不同加工方法對杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響

劉匯麗　魏學軍　何鑫

黔南民族醫學高等專科學校藥學系，貴州　都勻　558000

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不同加工方法對杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響

劉匯麗魏學軍*何鑫

黔南民族醫學高等專科學校藥學系，貴州都勻558000

【摘要】目的：比較不同加工方法對杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響，為杜仲的產地加工提供科學依據。方法：采用高效液相色譜法測定桃葉珊瑚苷量，色譜條件：Diamonsil C(18)色譜柱(250 mm × 4.6mm，5 μm)，流動相甲醇-水溶液(10∶90)，檢測波長203nm，柱溫25℃，流速1.0mL/min，進樣量10μL。結果：不同加工方法杜仲桃葉珊瑚苷含量有差異。同一干燥方法，未發汗杜仲桃葉珊瑚苷量高于發汗杜仲；同一性狀，烘干、曬干、陰干三者間桃葉珊瑚苷量具顯著差異，以烘干最高，曬干次之，陰干最低；不同性狀，板片狀以100℃烘干、寬絲狀以 60℃烘干含量最高。結論：不同加工方法對杜仲桃葉珊瑚苷含量影響顯著，臨床應用如以桃葉珊瑚苷的生物活性為主，結合實際生產，建議杜仲采用趁鮮切寬絲，不發汗，60℃烘干的產地加工方法。

【關鍵詞】杜仲；桃葉珊瑚苷；高效液相色譜法；產地加工

杜仲為杜仲科植物EucommiaulmoidesOliv.的干燥樹皮，廣泛分布于我國西南部和長江中上游地區，是我國的特產經濟藥材，具有補肝腎、強筋骨、安胎的功效，臨床多用于腎虛腰痛、筋骨無力、妊娠漏血、胎動不安、高血壓癥等[1]。貴州產杜仲因其資源豐富，療效顯著，被業內公認為杜仲的地道產地，與天麻、靈芝組成的“貴州三寶”，是饋贈訪友的必備之品，具有極高的藥用和經濟價值。產地加工作為控制藥材品質的關鍵技術，杜仲雖有《本草經集注》“采皮陰干”、去粗皮曬干[1]和去粗皮“發汗”后曬干[2]的記載，但標準并不統一，質控指標單一。現有加工方法的研究多以降壓活性成分的松脂醇二葡萄糖苷作為考察指標[3-4]，對其他活性成分和藥理作用的影響未見報道。

杜仲的生物活性成分有木質素類、環烯醚萜類、黃酮類、多糖類及苯丙素類等，其所含桃葉珊瑚苷具有抗炎抗病毒、降血脂、抗氧化、抗疲勞、降壓等廣泛的藥理作用[5-7]，是杜仲的重要活性成分之一。研究以桃葉珊瑚苷為評價指標，考察不同性狀、干燥方法及是否“發汗”對桃葉珊瑚苷含量的影響來探討杜仲的產地加工方法，以期為全面評價和建立杜仲加工方法的質量標準體系提供科學依據。

1儀器與材料

1.1儀器LC-10ATvp高效液相色譜儀(日本島津公司)；AS10200A型超聲波清洗機(杭州匯爾公司)；IKA-RV10型旋轉蒸發儀(德國IKA公司)；2.0R型低速離心機(德國HERAEUS)；DHG-9240A真空干燥箱(上海金山公司)；AE240型電子天平(瑞士METTLER)。

1.2材料加工所用杜仲新鮮樹皮(批號：150520)購自當地藥農杜仲種植園，樹齡均15年以上，經本校王傳明副教授鑒定為杜仲科植物EucommiaulmoidesOliv.的干燥樹皮。桃葉珊瑚苷對照品(批號：111761-200601，中國藥品生物制品檢定所)，水為重蒸餾水，其他試劑均為AR級。

2方法與結果

2.1樣品的制備將杜仲新鮮樹皮刮去粗皮，加工制成板片和寬絲(長約 5cm，寬約 1cm)兩種性狀。分別將兩種性狀藥材按發汗和未發汗進行處理后干燥，得樣品A1~A10(見表1)，各樣品含發汗和未發汗兩種二級樣品，二級樣品均制備 3批次備用。

2.2桃葉珊瑚苷的測定

2.2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動相：甲醇-水溶液(10：90)，檢測波長：203 nm，柱溫：25℃，流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL。色譜圖見圖 1。2.2.2供試品溶液的制備[8]分別稱取各樣品不同批次杜仲藥材約2 g，剪成碎片后揉成絮狀，精密稱取0.5 g置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 ml，超聲提取60 min，過濾，水浴揮干甲醇，加流動相溶解，微孔濾膜濾過，定容至10 ml容量瓶中，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.3對照品溶液的制備精密稱取桃葉珊瑚苷對照品12.0 mg，加流動相定容至10ml量瓶中，搖勻后即得對照品溶液。

2.2.4標準曲線的制備精密取1、5、10、15、20 μl對照品溶液按“2.2.1”項色譜條件進行測定，，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標作標準曲線，得線性方程為：Y= 111.610 1X- 37.8909，r= 0.9999。試驗結果表明對照品在0.0012 ~ 0.0240 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.5精密度試驗取桃葉珊瑚苷對照品溶液5 μl，按“2.2.1”項下色譜條件連續測定5次，桃葉珊瑚苷峰面積的RSD值為1.37%。

2.2.6穩定性試驗取桃葉珊瑚苷對照品溶液5 μl，按“2.2.1”項下色譜條件，分別在 0、5、10、20、30、60 min測定，桃葉珊瑚苷峰面積的RSD值為2.78%。

2.2.7重復性試驗取 A1陰干未發汗第 1批次樣品5份，按“2.2.2”項制備供試品溶液。取供試品溶液10 μl，按“2.2.1”項下色譜條件測定，桃葉珊瑚苷峰面積的RSD值為3.43%。

2.2.8加樣回收率試驗取已知含桃葉珊瑚苷量的A1陰干未發汗第1批次樣品5份，加入適量桃葉珊瑚苷對照品，按“2.2.2”項制備供試品溶液。取供試品溶液10 μl，按“2.2.1”項下色譜條件測定，桃葉珊瑚苷平均回收率為 98.08%，RSD值為 3.14%。

2.2.9含量測定精密移取各樣品不同批次提取所得供試品溶液10 μl，按“2.2.1”項下色譜條件操作并計算桃葉珊瑚苷量質量分數，測定值為 3批次的均值。結果見表 1。

表1　不同加工方法杜仲桃葉珊瑚苷含量比較　(n = ± s)

2.3結果分析

2.3.1杜仲“發汗”與“未發汗”對桃葉珊瑚苷含量的影響結果表明，兩種性狀藥材采用同一干燥方法處理，“發汗”杜仲與“未發汗”杜仲的桃葉珊瑚苷量具有顯著差異，“未發汗”高于“發汗”。究其原因，可能與植物細胞中酶的生物活性有關。同一干燥方法，“未發汗”藥材在初期均較“發汗”藥材水分的氣化速率快，隨著水分的快速散失，導致苷的分解酶生物活性部分失活，減少了苷類成分的分解，故桃葉珊瑚苷量較高；“發汗”藥材，在覆蓋物下保持數日，溫度有所升高雖有利于內部水分向外部的溢出，但水分蒸發緩慢或未蒸發，對分解酶的活性影響不大，苷類成分的分解依然保持，因而桃葉珊瑚苷量較低。

2.3.2干燥方法對“未發汗”杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響由表 1結果可知，兩種性狀藥材均以陰干含量最低，桃葉珊瑚苷含量整體水平依次為：烘干>曬干>陰干。分析結果表明，同一性狀藥材采用不同干燥方法處理，烘干、曬干、陰干三者間桃葉珊瑚苷量具顯著差異，原因可能與溫度對苷分解酶的破壞有關。在一定的溫度范圍內，隨著溫度的升高，可使分解酶失活以減少苷的分解，同時對活性成分結構破壞較少。

2.3.3藥材性狀對杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響兩種性狀藥材，板片狀以100℃烘干、寬絲狀以60℃烘干含量最高，分析結果表明，兩種加工方法桃葉珊瑚苷量無顯著差異。板片狀100℃烘干，一方面利于分解酶的破壞而減少苷類成分的分解，一方面由于直面高溫的暴露面積較小(相對于寬絲狀)，因而對活性成分結構的破壞較少。寬絲狀60℃烘干，可能既達到了殺酶保苷的目的，也減少了高溫對活性成分結構破壞的效果。

3討論

合理產地加工，可以保證藥材品質，增強藥物療效。2010版藥典記載杜仲的加工方法是去粗皮，發汗后曬干。王麗楠等[3]研究表明，就降壓作用而言，杜仲采用發汗的加工方法是可行的。劉圣金等[4]研究發現，杜仲發汗后對不同活性成分的含量有影響，可提高醇溶性、水溶性成分含量，而松脂醇二葡萄糖苷含量降低。由于中藥活性成分較多，各活性成分的藥理作用差異較大，臨床治療癥候不同，如單一采用藥典法進行加工，可能會影響不同活性成分含量，難以發揮各活性成分應有的療效，因而有必要針對不同活性成分開展加工方法研究。

本次研究結果顯示，不同性狀、干燥方法及是否發汗對杜仲桃葉珊瑚苷含量有影響。桃葉珊瑚苷含量未發汗杜仲高于發汗杜仲，表明如采用藥典法進行發汗加工處理，則桃葉珊瑚苷含量較低。不同干燥方法，以烘干含量整體水平高，曬干次之，陰干最低，故不宜采用《本草經集注》“采皮陰干”的加工方法。兩種性狀，板片狀以 100℃烘干、寬絲狀以 60℃烘干含量最高，兩種加工方法無顯著差異。

綜上所述，杜仲臨床應用如以桃葉珊瑚苷類活性成分的生物活性為主，結合實際生產中新鮮藥材便于切制而生藥切制不便的特點及高溫對成分結構的破壞，建議杜仲采用趁鮮切寬絲，不發汗，60℃烘干的產地加工方法，不宜采用藥典記載的發汗后曬干和“采皮陰干”的加工方法。實際生產中，考慮到設備成本、操作技術等原因，在不發汗的前提下，采用操作簡單、低成本的干燥方法曬干是否可行，有待研究人員結合藥效學研究進一步確定。

參考文獻

[1]國家中醫藥管理局(中華本草)編委會. 中華本草第5卷[M]. 上海：上海科學技術出版社，1999:458-462.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2010：154.

[3]王麗娜，楊美華. 傳統發汗方法對杜仲降壓作用的影響[C]. 北京：中國藥學大會暨第十屆中國藥師周大會，2010.

[4]劉金圣，吳德康，狄留慶，等. 杜仲不同加工方法對其質量的影響[J]. 中醫藥信息，2007，14(12)：39-4.

[5]王志宏，彭勝，雷明盛，等. 杜仲主要生物活性研究[J]. 天然產物研究與開發，2013，37(25)：1302-1309.

[6]王健輝，劉永樂，李赤翎，等. 杜仲桃葉珊瑚苷對高脂小鼠血液流變學研究[J]. 天然產物研究與開發，2012，37(24)：1186-1190.

[7]李旭，劉停，陳時建，等. 杜仲葉桃葉珊瑚苷提取工藝優化及對自發性高血壓大鼠的降壓作用[J]. 食品科學，2013，34(14)：30-34.

[8]李偉，謝婷婷，覃潔萍，等. 杜仲不同采收期及不同部位中桃葉珊瑚苷的含量測定[J]. 天然產物研究與開發，2011，(23)：283-285.

Comparison on the Content of Aucubin inEucommiaulmoidesOliv Processed by Different Methods

LIU HuiliWEI Xuejun*HE Xin

Department of Pharmacy in Qiannan Medical College for Nationalities, Duyun 558000,China

Abstract:Objective：To provide scientific basis for the processing method of Eucommia ulmoides Oliv by comparing the effect of different processing methods on the content of aucubin. Methods：Determine the content of aucubin in Eucommia ulmoides Oliv(EUO) by HPLC. A Diamonsil C18 column (4. 6 mm×250 mm，5 μm) was used for the analysis. The mobile phase was methanol-water(10∶90)，the flow rate was 1. 0 ml/min，the detection wavelength was at 203nm，and the column temperature was 25℃. Results：Eucommia ulmoides Oliv processed by different methods, the content of aucubin in them was various. Living on the same drying methods，the content of aucubin in herbs without undergoing the diaphoretic process was higher than the herbs experienced it. Herbs in the same trait，with different drying methods，there were significant difference in the content of aucubin，and the content in the drugs dried by oven was higher than the drugs dried by exposure to the sunor inthe shade. Herbs in different trait，the content of aucubin in the plate-like EUO samples dried in the oven in 80℃and the wile-filamentous-like EUO samples dried in the oven in 60℃was both higherthan all other like samples. Conclusion：There were significant difference in the content of aucubin of different samples processed by different methods. In the clinical application，if we considered the biological activity of aucubin as a focus，we suggested the EUO should be processed in wile-filamentous-like without undergoing diaphoretic process and dried in the oven in 60℃.

Key words:Eucommia ulmoides Oliv；Aucubin；HPLC；Origin processing

(收稿日期：2015.12.21)

【中圖分類號】R283.3

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)05-0010-03

作者簡介：劉匯麗(1995-)，女，2013級藥學專業學生。E-mail:2862197947@163.com。通信作者：魏學軍(1972-)，男，教授，從事中藥與民族藥質量控制研究。E-mail:qndywxj@163.com。

基金項目：貴州省民族宗教委員會民族醫藥傳統文化研究項目(黔族201364)；黔南民族醫學高等專科學校大學生創新資金項目(QNYZ201517)。