陽和膠囊對去勢后骨質疏松癥大鼠血清B G P、E2、L H、F S H 表達的實驗研究※

馬琳 項顆 孫莉

（吉林省中醫藥科學院老年病科，長春13 0 0 2 1）

陽和膠囊對去勢后骨質疏松癥大鼠血清B G P、E2、L H、F S H 表達的實驗研究※

馬琳 項顆 孫莉*

（吉林省中醫藥科學院老年病科，長春13 0 0 2 1）

目的通過動物實驗對院內制劑陽和膠囊的藥效作用作出正確評價。方法對去勢模型大鼠分別以3.2 4、1.6 2、0.8 1 g藥粉/k g體重劑量灌胃給藥15周后，分別測定血清中骨鈣素（B G P）、雌激素（E2）、促卵泡激素（F S H）、促黃體生成素（L H）含量及脛骨、股骨骨密度。結果院內制劑陽和膠囊對血清中B G P、E2、L H、F S H含量及脛骨和股骨骨密度均有一定的提升作用，其中骨鈣素及促黃體生成素含量與模型組經統計學比較差異顯著。結論院內制劑陽和膠囊具有提升血清中B G P、E2、L H、F S H含量及改善骨密度作用。

去勢；大鼠；骨鈣素；雌激素；促卵泡激素；促黃體生成素；骨質疏松證；骨瘺

骨質疏松癥是世界最流行的人類疾病之一［1］，全世界患病總人數超過2億，發病率位居常見病、多發病的第6位［2］。我國老年人口居于世界首位，現有骨質疏松癥患者9000萬，占總人口的7.1%，預計到2050年將增加到2.2億，那時全世界一半以上的骨質疏松性骨折將發生在亞洲，而絕大多數是在我國［3］［4］。隨著我國老年人口的增加，骨質疏松癥發病率處于上升趨勢，給社會帶來巨大危害，已被WHO列入三大老年病之一。積極開展高效的預防與治療骨質疏松癥的中醫藥研究對于降低老年人群骨折率、提升老年人生活質量等都具有重要意義。我科室多年來在中醫藥防治老年骨質疏松癥方面做了大量工作，取得了一些成績。我們采用院內制劑陽和膠囊治療該病，臨床證實療效可靠，可明顯改善患者臨床癥狀。為了進一步探討陽和膠囊防治老年骨質疏松癥的作用機制，我們近三年又進行了陽和膠囊對去勢后骨質疏松癥大鼠血清BGP、E2、LH、FSH表達的實驗研究，為新藥開發研究提供依據，為探索骨質疏松癥新的防治技術奠定基礎。結果報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物wistar種大白鼠（由延邊大學實驗動物中心提供）

1.2 實驗試劑陽和膠囊（由吉林省中醫藥科學院制劑室提供），膠囊內容物棕色粉末，沒有生藥量標示，0.3 g藥粉/粒。實驗時用生理鹽水配至所需濃度。

陽性藥選用（1）戊酸雌二醇片（Bayer），淡黃色片，1 mg/片，批號226B。（2）仙靈骨葆膠囊，貴州同濟堂制藥有限公司，膠囊內容物為棕黃色藥粉，0.5 g藥粉/粒，批號1303125。骨鈣素、雌激素、促卵泡激素、促黃體生成素酶聯免疫試劑盒由上海常斤生物科技有限公司提供。

1.3 實驗儀器DNM-9602酶標儀：北京普朗新技術有限公司；洗板機：芬蘭（Thermo Labsystems）；TG16W微量高速離心機；GNP-9080隔水式恒溫培養箱；美國HOLOGIC雙能X線骨密度儀。

2 過程和方法

2.1 模型制造取雌性大鼠50只，以2%戊巴比妥鈉（40mg/kg）麻醉，腹位固定，軀干下1/3處仔細消毒清潔皮膚，離脊柱兩側各1.5 cm處作縱向切口（1 cm），分離肌肉層，可見淡黃色脂肪團，剝離脂肪團找出卵巢，結扎與子宮角連接處，剪掉卵巢及多余絲線，將組織推回腹腔，縫合切口，局部清潔消毒，術后常規飼養，正常飲水、攝食。

2.2 給藥方法術后三日將大鼠分組，假手術組（進行手術過程，不切除卵巢）做正常對照，其余鼠隨機分為六組，模型對照組、雌二醇對照組、仙靈骨葆對照組、陽和膠囊高中低三個劑量組，陽性對照組和陽和膠囊組每日給藥一次，連續15周，假手術組和模型對照組每日給予等體積水。

2.3 觀測指標末次給藥后1 h，麻醉動物，腹主動脈采血，分離血清，分別按酶聯免疫試劑盒中所要求操作方法做標準曲線，測定血清中BGP、E2、LH、FSH含量，并提取大鼠脛骨和股骨，分別測定骨密度。

3 結果

見表1。

表1 各組B G P、E2、F S H、L H及骨密度值比較表（±s）

表1 各組B G P、E2、F S H、L H及骨密度值比較表（±s）

注：給藥組與模型組比較*P＜0.0 5**P＜0.0 1***P＜0.0 0 1，假手術組與模型組比較△P＜0.0 5△△P＜0.0 1

組別給藥劑量（g藥粉/ k g）動物數B G P（p g / m l；x ± s D）E2（p g / m l；x ± s D）F S H（n g / m l；x ± s D）L H（n g / m l；x ± s D）B M D（g / c m2）脛骨股骨假手術組模型對照組戊酸雌二醇片（12 μ g / k g）仙靈骨葆膠囊陽和膠囊組1陽和膠囊組2陽和膠囊組3 --12 μ g / k g 2 . 163 . 2 4 1 . 6 2 0 . 8 18 8 8 8 8 8 8 2 0 7 . 0 6 ± 2 1 . 7 9△△17 2 . 3 9 8 ± 2 1 . 6 6 19 6 . 16 1 ± 2 3 . 0 4*19 9 . 8 6 8 ± 3 2 . 19*19 5 . 8 0 6 ± 17 . 6 3*1 77 . 5 8 7 ± 3 2 . 15 18 3 . 3 5 9 ± 3 2 . 3 12 14 . 7 6 3 ± 2 6 . 8 1△18 5 . 5 12 ± 2 3 . 9 5 2 0 6 . 2 9 1 ± 18 . 7 6*2 0 3 . 13 9 ± 2 9 . 5 2 2 0 2 . 2 4 5 ± 3 0 . 2 3 19 3 . 2 0 1 ± 3 6 . 7 11 9 0 . 9 5 6 ± 3 6 . 15 4 3 . 2 9 4 ± 5 . 8 4△△3 1 . 17 6 ± 7 . 8 6 3 7 . 3 3 8 ± 7 . 0 5 3 6 . 9 2 5 ± 3 . 7 3 3 6 . 2 13 ± 5 . 9 5 3 1 . 8 2 1 ± 6 . 5 6 3 3 . 3 0 1 ± 6 . 5 9 7 . 4 0 7 ± 0 . 9 2△6 . 11 1 ± 1 . 0 17 . 4 9 3 ± 1 . 7 1*7 . 10 0 ± 0 . 9 4*7 . 3 2 2 ± 1 . 2 6*6 . 6 5 1 ± 1 . 2 0 6 . 5 4 9 ± 1 . 3 9 0 . 2 3 3 ± 0 . 0 4 10 . 2 0 8 ± 0 . 0 3 2 0 . 2 2 7 ± 0 . 0 14 0 . 2 2 2 ± 0 . 0 3 2 0 . 2 18 ± 0 . 0 3 5*0 . 2 13 ± 0 . 0 2 2 0 . 2 11 ± 0 . 0 2 7 0 . 2 5 2 ± 0 . 0 4 9 0 . 2 17 ± 0 . 0 3 4 0 . 2 4 6 ± 0 . 0 2 8 0 . 2 4 2 ± 0 . 0 16 0 . 2 3 4 ± 0 . 0 3 6*0 . 2 3 2 ± 0 . 0 5 2 0 . 2 2 2 ± 0 . 0 13

4 結論

院內制劑陽和膠囊，去勢模型大鼠以3.24、1.62、0.81 g藥粉/kg體重劑量灌胃給藥，對血清中BGP、E2、LH、FSH含量及脛骨和股骨骨密度均有一定的提升作用，其中骨鈣素及促黃體生成素含量影響與模型組經統計學比較差異顯著。

5 討論

骨質疏松癥（OP）是中老年人群中的常見、多發病，臨床以腰背痛、骨關節痛、骨折及駝背和身高縮短等位主要表現。據統計［5］，60歲以上的老年人發病率最高，50歲以上的女性年齡每增加10歲，骨質疏松癥的發病率增加10%。該病不僅減低了患者本人的生存質量，而且給家庭和社會帶來沉重負擔。

目前，中西醫在治療骨質疏松癥方面的藥物很多，但尚無一種成熟有效的治療方案。西藥主要分兩大類：一類是包括降鈣素、雙磷酸鹽、維生素D、鈣劑等骨吸收的抑制劑；另一類是促進骨形成的藥物，包括氟化物，甲狀旁腺激素（PTH）及PTH片［6］。西藥治療副作用較多，需對其各項理化指標進行定期監測，以確保臨床藥物治療的安全性［7］。中醫藥在本病的治療中以其療效確切、副作用少、價格低廉等特點凸顯出巨大的優勢。骨質疏松癥在中醫學中屬于“骨痿”、“骨瘦”、“骨枯”、“骨極”、“骨肉疏薄”等疾病的范疇，腎主骨生髓，腎中精氣的盛衰決定著骨骼的強壯與衰弱，腎虛是骨痿發生的根本。《素問經注節解·瘦論》云：“腎主骨，骨借髓以強，身憑足以任。腎虧則髓虛，髓虛則骨枯而足無力以任身。”《素問·痿論》亦云［8］：“腎乃水臟，水不勝火，則骨枯而髓虛，發為骨痿”。因此，正是體現治病必求其本的原則，《素問·痿論》提出了“骨痿者，補腎以治之”。我院院內制劑陽和膠囊由熟地、補骨脂、炮姜、牛膝、枳殼、肉桂、菟絲子、白芥子等藥物組成，全方從溫補腎陽入手，溫陽與補血并用，滋補與辛散同施，使溫而不燥，滋而不膩，扶正祛邪，標本同治，共奏溫經通陽，補腎壯骨之功。本研究通過動物實驗觀察了院內制劑陽和膠囊對去勢大鼠的骨密度及BGP、E2、LH、FSH水平的影響，探討了陽和膠囊治療骨質疏松癥的作用機制。研究結果表明：我院院內制劑陽和膠囊可以不同程度地改善骨質疏松模型大鼠的血清BGP、E2、LH、FSH水平，提高骨密度，其中骨鈣素及促黃體生成素含量與模型組經統計學比較差異顯著。中醫藥治療骨質疏松癥的特色在于全身調整，中藥對骨質疏松癥的作用是通過多途徑、多層次、多靶點的綜合藥理作用而實現的，既從根本著手，又兼顧骨質疏松所產生的表象，如疼痛、腰膝酸軟等，標本同治，通過對機體全身性的調節作用，達到糾正機體激素平衡和負鈣平衡作用的功效。有現代研究表明［9］，腎虛時免疫功能下降，內分泌系統奈亂并有微量元素的改變，下丘腦-垂體-性腺軸功能的減退，性激素水平下降，進而引起成骨功能下降，使單位體積的骨組織含量減少，從而導致骨質疏松癥的發生。本研究通過動物實驗證實了院內制劑陽和膠囊通過調節微量元素，改善骨代謝，從而對骨質疏松癥起到治療作用。然而，骨的代謝是一個復雜的過程，由多種因素參與其中，所以確切作用機制的闡明尚有待進一步研究。

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［9］寇美靜，鄒小娟.腎虛與骨質疏松癥［J］.湖北中醫學曉學報，2006，8（4）：6 1-6 2.

MA Lin； XIANG Ke； Sun Li
（Department of Geriatrics； Jilin Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine； Changcun 130021； China）

Objective Through animal eXPeriments，to make a correct evaluation of effect on hosPital PreParation Yanghe caPsule. Methods The ovariectomized model rats were 3.24，1.62 and 0.81g Powder/kg weight dose gavage for 15 weeks，then serum osteocalcin（BGP），estrogen（E2），Promoting luteinizing hormone and follicle stimulating hormone（FSH），luteinizing hormone（LH）and the content of tibial and femoral bone mineral density were measured seParately.Results HosPital PreParation Yanghe caPsule on serum BGP，E2，LH，FSH and the content of tibia and femur bone density had a certain Promotion effect.The effect of osteocalcin and luteinizing hormone content and model grouP had statistically significant difference.Conclusion HosPital PreParation Yanghe caPsule can Promote serum BGP，E2，LH and FSH content，and imProve bone density.

ovariectomized；rat；osteocalcin；estrogen；follicle stimulating hormone；luteinizing hormone；osteoPorosis；atroPhic debility of bones

10.3 9 6 9/j.issn.1672-2 77 9.2016.11.0 6 5

1672-2 77 9（2016）-11-0 14 4-0 3

：楊杰本文校對：孫莉

2016-0 4-0 8）

吉林省科技廳自然科學基金資助項目（N o：2 0 13 0 10 11 2 9 J C）

＊通訊作者：Xiangke1961@163.com