胃竇黏膜腸上皮化生腺體中LAPTM4B蛋白的表達(dá)及其意義

馬廣貞　滕玲玲　劉魯英

【摘 要】本研究通過免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)了80例胃竇黏膜中LAPTM4B蛋白表達(dá)情況，并結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察判斷腸上皮化生的類型及程度。80例標(biāo)本中28例檢測(cè)到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達(dá)（35%），52例未檢測(cè)到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達(dá)（65%）。LAPTM4B蛋白在不同類型、不同程度腸上皮化生中的表達(dá)有顯著性差異（P<0.01）。LAPTM4B基因的異常表達(dá)可能在胃癌發(fā)生的早期階段發(fā)揮重要作用。

【關(guān)鍵詞】胃黏膜；腸上皮化生；LAPTM4B

【Abstract】We detected the LAPTM4B protein expression by immunohistochemical staining in 80 cases of gastric antrum mucosa which were diagnosed as chronic gastritis with intestinal metaplasia. Combining with morphological observation， we determined the type and degree of intestinal metaplasia. We detected LAPTM4B protein expression in intestinal metaplasia glands in 28 cases of specimens （35%）. The expression of LAPTM4B protein in different types， different degrees of intestinal metaplasia had significant difference（P<0.01）. The increased expression of LAPTM4B indicated that LAPTM4B play an important role in the early stages of gastric carcinogenesis.

【Key words】Gastric mucosa； Intestinal metaplasia； LAPTM4B

腸上皮化生是胃黏膜的重要病理改變，多發(fā)生在慢性萎縮性胃炎基礎(chǔ)上，有研究顯示，胃黏膜發(fā)生腸型分化與細(xì)胞表達(dá)同源異形盒基因CDX2 有關(guān)。LAPTM4B基因是近年來發(fā)現(xiàn)的與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切的基因[1]。本研究通過檢測(cè)胃竇黏膜腸上皮化生的類型、程度以及LAPTM4B蛋白表達(dá)情況及其相互關(guān)系，探討胃黏膜腸上皮化生的發(fā)生機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 病例資料

收集聊城市第二人民醫(yī)院2010年1月至2013年6月存檔的胃鏡活檢標(biāo)本80例。所有標(biāo)本均自胃竇部取材，經(jīng)病理診斷為慢性萎縮性胃炎伴腸上皮化生，其中男性51例，女性29例，中位年齡59 歲（38～79歲）。全部活檢標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm厚度切片備用。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)染色采用PowerVision二步法。4μm厚的石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精水化，3%雙氧水阻斷內(nèi)源性過氧化物酶（室溫孵育10分鐘），組織抗原修復(fù)后，加一抗4℃過夜。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的通用型二抗（PV-6000，Dako），DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片后顯微鏡下觀察。

1.3 試劑

LAPTM4B多克隆抗體（1：50稀釋），由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部周柔麗教授惠贈(zèng)，sulfo-Lewisa單克隆抗體（克隆號(hào)F2，1：50稀釋）購自Cell Sciences公司， 免疫組織化學(xué)染色試劑盒購自Dako公司。

1.4 結(jié)果判定

LAPTM4B免疫組織化學(xué)染色定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，依據(jù)染色強(qiáng)度和染色面積共同評(píng)分。（1）根據(jù)染色的范圍分為3級(jí)，0分：不顯色或<10%，1分：11～50%，2分：>50%；（2）根據(jù)染色強(qiáng)度分為3級(jí)，無染色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，然后把染色范圍和染色強(qiáng)度分值相加，得分為0或1者為陰性，得分2以上者為陽性。sulfo-Lewisa 免疫組織化學(xué)染色定位于胞質(zhì)，在胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為染色陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。樣本率之間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05 認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃竇黏膜腸上皮化生的類型

按照sulfo-Lewisa染色結(jié)果與組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)對(duì)腸上皮化生進(jìn)行分類：Ⅰ型腸化：腸化腺體不表達(dá)sulfo-Lewisa；Ⅱ型腸化：僅深部腸化的腺體表達(dá)sulfo-Lewisa；Ⅲ型腸化：sulfo-Lewisa在深部及表面的腸化腺體同時(shí)表達(dá)[2]。本研究中，80 例標(biāo)本根據(jù)染色結(jié)果分為I 型腸化16 例（20.0%），Ⅱ型腸化37 例（46.2%），Ⅲ型腸化27 例（33.8%）。

2.2 胃竇粘膜腸上皮化生的程度

胃竇粘膜腸上皮化生的嚴(yán)重程度根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)判定。選擇3～5個(gè)視野（或整個(gè)視野，×400），輕度腸化：胃黏膜發(fā)生腸化區(qū)域占腺體和表面上皮總面積的1/3以下；中度腸化：1/3～2/3之間；重度腸化：2/3以上至全層[3]。80例胃鏡標(biāo)本包括輕度腸化10 例（12.5%）、中度腸化44例（55%）和重度腸化26例（32.5%）。

2.3 胃竇粘膜LAPTM4B蛋白表達(dá)情況

80例標(biāo)本中28例檢測(cè)到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達(dá)（35%），52例未檢測(cè)到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達(dá)（65%）。

2.4 胃竇粘膜LAPTM4B蛋白表達(dá)與腸上皮化生嚴(yán)重程度、類型之間的關(guān)系

LAPTM4B蛋白在不同類型、不同程度腸上皮化生中的表達(dá)有顯著性差異，其中LAPTM4B蛋白在發(fā)生Ⅲ型腸化的腺體中表達(dá)顯著高于I型、Ⅱ型腸上皮化生，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.018）；隨著腸上皮化生程度的加重，LAPTM4B蛋白表達(dá)也顯著增加（P=0.045）（表1）。

表1 胃竇粘膜LAPTM4B表達(dá)與腸上皮化生的類型、程度的關(guān)系

3 討論

Correa等提出的腸型胃癌形成機(jī)制己被大家普遍接受，即正常胃黏膜經(jīng)過慢性萎縮性胃炎及腸上皮化生，逐步進(jìn)展到異型增生，最終導(dǎo)致腸型胃癌發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)多種基因在胃癌前病變的早期階段已經(jīng)發(fā)揮作用，但是胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚未明確。LAPTM4B基因是最近發(fā)現(xiàn)的與多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的癌基因。在大多數(shù)的腫瘤中檢測(cè)到LAPTM4B蛋白表達(dá)升高，包括肝癌[4]、胃癌、結(jié)腸癌[5]及乳腺癌[6]等。本研究通過免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)在腸上皮化生腺體中35%檢測(cè)到LAPTM4B蛋白表達(dá)（28/80），LAPTM4B蛋白在不同類型、不同程度腸上皮化生中的表達(dá)有顯著性差異（P<0.05）。LAPTM4B蛋白在發(fā)生Ⅲ型腸化的腺體中表達(dá)顯著高于I型、Ⅱ型腸上皮化生，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.018）；隨著腸上皮化生程度的加重，LAPTM4B蛋白表達(dá)也顯著增加（P=0.045）。本研究結(jié)果提示LAPTM4B蛋白表達(dá)升高可能在胃癌發(fā)生過程中較早發(fā)揮作用，但是本研究?jī)H從蛋白表達(dá)的水平反映了LAPTM4B與胃癌發(fā)生的關(guān)系，其確切作用機(jī)制尚不十分明確，不同類型腸化黏膜中LAPTM4B表達(dá)變化的意義有待于進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

[1]劉軍建，張杰，周柔麗，等.用熒光差異顯示法分離新的肝細(xì)胞癌相關(guān)基因[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，32（5）：411-414.

[2]Bodger K， Campbell F， Rhodes J M. Detection of sulfated glycoproteins in intestinal metaplasia： a comparison of traditional mucin staining with immunohistochemistry for the sulfo-Lewis（a） carbohydrate epitope[J]. J Clin Pathol， 2003， 56（9）：703-8.

[3]Rugge M， Correa P， Dixon M F， et al. Gastric dysplasia： the padova international classification[J]. Am J Surg Pathol， 2000， 24（2）：167-76.

[4]Yang H， Zhai G， Ji X， et al. LAPTM4B allele*2 is a marker of poor prognosis following hepatic tumor resection for hepatocellular carcinoma[J]. PLoS One. 2012；7（4）：e34984.

[5]Kang Y， Yin M， Jiang W， et al. Overexpression of LAPTM4B-35 is associated with poor prognosis in colorectal carcinoma[J]. Am J Surg. 2012；204（5）：677-83.

[6]Li X， Kong X， Chen X， et al. LAPTM4B allele*2 is associated with breast cancer susceptibility and prognosis[J]. PLoS One. 2012；7（9）：e44916.

[責(zé)任編輯：湯靜]