香椿嫩芽水提取液體外抑菌試驗研究

杜銀香

【摘要】目的：對香椿嫩芽的抑菌作用進行研究，為新鮮香椿嫩芽的開發(fā)利用提供依據(jù)。方法：采用牛津小杯法和瓊脂稀釋法。結果：新鮮香椿嫩芽水提液對大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌圈直徑分別是11.2、11.3、11.4mm，最低抑菌濃度為12.5 mg/ml；對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、白假絲酵母菌抑菌圈直徑分別是14.2、14.0、14.2mm，最低抑菌濃度為6.25mg/ml。結論：新鮮香椿嫩芽有一定的抑菌作用。

【關鍵詞】 香椿嫩芽；水提取液；抑菌

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）05-0001-02

Abstract：Objective To study the antimicrobial activity of Toona sinensis Roem. Method Oxford cup method and Agar dilution method. Results Toona sinensis Roem water extraction may have the effect on the growth of microorganism.The inhibition zone diameter of E. coli， E. aerogenes， P. aeruginosa is 11.2、11.3、11.4mm and the minimum inhibitory concentration against those is 12.5 mg/ml.The inhibition zone diameter of S.aureus、S.epidermidis，C.albicans is 14.2、14.0、14.2mm and the minimum inhibitory concentration against those is 6.25mg/ml. Conclusion： Toona sinensis Roem has a good antimicrobial activity.

Keywords：Toona sinensis Roem； water extraction； antibacterial

香椿Toona sinensis（A.Juss）Roem 屬楝科（Meliacea）香椿屬落葉喬木，全國均有分布。清明前后香椿樹開始抽出鮮嫩枝葉稱為香椿嫩芽，食之清香鮮嫩，是一種時令美食[1]。香椿全株具有特殊氣味，同時具有很高的藥用價值，《本草綱目》記載，香椿的葉、芽、根、皮和果實均可入藥。民間也有“常食椿芽不染病”之說[2]。目前，香椿嫩芽以食用為主，其藥用方面的價值還沒有完全發(fā)掘。研究對新鮮香椿嫩芽進行抑菌作用研究，為其鮮嫩枝芽的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 香椿嫩芽 2015年4月上旬采自恩施本地，新鮮備用。

1.2 菌株 大腸埃希菌（CMCC44102）、產(chǎn)氣腸桿菌（CMCC45103）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、表皮葡萄球菌（CMCC12228）為湖北民族學院醫(yī)學院微生物實驗室保存菌種；白假絲酵母菌、銅綠假單胞菌為臨床分離菌株，由湖北民族學院附屬醫(yī)院檢驗科提供。

1.3 培養(yǎng)基 MH瓊脂（批號：20150309）、營養(yǎng)瓊脂（批號：20150308）由杭州微生物試劑有限公司提供。

1.4 儀器 YXQ-30SⅡ立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實業(yè)股份有限公司）；AC2-4S1生物安全柜（ESCO公司生產(chǎn)）；XMT-9017恒溫恒濕培養(yǎng)箱（重慶永恒試驗儀器廠）；微量加樣槍（德國BRAND公司）。

2 方法

2.1 香椿嫩芽水提取液的制備 將50g新鮮的香椿嫩芽連葉帶莖桿切碎后加入100ml蒸餾水中，煮沸10min，過濾，濃縮至50ml（即每毫升藥液含1g生藥）。

2.2 菌種的準備 各種待測菌接種于普通瓊脂平板37℃孵育18h（白假絲酵母菌孵育24h）后，挑取適量菌落置于5ml生理鹽水中，使其濃度為0.5麥氏標準，再將0.5麥氏比濁度菌液稀釋10倍，15min內(nèi)，將上述被檢菌株懸液接種到MH瓊脂平板上。

2.3 牛津小杯法[3] 在直徑90mm的MH瓊脂平板表面滴加菌液0.1ml，均勻涂布。用鑷子以無菌操作技術將滅菌后的牛津小杯輕輕放到上述已經(jīng)涂布了細菌的MH瓊脂平板上，每個平板上均勻的放置四個牛津小杯。用微量加樣器吸取1g/ml香椿嫩芽水提取液，緩緩加入到牛津小杯中至滿（勿外溢），每杯200μl，每個平板上的三個牛津小杯中均加入相同劑量的香椿嫩芽水提取液，剩下的一個牛津小杯中加入200μl生理鹽水做空白對照，做好標記，將上述平板平放于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～18h（白假絲酵母菌培養(yǎng)48h）后觀察結果。觀察小杯周圍有無抑菌圈，并測量其大小。每種細菌做3個重復，以抑菌圈直徑的平均值為試驗結果。

2.4 瓊脂稀釋法[4]

2.4.1 含藥瓊脂的制備 將香椿嫩芽水提液原液進行一系列倍比稀釋，分別取2ml加入到直徑為90mm的平板內(nèi)，再取融化后已在50℃水浴中平衡0.5h以上的MH瓊脂18ml加進平板內(nèi)（藥物：瓊脂=1：9），邊加邊搖晃平板，使藥物和培養(yǎng)基充分混勻。

2.4.2 接種 用微量加樣器取2μl菌液接種到平板的劃定區(qū)域，使接種后所形成的菌液圈直徑約5～8mm。接種時先接種含藥濃度低的平板，再接種含藥濃度高的平板，最后接種不含藥物的生長對照平板，以檢查整個試驗過程中測試菌的存活狀態(tài)。

2.4.3 培養(yǎng) 接種點菌液干后移動平板，置37℃培養(yǎng)16～20h（白假絲酵母菌培養(yǎng)48h）。

2.4.4 結果判斷 以不出現(xiàn)菌落的MH瓊脂平板上的最低藥物濃度為該藥對檢測菌的最低抑菌濃度（MIC），單一菌落生長可忽略不計。

3 結果

3.1 牛津小杯法的試驗結果 見表1。

3.2 瓊脂稀釋法的試驗結果 見表2。

由表1、2可知，新鮮香椿嫩芽水提取液對常見細菌及真菌的生長均有一定的抑制作用，顯示有一定的廣譜抑菌活性。對革蘭陰性細菌大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、銅綠假單胞菌抑菌圈直徑分別是11.2、11.3、11.4mm，最低抑菌濃度都為12.5mg/ml，對革蘭陽性細菌金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌抑菌圈直徑分別是14.2、14.0，最低抑菌濃度為6.25mg/ml，對常見酵母樣真菌白假絲酵母菌的抑菌圈直徑是14.2mm，最低抑菌濃度為6.25mg/ml。

4 討論

隨著抗生素的廣泛應用以及不合理使用，細菌的耐藥性現(xiàn)象逐漸增多，為臨床治療疾病帶來了很大困難。如何有效防治細菌感染及控制細菌耐藥性的產(chǎn)生與播散是一項長期、復雜、艱巨的任務，因而尋找和研制有效的抗菌藥物非常必要[5]。中藥歷史悠久，功效顯著，許多研究資料表明，中藥在體內(nèi)外有不同程度的抑菌作用，并且較抗生素不易產(chǎn)生耐藥性。另外中藥具有毒副作用小，取材方便，經(jīng)濟實惠的優(yōu)點，因此研究和開發(fā)中藥抗菌藥具有重大意義[6]。

我國香椿樹資源豐富，現(xiàn)在一般新鮮的香椿嫩芽只是作為時令蔬菜在食用，它的藥用價值，特別是作為抗菌藥物使用的價值還沒有得到很好的發(fā)揮。從研究結果可以看出，香椿嫩芽水提取液具有一定的廣譜抑菌活性，在體外對革蘭陽性和陰性細菌以及白假絲酵母菌均有抑菌作用，特別是對臨床分離菌株銅綠假單胞菌的抑菌作用更有重要意義。因為銅綠假單胞菌具有多重耐藥的特性，能天然抵抗多種抗菌藥物，Kolar報導銅綠假單胞菌多重耐藥株占其臨床分離株的4.0%～26.3%[7]。本研究結果將為從香椿嫩芽中提取有效的抗菌成分提供了依據(jù)，對合理開發(fā)和利用香椿嫩芽資源具有一定的指導意義。

參考文獻

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（收稿日期：2015.12.11）