復方三七散外敷對靜脈留置針所致靜脈內皮細胞凋亡的保護作用*

張喜平，蘇　艷，王杏敏滄州醫學高等專科學校，河北滄州061001

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復方三七散外敷對靜脈留置針所致靜脈內皮細胞凋亡的保護作用*

張喜平，蘇艷，王杏敏
滄州醫學高等專科學校，河北滄州061001

［摘要］目的：探討復方三七散對靜脈留置針所致靜脈內皮細胞凋亡的保護效果，為臨床推廣應用提供理論依據。方法：將30只成年新西蘭大耳兔隨機分為3組，每組10只，兔外耳緣靜脈血管穿刺后留置靜脈留置針，每天注射生理鹽水20 mL。對照組不用任何藥物，硫酸鎂組給予50％硫酸鎂紗布濕敷，復方三七散組給予復方三七散藥粉和70％酒精混合藥糊外敷，每天換藥1次，連續觀察10天后處死，取外耳緣靜脈標本制作切片，觀察HE染色法和TUNEL法標本的細胞凋亡情況。結果：HE染色法和TUNEL法都顯示復方三七散組細胞凋亡均少于其他2組（P＜0.05）。結論：復方三七散外敷對靜脈留置針所致靜脈內皮細胞凋亡具有保護作用，且效果優于硫酸鎂。

［關健詞］復方三七散；靜脈留置針；靜脈炎；細胞凋亡

Effects of Compound SanQi Powder for External Use on Venous Indwelling Needle-induced Cellular Apoptosis in Venous Endothelium

ZHANG Xiping,SU Yan,WANG Xingmin
Cangzhou Medical College，Cangzhou 061001,China

Abstract Objective:To provide theoretical evidence for clinical spread and application by exploring the effects of compound SanQi powder on venous indwelling needle-induced cellular apoptosis in venous endothelium.Methods:Thirty rabbits were randomized into three groups,ten rabbits each group,the rabbits were injected with physiological saline each day,20mL,after auricular vein of the rabbit were punctured and venous indwelling needle was retained,the control group was unhandled,magnesium sulfate group accepted 50％ magnesium sulfate wet compress,compound SanQi powder group compound SanQi powder and 70％ alcohol for external use,dressing changed once each day,the rabbits were sacrificed after observing for ten days consecutively,the sample of rabbit auricular vein was taken out and the slice was made,cellular apoptosis of the sample was observed after dealt with HE staining method and TUNEL method.Results:The results of HE staining method and TUNEL method demonstrated that compound SanQi powder was less than other two groups in cellular apoptosis (P＜0.05).Conclusion:Compound SanQi powder for external use could protect venous indwelling needle-induced cellular apoptosis in venous endothelium,and its effects are superior to these of magnesium sulfate.

Keywords compound SanQi powder;venous indwelling needle;phlebitis;cellular apoptosis

靜脈留置針的廣泛應用極大地方便了臨床護理工作，然而隨著留置時間的增長，患者靜脈炎的發生率也隨之增高。因此尋求能夠延長靜脈留置針留置時間的方法和藥物就很有必要了。臨床運用自擬方劑“復方三七散”外敷防治靜脈留置針所致靜脈炎取得一定療效。為進一步探求其防治機理，筆者觀察了復方三七散對兔耳緣靜脈留置針所致靜脈內皮細胞凋亡保護作用的實驗研究，現報道如下：

1　材料與方法

1.1材料及藥物選用同種健康新西蘭大耳兔30只(購自河北醫科大學實驗動物中心，合格證號：醫動字第DK0507-0108)，月齡：5個月，普通級，體質量3.5～4.0 kg，雌雄各半，實驗前適應性喂養1周。美國BD公司生產Vialon材料制成的24G靜脈留置針，3M透明敷貼；生理鹽水注射液；封管液采用含量為25 U/mL肝素鹽水。TUNEL試劑盒為promega公司的末端熒光標記TUNEL試劑盒。中藥復方三七散的配制選用中藥三七、大黃、遠志、葛根、冰片，以4∶2∶2∶2∶1的比例混合，粉碎，過120目篩，備用。

1.2實驗動物及分組選取同種健康新西蘭大耳兔30只，隨機分為3組，每組10只，單籠飼養，每只兔籠上按分組編號。3組大耳兔在體質量、性別、健康狀況方面，差異無統計學意義(P＞0.05)。第1組右耳為靜脈留置針空白對照小組，左耳為復方三七散外敷治療小組；第2組右耳為靜脈留置針空白對照小組，左耳為硫酸鎂外敷治療小組；第3組右耳為硫酸鎂外敷治療小組，左耳為復方三七散外敷治療小組。

1.3靜脈留置針的操作方法指定一名經驗豐富的護士進行操作，選取兔外耳緣靜脈血管，用剃毛刀剃去實驗兔耳毛，選取兔外耳緣靜脈距耳尖1 cm處為穿刺點，皮膚常規消毒后，用BD 24G靜脈留置針由耳尖向耳根方向穿刺，刺入靜脈見回血后沿靜脈方向將穿刺針刺入少許，邊拔出針芯邊將導管全部輕輕送入靜脈，以常規輸液貼固定，緩慢勻速注射生理鹽水20 mL，15分鐘注完。如有外滲廢棄不用。注射完畢時生理鹽水2 mL脈沖式正壓封管，妥善固定包扎。用自制兔耳套包裹雙耳，以防抓脫。每隔24小時摘下兔耳套，按編號順序再次注射。

1.4各組藥物外敷方法復方三七散外敷小組：以穿刺血管為中線兩側各寬1 cm，共寬2 cm，以穿刺點為標記遠心端1 cm，近心端5 cm，共長約6 cm的矩形面積，作為藥物外敷范圍。每日注射生理鹽水20 mL，正壓封管后外敷一次。將復方三七散藥粉和70％酒精按2∶1比例混合成糊狀，用棉簽涂抹在外敷范圍，厚度2 mm左右，外敷后用保鮮膜覆蓋。24小時后用生理鹽水棉球擦去外敷藥，觀察局部皮膚，再采用同樣的藥物、方法外敷，1次/d。硫酸鎂外敷組：紗布需4層，用50％硫酸鎂溶液浸濕紗布濕敷，外敷后用保鮮膜覆蓋，24小時后更換紗布，范圍同復方三七散組。每日注射生理鹽水20 mL。靜脈留置針空白對照小組：每日常規注射生理鹽水20mL，正壓封管后不做外敷。

1.5對各組動物處理實驗開始后，每天上午9∶00開始按編號順序進行注射、外敷藥物，然后給予正常飲食和水，觀察實驗兔飲食、活動情況。相同操作進行240小時(10天)后，實驗兔按編號順序進行腹腔麻醉，左右兩耳均切取活體標本。切取活體標本約5.5cm×1cm，即取以穿刺血管為中線兩側各寬0.5cm，共寬1 cm，以穿刺點為標記遠心端切取1.0 cm，近心端切取4.5 cm，共長約5.5 cm的矩型標本，立即放入Bouin氏固定液中固定。

1.6形態學觀察及凋亡細胞檢測3組標本均取材后立即放入Bouin氏固定液，固定24小時后常規脫水透明，石蠟包埋，從穿刺點端連續切片10張，厚度5～7 μm，脫蠟至水。做如下檢測：1)HE染色法：每份標本10張切片中，從第1張開始間隔取5張切片進行HE染色，光鏡觀察血管內皮細胞的形態改變，獲得有價值切片258張，其中空白對照組90張，硫酸鎂組82張復方三七散組86張。2) TUNEL法：對每份標本剩余5張切片采用TdT介導的dUTP末端標記法檢測，實驗步驟按說明書進行，獲得有價值切片262張，其中空白對照組92張，硫酸鎂組84張，復方三七散組86張。

1.7結果判斷HE染色：光鏡觀察耳緣靜脈內皮連續光滑，血管周圍結構清晰，未見典型凋亡細胞為陰性；血管內皮結構模糊，細胞有不同程度的圍繞核膜的染色質濃縮，胞質空泡樣改變和細胞皺縮，胞膜出現“皰樣結構”為陽性［1］；TUNEL法［2］：顯示亮綠色熒光即為凋亡細胞，熒光顯微鏡下觀察分為4級：無凋亡(-)：未見或≤3個亮綠色熒光點；輕度(+)：3～7個亮綠色熒光點；中度(++)：8～15個亮綠色熒光點；重度(+++)：＞15個亮綠色熒光點［3］。

1.8統計學方法實驗數據使用SPSS 13.0統計軟件進行處理，3組獨立樣本計數資料比較采用行乘列表的χ2檢驗，若有統計學差異則采用卡方分割進行兩兩比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

實驗結束后采用HE染色切片3組間血管內皮細胞凋亡程度比較顯示：3組間細胞凋亡陽性率差異有統計學意義(χ2=203.190，P=0.0001)，見表1。3組間兩兩比較顯示：硫酸鎂組與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)；復方三七散組與空白對照組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)；復方三七散組與硫酸鎂組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表1　采用HE染色3組間血管內皮細胞凋亡程度分布構成比

表2　3組間血管內皮細胞凋亡情況的比較

采用TUNEL法切片3組間血管內皮細胞凋亡程度比較顯示：3組間細胞凋亡陽性率差異有統計學意義(χ2=114.829，P=0.000 1)，見表3。3組間兩兩比較顯示：硫酸鎂組與空白對照組對比差異有統計學意義(P＜0.05)；復方三七散組與空白對照組對比差異有統計學意義(P＜0.05)；復方三七散組與硫酸鎂組對比差異有統計學意義(P＜0.05)。見表4。

表3　TUNEL法3組間血管內皮細胞凋亡程度構成比　例

表4　采用TUNEL法3組間血管內皮細胞凋亡情況的比較

3　討論

血管內皮細胞是血管內壁表面覆蓋的一層細胞，屬單層扁平細胞，對血管壁起到屏障作用。同時，內皮細胞還有傳遞信息、調節分泌等多種重要功能。在生理情況下，血管內皮細胞凋亡和再生同時進行，凋亡和再生的細胞數量保持一個平衡的穩定狀態，從而維持血管正常的生理功能［4］。病理過程中，有很多原因可以導致血管內皮細胞凋亡。靜脈留置針對穿刺點的血管內皮細胞可產生機械性刺激，從而導致血管內皮細胞的外形變形、細胞簇集、細胞內骨架重排，甚至凋亡。留置針對血管的介入，可部分阻塞血管，致使血液流動緩慢，改變血流切變，也可引起血管內皮細胞脫落。另外，留置針穿刺時切割穿刺點血管，損傷了血管內皮的完整性，再加上靜脈留置針對血管壁的刺激，局部可引起炎癥反應。炎癥反應致使氧自由基增多，血液中活性氧含量增多，出現氧應激狀態，導致細胞膜脂質過氧化，改變細胞內酶活性的變化從而誘導血管內皮細胞凋亡［5］。此外，靜脈留置針可使局部血流變慢，產生血栓，血栓可促進局部細胞凋亡［6］，而細胞凋亡又可加速血栓的形成［7］，這是導致細胞凋亡的又一機理。綜上所述，靜脈留置針所致靜脈炎是細胞凋亡的原因，如能積極地預防靜脈炎的發生必將有效地保護血管內皮細胞免于或減少凋亡。

從實驗可見采用HE染色法，3組間血管內皮細胞凋亡情況對比顯示復方三七散組細胞凋亡均少于其他2組(P＜0.05)。采用TUNEL法3組間血管內皮細胞凋亡情況與采用HE染色法一致。這充分說明，復方三七散外敷具有防治靜脈留置針所致靜脈炎而導致的血管內皮細胞凋亡的作用。而且，其防治效果好于硫酸鎂溶液濕敷。

中醫認為靜脈炎的發生病因病機常為濕熱內蘊，氣滯血瘀。本實驗所用中藥自擬方劑復方三七散針對此病機而設，由三七、大黃、葛根、遠志、冰片組成。這些中藥是臨床治療相關疾病的常用藥物。三七活血化瘀；大黃清熱解毒，遠志消腫散結；葛根現代藥理研究有擴張局部毛細血管，增加局部血液循環的作用；冰片有增強藥物滲透皮膚的作用。5藥合用，共同起到防治靜脈炎的作用，臨床療效較好。通過本次實驗，再次驗證：復方三七散外敷可起到防治靜脈留置針所致靜脈炎的作用，進而保護靜脈血管內皮細胞減少凋亡，其效果確切，值得同道借鑒和推廣。

參考文獻

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作者簡介：張喜平(1977—)，女，主管護師。研究方向：中醫護理。

*基金項目：滄州市2013年科學技術研究與發展指導計劃項目（編號131302081）。

收稿日期：2015-07-27

［中圖分類號］R285.6

［文獻標識碼］A

［文章編號］1004-6852(2016)02-0016-03