綠色熒光蛋白基因轉染示蹤比格犬體內(nèi)骨髓間充質干細胞分化

張海峰　杜子婧　趙丹陽　韓修國　韓冬

200011，　　上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院整復外科(張海峰、杜子婧、趙丹陽、韓冬)；200011，　　上海市骨科內(nèi)植物重點實驗室(張海峰、韓修國)

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·實驗研究·

綠色熒光蛋白基因轉染示蹤比格犬體內(nèi)骨髓間充質干細胞分化

張海峰杜子婧趙丹陽韓修國韓冬

200011，上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院整復外科(張海峰、杜子婧、趙丹陽、韓冬)；200011，上海市骨科內(nèi)植物重點實驗室(張海峰、韓修國)

【摘要】目的運用綠色熒光蛋白(GFP)標記技術，觀察骨組織工程中種子細胞的變化和轉歸。方法使用重組腺病毒(Ad-GFP)將GFP基因轉染比格犬骨髓間充質干細胞(BMSC)，倒置相差顯微鏡下觀察BMSC形態(tài)、堿性磷酸酶(ALP)和茜素紅染色情況；熒光顯微鏡下觀察細胞GFP表達狀況。待細胞標記成功后將其離心，接種于β-磷酸三鈣(β-TCP)上，回植于比格犬脛骨內(nèi)側骨膜囊內(nèi)，構建組織工程骨記為A組；單純β-TCP植入對稱脛骨內(nèi)側骨膜囊記為B組；單純β-TCP植入皮下記為C組。術后2周取材，分別行組織學觀察、免疫組化檢測，同時激光共聚焦顯微鏡下觀察GFP表達情況。結果體外成骨誘導實驗顯示，ALP染色以及茜素紅染色陽性。組織學觀察可見，A組新生骨組織以及新生血管均較B組明顯，C組未見新生骨組織。免疫組化檢測顯示，A組Ⅰ型膠原、血小板內(nèi)皮細胞黏附分子CD31染色陽性；B組Ⅰ型膠原、CD31染色部分陽性；C組未見陽性表達。免疫組化半定量檢測顯示，A、B兩組Ⅰ型膠原、CD31定量有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。激光共聚焦顯微鏡觀察結果顯示，A組新生骨組織內(nèi)可見GFP表達，B、C組未見GFP標記細胞。結論BMSC是組織工程骨早期形成的重要來源，但周圍成骨細胞并非新生骨組織主要來源;移植BMSC于骨膜下可促進新生血管形成。

【關鍵詞】骨組織工程；綠色熒光蛋白；……