干燥的龍葵全草，加入4倍體積水，微沸浸提5 h，過濾，濾渣重復提取3次，合并3次的水提液。靜置去沉淀后濃縮，逐漸加入95%乙醇(1∶4)并不斷攪拌，4 ℃靜置24 h。抽濾沉淀，分別用無水乙醇、丙酮、石油醚淋洗3次，得到淺黃色粉末狀物質，干燥。將其溶于水中，加入等體積Savage液(氯仿∶正丁醇=4∶1)，振蕩、混勻、離心，棄下層有機相，重復上述操作10次，將游離蛋白除盡，保留上清液，干燥后稱質量。500 g龍葵全草經過上述操作后得到龍葵粗多糖47.1 g(9.42%)]。AST、ALT試劑盒和MDA、SOD試劑盒均購于南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國產分析純。

1.2動物分組及處理所有小鼠適應性喂養1周，隨機分為百賽諾組、龍葵多糖低劑量組、龍葵多糖高劑量組、對照組、模型組，每組8只。前三組分別予百賽諾200 mg/kg、龍葵多糖200 mg/kg、龍葵多糖400 mg/kg灌胃，后兩組予等體積生理鹽水灌胃，灌胃體積均為0.3 mL，均連續灌胃14天。末次灌胃1 h，對照組腹腔注射豆油溶液，其余四組腹腔注射含2% CCl4的豆油溶液，注射體積均為0.2 mL。禁食12 h，龍葵多糖低劑量組、龍葵多糖高劑量組分別予龍葵多糖200、400 mg/kg灌胃，百賽諾組予百賽諾200 mg/kg灌胃，對照組和模型組予等體積生理鹽水灌胃。

1.3相關指標觀察①血清AST、ALT：灌胃30 min，摘除眼球取血，分離血清，采用AST、ALT試劑盒檢測血清AST、ALT。②肝臟指數：小鼠稱質量后斷頸處死，取出肝臟稱質量，計算肝臟指數。肝臟指數=肝臟質量/體質量×1 000[5]。③肝組織脂質過氧化產物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)：肝臟組織勻漿，離心獲上清，制備成10%組織勻漿液，采用MDA、SOD試劑盒檢測MDA、SOD。

2結果

2.1各組血清ALT、AST水平比較見表1。

表1　各組血清ALT、AST水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與百賽諾組比較，△P<0.05。

2.2各組肝臟指數比較見表2。

表2　各組肝臟指數比較±s)

注：與對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

2.3各組肝組織勻漿SOD、MDA比較見表3。

表3　各組肝組織勻漿SOD、MDA水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。

3討論

龍葵全草均可入藥，具有抗腫瘤、抑菌、抗病毒作用，對神經系統、心血管系統疾病具有較好療效[7～10]。龍葵經水提醇沉法可獲得水溶性多糖，即龍葵多糖。研究表明，龍葵多糖具有良好的抑瘤效果和免疫調節功能[11]，但其對肝損傷是否具有保護作用鮮見報道。

CCl4誘導的肝損傷模型是急性肝損傷研究的典型模型。目前認為，CCl4引起肝細胞中毒與其自由基代謝產物導致機體脂質過氧化有關，其機制是CCl4經肝細胞微粒體細胞色素P450氧化酶系統代謝、激活后生成三氯甲烷自由基、二氯甲烷自由基及過氧化三氯甲烷自由基，攻擊肝細胞膜或激活膜上的磷酸化酶，引起細胞膜和細胞器質膜過氧化損傷，進一步導致細胞中蛋白質合成發生障礙。CCl4誘發急性肝損傷的病理表現為肝細胞彌漫性變性、壞死、大量炎性細胞浸潤，與臨床病毒性肝炎病理變化極為相似。百賽諾(雙環醇片)可保護肝細胞膜和線粒體，減輕肝臟的炎性損傷，防止肝纖維化；可增強肝臟蛋白質的合成，促進肝細胞再生，可作為肝損傷陽性對照藥物。

ALT和AST主要存在于肝細胞的胞質和線粒體中，血清含量很低。血清ALT、AST水平可反映肝細胞膜損傷程度，是評價肝細胞壞死的重要指標[12]。肝臟指數是反映肝細胞炎性病變的重要指標，其水平與肝臟損傷程度呈正相關。肝損傷后細胞膜通透性增加，ALT、AST逸出細胞，導致血清ALT、AST升高。本研究結果顯示，模型組肝臟指數及血清AST、ALT水平均較對照組顯著升高。說明小鼠急性肝損傷模型制備成功。

正常生理狀態生物體內不斷生成自由基，機體可以通過自身的抗氧化酶系統進行清除，不至于引起組織細胞的脂質過氧化而出現肝損傷。SOD是體內代謝活性氧游離基的主要酶，其功能是將細胞內外產生的活性氧游離基代謝為過氧化氫，生成的過氧化氫在過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化酶的催化下分解為水，以消除自由基，阻止自由基的脂質過氧化。CCl4誘發肝細胞產生的大量自由基可引起脂質過氧化，產生大量脂質過氧化物(LPO)，LPO進一步氧化成終產物MDA。MDA含量可反映組織脂質過氧化程度。本研究結果表明，龍葵多糖低、高劑量組肝臟指數及血清ALT、AST水平均較模型組降低，說明龍葵多糖對急性肝損傷具有一定的保護作用，且效果與臨床常用保肝藥物百賽諾相近。龍葵多糖可以顯著增加肝損傷小鼠肝組織SOD活性，降低MDA水平，提示龍葵多糖可能通過增強肝細胞的抗氧化能力，維持細胞質膜正常結構，減輕肝組織損傷程度。

綜上所述，龍葵多糖對CCl4所致的急性肝損傷具有保護作用，其機制可能與增加肝組織抗氧化能力有關。

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(收稿日期：2015-07-10)

中圖分類號：R575.5

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)08-0023-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.008

通信作者：王益民(E-mail: drwangyimin@126.com)

基金項目：河北省科技計劃項目(14397702D)。