中藥復方對咳嗽變異性哮喘模型大鼠血清IgE和IL-2水平的影響*

楊志華，吳尚華，沈玉鵬，魏桂梅

1 甘肅省中醫院，甘肅 蘭州 730050；2 甘肅省中醫藥研究院；3 甘肅省中醫院白銀分院

中藥復方對咳嗽變異性哮喘模型大鼠血清IgE和IL-2水平的影響*

楊志華1，2，吳尚華3，沈玉鵬1，魏桂梅3

1 甘肅省中醫院，甘肅 蘭州 730050；2 甘肅省中醫藥研究院；3 甘肅省中醫院白銀分院

目的：通過測定和分析實驗大鼠外周血IgE和IL-2的含量，觀察中藥復方對咳嗽變異性哮喘(CAV)大鼠免疫功能的影響，探討本方對咳嗽變異性哮喘機體的免疫調節機制。方法：采用氫氧化鋁和卵蛋白激發實驗，使大鼠形成致敏狀態，同時應用卵蛋白單一激發實驗方法，造模形成穩定的咳嗽變異性哮喘模型大鼠，并隨機分為6組，各組間予相應治療3周后腹主動脈取血，檢測各組實驗鼠咳嗽次數、血清IgE及IL-2水平。結果：中藥復方能緩解各實驗組大鼠咳嗽癥狀，減少咳嗽頻次，同時降低模型大鼠血清IgE的水平，提升血清IL-2的水平。結論：中藥復方能調節IgE及IL-2水平，減少實驗大鼠咳嗽次數，具有調節機體免疫力作用，這可能是中藥復方治療CVA的機制之一。

咳嗽變異性哮喘；免疫調節作用；中藥復方

咳嗽變異性哮喘(CVA)是近年來小兒常見的慢性呼吸系統疾病，本病以春秋冬季明顯，以刺激性干咳、突發性、陣發性咳嗽等癥狀為主要表現，是一種以慢性氣道炎癥及氣道高反應、高敏感性為主要病變特點的特殊類型的哮喘表現形式，可因各種誘發因素而發病。其本質是細胞因子參與調節的慢性氣道炎癥［1］，IL-4是IgE合成促進因

子；LI-2是一種B細胞生長因子和嗜酸細胞分化因子，這兩類細胞因子表達失常與Th1/Th2細胞功能的失衡有關［2-3］。有研究［4］發現咳嗽變異性哮喘患者黏膜水腫、上皮細胞脫落、部分基底膜增厚，與典型哮喘相似，IgE介導的Ⅰ型變態反應在咳嗽變異型哮喘的病理方面起重要作用，體內IgE水平的增高可以反映支氣管哮喘患者的特應征的存在［5］。因此，Th1細胞釋放的細胞因子和Th2細胞釋放的細胞因子之間的失衡是目前哮喘免疫治療的關鍵點。調節血清中Th1及Th2釋放的細胞因子水平，可抑制或阻斷氣道慢性炎癥，這可能是治療咳嗽變異性哮喘的關鍵環節。常見的IL-2和IgE兩種細胞因子是此種氣道炎癥的主要效應細胞。因此，本研究通過測定大鼠外周血IgE和IL-2的含量，探討中藥復方對咳嗽變異性哮喘的免疫調節機制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

1.1.1 中藥復方 中藥復方由蜜麻黃、射干、黃芩、五味子、半夏、僵蠶、蟬蛻等藥物組成(甘肅省中醫院藥劑科提供)。以中劑量0.380 g/mL為等效劑量，按照1∶2∶4比例配置(分別為小、中、高劑量)，并將配置好的溶液置于4℃冰箱保存待用。1.1.2 小葵花肺熱咳喘口服液(陽性對照組) 小葵花肺熱咳喘口服液(海南新中正制藥有限公司生產，國藥準字號Z20140506)由石膏、連翹、魚腥草、麻黃等藥物組成，按照人與動物藥物換算等效劑量為0.95 mg/kg，配置藥液在4℃冰箱保存。

1.1.3 試劑 大鼠IgE、IL-2定量夾心ELISA檢測試劑盒均購自上海西唐生物有限公司。

1.2 實驗動物選用健康4周齡清潔級Wistar大鼠60只，雌雄各半，體質量(100±20)g，由蘭州大學醫學院動物實驗中心提供，實驗動物合格證號：2014-11-006。

1.3 實驗動物分組將60只清潔級大鼠隨機分為6組，A組(空白對照組)、B組(模型對照組)、C組(陽性對照組)、D組(中藥復方小劑量組)、E組(中藥復方中劑量組)、F組(中藥復方高劑量組)，每組10只。

1.4 模型復制參照咳嗽變異性哮喘豚鼠模型復制方法［3］，采用卵蛋白和氫氧化鋁激發致敏并用卵蛋白激發的方法復制大鼠CVA模型。各實驗組大鼠正常飼養1周，待其適應環境后開始實驗，除空白對照組外，其余實驗組均在第1、8天每只大鼠腹腔注射10%卵蛋白和Al(OH)3混合溶液1 mL致敏。從第2周起，B、C、D、E、F 組大鼠置于密閉有機玻璃罩內，給予含1%OVA溶液的生理鹽水超聲霧化激發20分鐘，每日早晨8時進行超聲霧化，連續10日，激發前30分鐘，C、D、E、F 組分別灌胃給藥治療(C組予小葵花肺熱咳喘口服液灌胃1 mL；D、E、F組分別予中藥復方灌胃0.95、1.90、2.85 mL)。第3周記錄實驗組大鼠咳嗽頻次，并于腹主動脈取血，分離血清進行IL-2、IgE細胞因子水平的測定。

1.5 模型評估進行激發實驗時，觀察各組大鼠反應，若有陣發性咳嗽、嗆咳、毛發聳立，呼吸困難或憋氣，呼吸頻率增快，煩躁多動等癥狀兩種或兩種以上者，或抽搐、虛脫現象之一者，均提示造模成功。

1.6 統計學方法數據采用SPSS 15.0軟件包分析，計量資料以(±s)表示，采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 體征觀察空白對照組大鼠體質量穩定增長，毛色光亮，反應靈活，行動便捷，呼吸頻率正常，節律整齊。各實驗組大鼠在激發前呼吸平穩，無特殊異常癥狀。激發實驗后出現陣發性咳嗽，嗆咳，或打噴嚏，流清涕，鼻癢，呼吸急促，煩躁多動等癥狀。

2.2 大鼠咳嗽頻次測定與空白對照組比較，模型對照組咳嗽頻次增加；與模型對照組相比，陽性對照組及中藥復方小、中劑量組咳嗽頻次明顯減少；與陽性對照組比較，中藥復方小、中劑量組咳嗽頻次相對減少，見表1。

表1 各組大鼠咳嗽頻次比較

2.3 血清IL-2檢測結果與空白對照組比較，模型對照組血清IgE值升高，差異有統計學意義(P＜0.05)；與模型對照組相比，陽性對照組、中藥復方各劑量組血清IgE降低，差異有統計學意義(P＜0.05)；與高劑量組相比，小劑量組血清IgE升高，其差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

2.4 血清IgE檢測結果與空白對照組比較，模型對照組血清IL-2 值降低，其差異具有統計學意義(P＜0.05)；與模型對照組比較，陽性對照組、中藥復方各劑量組血清IL-2升高，差異具有統計學意義(P＜0.01)；中藥復方組間比較，高劑量組與低劑量組之間差異有統計學意義(P＜0.05)，與中劑量組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表3。

表2 各組大鼠血清IL-2含量(±s)

表2 各組大鼠血清IL-2含量(±s)

注：▲表示與空白對照組比較，P＜0.05；#表示與模型對照組比較，P＜0.01；★表示與高劑量組比較，P＜0.05。

組別 只數 IL-2/(pg·mL-1)空白對照組 10 26.73±2.56模型對照組 10 15.68±2.12▲陽性對照組 10 22.07±1.61#中藥復方小劑量組 10 21.43±2.46#★中藥復方中劑量組 10 23.26±1.36#中藥復方高劑量組 10 25.56±1.67#

表3 各組大鼠血清IgE含量(±s)

表3 各組大鼠血清IgE含量(±s)

注：▲表示與空白對照組比較，P＜0.01；#表示與模型對照組比較，P＜0.05；★表示與高劑量組相比，P＜0.05。

組別 只數 IgE/(IU·mL-1)空白對照組 10 102.56±19.32模型對照組 10 169.34±20.28▲陽性對照組 10 98.33±11.13#中藥復方小劑量組 10 117.81±12.19#★中藥復方中劑量組 10 107.63±11.63#中藥復方高劑量組 10 96.06±12.55#

3 討論

咳嗽變異性哮喘以持續咳嗽或咳嗽反復發作為主要臨床表現，本病屬中醫“咳嗽”“百日咳”“哮喘”等范疇。傳統醫學認為宿痰留伏是本病發生的溯源，如《丹溪心法》提出“哮喘專主于痰”，風邪其性宣發開瀉，且屬陽邪，易侵襲上焦肺衛，肺失宣肅，肺氣不利，引動伏痰，風氣與痰涎交阻氣道，出現咳嗽、喘息、呼吸困難、喉中痰鳴等癥狀。中醫認為小兒發育未臻，肺臟嬌嫩，外感邪氣，郁閉于肺，肺管不利，氣道痙攣，是本病發生的本質。風邪與痰液是本病發生的病理因素。發病的性質與小兒素體相關，陽虛、寒痰內伏者，易發為寒性哮喘，感受風熱之邪者，易表現熱性哮喘，但小兒體稟“純陽”，又為稚陰稚陽之體，多從陽化熱、化火，故多以痰熱互結，壅塞氣道，搏擊氣道，發為本病。故喻嘉言云：“咳者，肺之本病也。”汪昂亦言：“肺主氣，又屬金，主聲，故咳必由于肺也。”現代醫學認為本病多發生于冬春季，主要表現為刺激性干咳，晨起及夜間咳嗽為主，天氣驟變或接觸過敏原后癥狀更突出，且具有反復發作、突發性等特點，追溯其病理生理基礎是持續的氣道炎癥和氣道高反應性，與中醫學中“風為陽邪，其性開泄，風性主動，風善行而數變”的致病特點極為相似［6］。

現代醫學多以抗過敏、緩解支氣管痙攣、緩解氣道高反應為基本治療方案，但存在恢復期抵抗力低下，具有反復發作性及突發性表現，而中藥復方制劑具有多靶點、毒副作用小等特點，能對患兒機體綜合調理、提高全身免疫力，減少重復性發作癥狀。本實驗中藥復方由蜜麻黃、半夏、五味子、僵蠶、蟬蛻、射干等藥物組成，其中麻黃辛散，疏風宣肺，散寒平喘，以驅邪外出；五味子酸斂，二者一收一散，調節氣機，預防肺氣宣發太過；半夏為燥濕化痰，溫化寒痰之要藥，尤善治臟腑之濕痰；蟬蛻甘咸，散風熱、宣肺、定痙；僵蠶辛咸，祛風解痙，化痰散結。本方在宣肺止咳的同時，應用疏風通絡、解痙藥物，尤其是蟲類藥物如僵蠶、蟬蛻等的應用，疏利上焦以散風邪，透邪外出，舒張氣道，解痙止咳。諸藥合用，共奏宣肺止咳，祛風解痙之功效［7］。現代藥理研究［8］證實不少風藥具有提高細胞免疫功能，減輕機體對過敏因素的應激反應，拮抗組胺，抗過敏性炎癥，可使肺之小氣道由痙攣變為舒張，氣道通順。

本研究結果表明中藥復方可緩解各實驗組大鼠咳嗽癥狀，減少咳嗽次數；降低哮喘模型大鼠血清IgE的水平，提升血清IL-2的水平，而IgE及IL-2是引起CVA的主要細胞因子，通過調節二者血清含量，抑制或阻斷氣道慢性炎癥，達到調節機體免疫功能紊亂的目的，這可能是中藥復方制劑治療咳嗽變異性哮喘的作用機制之一，為開發新藥奠定了實驗基礎，也是目前治療小兒咳嗽變異性哮喘發生的關鍵所在。

［1］ 陳芳瑜，陳紅梅.中藥超聲霧化治療咳嗽變異性哮喘［J］.福建中醫藥，1996，27(5)：34-35.

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［3］ 高士宗.黃帝素問直解［M］.2版.北京：科學技術文獻出版社，1982：25-623.

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［5］ 陸為華.中藥治療小兒咳嗽變異型哮喘120例［J］.上海中醫藥雜志，1999(7)：24-25.

［6］ 梁麗娜，李江全.論風邪在小兒過敏性咳嗽發病機制中的重要作用［J］.中國中醫急癥，2011，20(8)：1355-1356.

［7］ 康妍萌.肅肺平肝養陰湯治療小兒咳嗽變異性哮喘的臨床研究［M］.濟南：山東中醫藥大學，2005：57.

［8］ 王強，孫增濤.祛風解痙法治療咳嗽變異性哮喘［J］.吉林中醫藥，2007，27(10)：23-24.

Effects of Chinese Herbal Compound on Serum IgE and IL-2 Levels in Cough Variant Asthma Model Rats

YANG Zhihua1,2,WU Shanghua3,SHEN Yupeng1,WEI Guimei3
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730050,China;
2 Gansu Provincial Academy of traditional Chinese Medicine;
3 Baiyin Branch of Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

R256.12

A

1004-6852(2016)11-0015-03

2015-10-25

甘肅省中醫藥管理局課題(編號GZK-2014-30)。

楊志華(1983—)，女，在讀博士研究生，主治醫師。研究方向：兒科常見病、多發病的中醫診治及中醫兒科教學和科研。