不同炮制方法對(duì)川楝子中川楝素和異川楝素含量的影響

郭 燦，曾 莉

成都市第五人民醫(yī)院，四川 成都 611130

不同炮制方法對(duì)川楝子中川楝素和異川楝素含量的影響

郭 燦，曾 莉

成都市第五人民醫(yī)院，四川 成都 611130

目的：通過(guò)HPLC法比較川楝子不同炮制品中川楝素和異川楝素含量的差異。方法：采用HPLC法對(duì)川楝子生品及各炮制品，以川楝素和異川楝素作為指標(biāo)，進(jìn)行含量測(cè)定。色譜條件：色譜柱(4.6 mm× 250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70)；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量10 μL；流速1.0 mL/min。結(jié)果：炒品相對(duì)其他炮制品種而言，川楝素和異川楝素含量較高。結(jié)論：不同炮制方法中，炒品中川楝素和異川楝素含量下降幅度最小。

川楝子；川楝素；異川楝素；炮制

川楝子，又名楝實(shí)、金鈴子，為楝科Meliaceae植物川楝Melia toosendan的干燥果實(shí)，冬季果實(shí)成熟時(shí)采收，是常用的理氣止痛藥，主要產(chǎn)地為四川、湖北、湖南、貴州等地，因?yàn)槿胨幰运拇óa(chǎn)的藥材為道地藥材，因此稱(chēng)為川楝子。《本草綱目》記載該藥入肝、胃、小腸經(jīng)，性味苦寒，有小毒，并有酸味?！吨袊?guó)藥典》中記載其具有疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲(chóng)之功效。用于肝郁化火，胸脅、脘腹痛、蟲(chóng)積腹痛、疝氣痛［1］。藥典收錄的炮制品只有川楝子和炒川楝子兩種。生川楝子有毒，傳統(tǒng)入藥常需要炮制，炮制后能降低川楝子毒性，而且能增強(qiáng)川楝子的理氣止痛作用［2］。傳統(tǒng)的炮制方法有炒焦法、鹽制法、醋制法等，因此對(duì)川楝子生品、炒品、鹽炙品、醋炙品進(jìn)行含量測(cè)定，分析比較不同炮制方法對(duì)川楝子中川楝素和異川楝素含量影響的程度。川楝子中川楝素的結(jié)構(gòu)是半縮醛結(jié)構(gòu)，以互變異構(gòu)體存在，并不斷轉(zhuǎn)換，所以要以兩個(gè)峰面積之和計(jì)算［3-5］。近年來(lái)，對(duì)于川楝子的研究主要側(cè)重于三萜類(lèi)成分川楝素的藥理作用及其配伍減毒［6-8］方面，以及異川楝素的殺蟲(chóng)作用。

1 材料

1.1 儀器日本島津高效液相色譜(HPLC)儀：包括LC-20AT高壓輸液泵、SPD-20A紫外檢測(cè)器、N2010色譜工作站；Phenomenex Luna-C18色譜柱；RE-5210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；CP225D十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán))；DZF-6050-MBE型真空干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司)；KQ-220型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DK-S2型電熱恒溫水浴鍋(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；ZKJ-101型循環(huán)水真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)。

1.2 試藥川楝子飲片(成都中醫(yī)大惠康中藥飲片公司，批號(hào)：100301)；川楝素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：111842)；異川楝素標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：200502)；甲醇、乙腈均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純；炮制輔料(鹽、米醋)：市售。

2 方法與結(jié)果

2.1 川楝子炮制品的制備生品：稱(chēng)取已經(jīng)撿去雜質(zhì)后的川楝子200 g，曬干，切厚片。清炒品：稱(chēng)取已經(jīng)撿去雜質(zhì)的川楝子200 g，曬干，切厚片，置熱鍋內(nèi)，用中火翻炒，炒至果皮微黃，取出，放冷。醋制品：稱(chēng)取已經(jīng)撿去雜質(zhì)的川楝子200 g，曬干，切厚片，加入50 mL釀造米醋浸潤(rùn)，待米醋吸盡后，用文火炒至色澤微黃，取出，放冷。鹽炙品：稱(chēng)取已經(jīng)撿去雜質(zhì)的川楝子200 g，曬干，切厚片，加20%鹽，加適量水稀釋拌潤(rùn)，待鹽水吸盡后，用文火炒至色澤微黃，取出，放冷。

2.2 川楝素和異川楝素的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱Phenomenex Luna-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70)；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。川楝素和異川楝素的對(duì)照品和川楝子樣品中川楝素和異川楝素分離的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 川楝子樣品與對(duì)照品的HPLC圖

2.3 溶液制備

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 分別精密稱(chēng)取川楝素和異川楝素對(duì)照品各2 mg，加10 mL色譜級(jí)甲醇溶解，用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)后，轉(zhuǎn)移定容至10 mL量瓶中，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

2.3.2 供試品溶液的制備 川楝子生品和各炮制品粉碎、過(guò)40目篩，干燥后的各川楝子炮制品粉末精密稱(chēng)定約1.5g，放置到具塞錐形瓶中，加入25 mL色譜甲醇，稱(chēng)量，記錄數(shù)據(jù)，開(kāi)始超聲提取30分鐘，放冷，再稱(chēng)一次重量，用甲醇補(bǔ)足到超聲前的重量，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾。濾液定容至25 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.3.3 線性關(guān)系考查 取適量川楝素和異川楝素對(duì)照品溶液，以甲醇配制為濃度0.540、0.270、0.135、0.067 5、0.033 75和0.016 875 mg/mL的梯度，在已知色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以峰面積和濃度進(jìn)行回歸處理，得川楝素回歸方程：

Y=2 064.2X+1 034.3(r=0.999 9)，在0.016 875～2.70 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。異川楝素：Y=134.4 X+267.5(r=0.999 9)，在0.016 875～2.70 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.4 精密度試驗(yàn) 重復(fù)進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液6次，進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果 RSD分別為0.162%、0.133%，精密度結(jié)果良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一樣品分別于0、2、4、6、8、12小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)得川楝素和異川楝素峰含量，計(jì)算RSD為2.341%、2.032%，穩(wěn)定性結(jié)果良好。

2.3.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 按照上述供試品溶液的制備方法，取一批樣品分別平行制備6份供試品溶液，測(cè)定川楝素和異川楝素的含量，計(jì)算RSD為1.522%、1.831%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)定川楝子炒制品6份各1.5 g，分別精密加入1 mg的川楝素對(duì)照品，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算川楝素和異川楝素加樣回收率，結(jié)果平均回收率分別為98.46%、96.78%，RSD分別為1.096%、1.233%。

2.3.8 樣品含量測(cè)定 按上述色譜條件，測(cè)定川楝子樣品中川楝素和異川楝素的峰面積，分別計(jì)算川楝素和異川楝素的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 川楝子生品及不同炮制品中川楝素和異川楝素的含量(n=6)

3 討論

中藥與其他植物藥的重要區(qū)別特征是中藥材的炮制工藝，川楝子是有毒中藥材，按傳統(tǒng)入藥要求，應(yīng)該用炮制品，川楝素是川楝子眾多成分之一。川楝素既是活性作用成分，也是毒性成分。異川楝素主要有殺蟲(chóng)作用［9-11］。本研究發(fā)現(xiàn)，由于川楝素紫外吸收不強(qiáng)，因此只能在末端吸收處進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果造成準(zhǔn)確度下降。通過(guò)比較不同炮制方法樣品中川楝素和異川楝素含量，發(fā)現(xiàn)各炮制品中，生品中川楝素和異川楝素含量最高，其他經(jīng)過(guò)炮制后川楝素和異川楝素含量均有所下降，炒品的綜合指標(biāo)均優(yōu)于其他炮制品，為規(guī)范炮制品品種提供了科學(xué)依據(jù)。其中醋品與鹽品的川楝素和異川楝素含量較低，可能炮制過(guò)程中悶潤(rùn)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，炮制時(shí)加熱需較長(zhǎng)時(shí)間，且加大火候才能干燥，因此使成分破壞。另外各種炮制品中所含川楝素含量醋品最低，表明在高溫下，酸對(duì)川楝子中川楝素含量有較大影響。但是川楝子成分復(fù)雜，雖然川楝素是其主要活性成分，但不能以單個(gè)成分含量判斷產(chǎn)品質(zhì)量［12］。

不同炮制品炮制前后的成分含量有變化，與其功效不同有一定關(guān)系。炒川楝子可降低苦寒之性、毒性，能疏肝理氣止痛，適用于肋脅痛、胃脘痛；醋川楝子行氣散痞，能增加疏肝理氣止痛功效［13-14］；鹽川楝子能引藥下行，長(zhǎng)于療疝止痛。各炮制品在藥理中均表現(xiàn)出抗炎作用，其中鹽制品的鎮(zhèn)痛抗炎作用效果最好［15］。

本研究比較川楝素和異川楝素含量的差異，結(jié)果表明川楝子飲片質(zhì)量受到炮制方法的影響，但炮制過(guò)程中，成分如何轉(zhuǎn)變及炮制原理等深入問(wèn)題仍未解決，需進(jìn)一步深入研究。

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文后參考文獻(xiàn)著錄格式示例（二）

連續(xù)出版物（期刊，含外文期刊）

［序號(hào)］主要責(zé)任者（作者為3位以下全部著錄，3位以上著錄前3位，后加“，等”）．文獻(xiàn)題名［文獻(xiàn)類(lèi)型標(biāo)志］.刊名，年，卷（期）：起頁(yè)-止頁(yè).

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Impact of Processing Method on Toosendanin and Isotoosendanin Content of ChuanLianZi berry Fruit

GUO Can,ZENG Li The Fifth People′s Hospital of Chengdu,Chengdu 611130,China

A

1004-6852(2016)11-0030-03

2015-10-27

郭燦(1969—)，女，副主任中藥師。研究方向：中藥學(xué)。