牛精液冷凍保存和使用技術的進展

摘 要 牛精液長期保存是牛人工授精技術的關鍵，牛精液冷凍保存指的是將牛精液稀釋處理后，進行超低溫處理，以此來長期保存牛精液。從稀釋作用、保存檢查、解凍使用、輸精等幾個方面研究了牛精液冷凍保存和使用技術的進展。

關鍵詞 牛精液；冷凍保存；解凍；使用技術

中圖分類號：S814.3 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.08.038

牛精液冷凍保存指的是在對牛精液處理后，進行超低溫處理，實現牛精液長期保存的一種技術。目前，牛精液冷凍保存主要的主要步驟如下：首先，進行細管凍精的分裝，然后在液氮罐等專用容器中將分裝的細管凍精侵入到-196 ℃的液氮中進行保存。這種牛精液冷凍保存技術在使用牛冷凍精液時候不會受到時間和地域的限制，且不會受到牛生產年齡的影響。

1 稀釋作用

對牛精液的稀釋能夠有效增加精液量，提升配種頭數，對于提升公牛的利用率有著重要的作用。此外，對牛精液進行稀釋還能夠提升精液的抗凍性，避免精液在低溫環境下受到損害，有效保證牛精子的養分，延長牛精液的壽命，從而方便牛精液的保存和運輸[1]。目前，牛精液所采用的稀釋液主要有兩種：一種是無卵黃稀釋液，另一種是有卵黃稀釋液。稀釋液能夠有效保護牛精子，補充牛精子的能量，同時能夠降低牛精液的黏稠度，從而避免牛精子在低溫環境下受冷休克，提升牛精液低溫保存的質量。在采集牛精液之后，對牛精液進行感官評測和顯微鏡鏡檢，檢查合格的精液放置到密度儀中，根據監測數據來配置合適的稀釋液進行稀釋，保證每0.25 mL細管中牛精子的數量在800個以上，在解凍之后，牛精子的活力在35%以上。

2 保存和檢查

通過程控冷凍儀來調節細管凍精的溫度，在將溫度從4 ℃降低到-140 ℃之后，將細管凍精轉移到液氮中，等待液氮液面平穩，之后每份樣品中取出3支細管凍精，將其放置到40 ℃的水中進行解凍，解凍時間控制在10 s左右，之后擦干，將兩端的封口去除，利用移液管去除定量精液，在溫度為37 ℃的恒溫板上進行鏡檢，精子活力在35%以上則進行細管凍精的分裝，一根拇指管裝25支細管凍精，一個紗布袋樁4根拇指管，將牛號、生產日期以及牛品種等信息進行標注和記錄，之后將分裝好的細管凍精放置在液氮罐中進行冷凍保存[2]。在液氮罐上標注保存信息，整個過程中分裝的細管凍精不能夠離開液氮，之后對細管凍精的菌落數量等指標進行檢測，檢測合格之后則可以進行長期保存或出售。在保存期間，應當對不同液氮罐液氮消耗量進行定期檢查，即使補充液氮，牛凍精保存室應當保證良好的通風，同時要避免陽光直射，防止鼠害，以此來降低對牛精液冷凍保存的影響。

3 解凍和使用

在取出凍精的過程中，為了避免紗布袋或提筒提到臨界線以上，應當盡量使用長鑷子取出。在取出細管凍精之后，應當輕輕甩兩下，將細管凍精有棉塞的一端放置在溫度為35～40 ℃的溫水中，進行精液的解凍，等到細管顏色變白、精液完全融化之后即可以將細管凍精取出備用。解凍之后的精液需要的進行顯微鏡鏡檢，檢測精子的活力，如果精子的活力比標準值高，則可以使用精液進行輸精，為了確保受精正常，應當對細管凍精進行抽檢，在輸精之后留一些精子鏡檢。在細管凍精解凍之后應當盡快使用，及時輸精，長時間的停放容易影響精液質量。在使用之后，將空管進行保留，并進行詳細的記錄。

4 輸精

在輸精的過程中，應當保證適時性，對于母牛來說，其會在發情后6～12 h排卵，而精子在母牛生殖道的存活時間一般為8～20 h；同時，精子需要2～6 h獲取能量的過程，之后才能夠與母牛的卵細胞結合。在輸精之后，精子經過15 min就能夠到達母牛的輸卵管受精的位置，因此，為了提升受胎率，應當讓精子盡量比母牛卵細胞早到達輸卵管的受精位置[3]。

4.1 輸精時間的把握

母牛發情的過程中，陰道會流出透明的液體，外陰部會出現腫脹現象，而發情結束之后，這些現象會消失。在選擇輸精時間的過程中，應當對母牛進行直腸檢查，如果卵泡脹大且表面緊張，有一碰即破的感覺，則代表著是最佳輸精時間，應當抓住時機進行輸精，在輸精結束之后，應當保證母牛處于安靜的狀態，在2 h內不進行飼喂飲水。

4.2 輸精部位的把握

輸精的最佳部位在母牛子宮體基部，即在母牛子宮頸內口1 cm的地方，如果輸精位置過淺，精子在母牛體內會有著過大的損耗，影響精子活力，從而影響受胎，如果輸精位置過深，則容易對母牛的宮內黏膜造成損傷，同樣不利于受胎。

在確定母牛卵泡的發育位置之后，將解凍的精液直接輸入到子宮角口內1～2 cm的地方，在輸精的過程中，需要注意輸精槍要避免與母牛的子宮壁接觸。

4.3 輸精方法的把握

在輸精的過程中，一把選擇直腸把握子宮頸輸精的方法，具體來說，將母牛固定，左后插入到母牛的直腸中，將母牛子宮頸后端輕輕握住，右手握住輸精器，將輸精器沿著母牛的陰門從斜上方慢慢插入，插入距離控制在5～10 cm，避開母牛尿道口，之后改斜插為平插，將輸精器送到母牛子宮頸口，慢慢的越過子宮頸管中的皺襞，在輸精器到達合適的輸精部位之后，慢慢地將精液注入，注入精液完成后，將輸精器緩慢地抽出。

4.4 輸精次數的把握

在輸精的整個過程中，每一個情期進行一兩次的輸精即可，第一次輸精一般在母牛發情盛期4～6 h進行，在第一次輸精8～12 h之后，進行第二次輸精。

5 牛冷凍精液的應用前景分析

目前，我國牛冷凍精液的研究相對較為成功，且應用廣泛，但需要明確的是，相較于發達國家而言，我國牛冷凍精液及其使用技術還處于起步階段，在研究和實踐的過程中也遇到了一些問題。在進一步的研究過程中，應當加強創新，提升牛冷凍精液的質量，加強推廣，擴大牛冷凍精液的應用范圍[4]。

此外，在研究的過程中應當加強對精子分離技術的研究，針對不同的精液，應當采取差異化的冷凍保存方法，爭取實現預選性別。牛精液冷凍技術與牛人工授精技術的結合是現代生物技術的一次進步，在新時期，對我國改良牛品種，保護優良的牛種質資源以及畜牧業的發展等各個方面都有著重要的作用。總的來說，牛精液冷凍保存及其實用技術應用前景十分廣闊。

6 結語

牛精液冷凍保存指的是在對牛精液處理后，進行超低溫處理，實現牛精液長期保存的一種技術，牛精液冷凍保存技術是牛人工受精的關鍵技術，本文從稀釋作用、保存檢查、解凍使用、輸精等幾個方面研究了牛精液冷凍保存和使用技術，并展望了牛精液冷凍保存技術的發展前景，旨在為推進我國牛精液冷凍保存及其使用技術的發展做出貢獻。

參考文獻

[1]李曉強，陳興平，賈永紅，等.牛精液冷凍技術應用研究進展[J].中國牛業科學，2006（5）：59-62，66.

[2]郝鵬，王紅，解廣勤，等.牛冷凍精液的應用研究進展[J].中國牛業科學，2011（3）：29-31.

[3]竇世玲.牛細管冷凍精液保存與使用技術[J].甘肅畜牧獸醫，2014（10）：54，59.

[4]王鴻周，施巧婷，王二耀，等.種公牛精液冷凍保存的研究進展[J].中國牛業科學，2015（1）：57-60，67.

（責任編輯：趙中正）