基層獸醫實驗室樣品采集、工作中必須注意的問題與建議

摘 要：樣品采集、包裝與運送工作是基層獸醫實驗室承擔的一項經常性的重要工作。此項工作技術含量不高，但其過程中的好多要素和細節會直接影響檢測結果的準確性和檢測結論的科學性。本文主要從采集方法、部位、種類、數量、樣品質量、包裝、運送以及人員防護等方面分別進行闡述和分析，對科學全面掌握系統化的樣品采集與運送工作、提高檢測結果的準確性和檢測結論的科學性具有重要的指導意義。

關鍵詞：樣品采集；病料；包裝；運送；人員防護

中圖分類號：S855.3 文獻標識碼：C 文章編號：1001-0769（2016）05-0093-03

樣品采集、運送工作是基層動物疫病預防控制機構在動物疫病防控工作中承擔的一項經常性的重要工作。該項工作中采樣方法、部位、種類、數量、樣品質量、包裝和運送等每個環節都會直接影響檢測結果的準確性和檢測結論的科學性。但是，由于基層動物疫病預防控制機構對樣品采集工作認識不到位，機構改革致命人員頻繁流動，加之實驗室工作相對艱苦、人員素質參差不齊或非專業人員等原因，使得樣品采集工作在具體實施和實際操作中存在很多問題，不但影響了檢測結果的準確性和檢測結論的科學性，而且對相關人員的健康安全構成嚴重的威脅。筆者就采樣工作的相關要求和多年從事樣品采集工作的經驗分析如下。

1 樣品與病料的概念

1.1 樣品（sample）

取自動物或環境，擬通過檢測反應動物個體、群體或環境有關狀況的材料或物品。

1.2病料（specimen）

來自患病或可疑患病動物的被（待）檢樣品。

2 樣品采集人員要求

必須是具備動物傳染病感染、傳播、流行與預防的相關知識，熟練掌握采樣方法和動物保定技術，熟悉樣品采集與采樣器具使用的獸醫專業技術人員。并熟悉《動物疫病實驗室檢驗采樣方法》（NY/T 541-2002）和《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規范》。

3 樣品（病料）采集的標準依據

根據不同檢測目的，樣品分用于免疫抗體檢測和疫病診斷檢測（即病料）兩類；前者通常指血清，而后者通常指病料。樣品采集必須嚴格執行《動物疫病實驗室檢驗采樣方法》（NY/T 541-2002）。

4 動物疫病病原檢測樣品采集的種類

常見動物疫病病原檢測樣品采集種類見表1。其他動物疫病樣品采集種類應參閱相關國家標準或資料。

5 樣品采集數量的確定

5.1免疫抗體檢測用血清

應堅持隨機采樣與固定采樣相結合的原則。樣品采集采用隨機抽樣的方法進行，使所采樣品具有群體代表性。對被采集樣品的畜禽個體和樣品本身進行編號。跟蹤檢測可實現對群體相應指標的動態監控，對研究動物疫病免疫抗體水平隨時間變化的規律并以此指導免疫工作具有重要意義。100頭/只規模以下，至少應采集10份；100頭/只以上規模，每群采集數量不少于20份；每份血清禽類最好不少于500 μL，畜類不少于800 μL；

5.2 疫病診斷檢測用樣品

疫病診斷檢測用樣品即病料，包括血清、全血和血涂片、組織病料、滲出液、排出物、分泌液等，具體詳見《動物疫病實驗室檢驗采樣方法》（NY/T 541-2002）。每群畜類不少于2～3頭/只，禽類不少于5羽的相應樣品。組織樣品禽類每份不應少于2 g，雛禽脾臟、胰臟等病料建議完整取樣；畜類每份不少于5 g，厚度最好不要小于1 cm，液體病料不應少于5 mL，用于保存棉拭子的PBS液以淹過棉拭子為準，最少不應少于1 mL；流行病學監測樣品群采集數量詳見農業部印發的年度《國家動物疫病監測與流行病學調查計劃的通知》。

6 樣品采集、保存與運送過程應注意的問題

6.1 血清樣品注意事項

6.1.1 采血器械

使用有效期內的一次性注射器、真空采血管（器）、1.5 mL、5 mL和10 m L的塑料離心管；

6.1.2 扎針

采樣人員應熟練掌握采血技術，選準采血進針點，掌握好進針方向、角度和深度；針尖進入血管后順著血管方向向前推進，否則易刺穿血管引起血腫。特別是采集雛雞等小型畜禽個體翅血液時要格外小心，由于其血管細、管壁薄容易刺穿，刺穿后立即停止采血并按壓止血1 min～3 min，更換采血部位或個體重新采。但應注意同一個體多次采樣不成功會引起養殖戶反感，后續采樣工作將可能受到影響或無法以完成；

6.1.3 采集血液的轉移

用注射器采集的血液盡快轉移到離心管中，轉移時血液時沿管壁緩慢注入，不要用力擠壓、震蕩，否則易造成細胞破裂發生溶血進而影響檢測結果；傾斜靜置離心管讓血清自然析出。需離心分析血清速度不應超過3 000 rpm，樣品禁止置于陽光下曝曬或戶外受凍造成溶血；用真空采血管采集血液樣品時選用不含抗凝劑或含促凝劑或分離膠的真空采血管。

6.2 全血樣品采集注意事項

用一次性注射器（采血器）采集抗凝血時，可事先在注射器內吸入少量抗凝劑。血液采出后來回顛倒注射器，以讓血液與抗凝劑混勻，然后轉移到加抗凝劑的離心管再次顛倒混勻。用真空采血管采血應選用含枸櫞酸鈉或EDTA抗凝劑的真空采血管。

6.3 用于血涂片檢查的血液采集注意事項

采血部位采用酒精消毒，等酒精完全揮發后，或直接用干棉簽擦凈后方可采集，血液量以綠豆大小為宜，玻片應經2 %～3 %鹽酸處理。

6.4 病料樣品采集注意事項

（1）選擇正在發病具有明顯臨床癥狀的畜禽個體，采集病變組織和健康組織交界處組織；流行病學監測用樣品采用隨機抽樣的方法進行樣品采集，使所采樣品具有群體代表性；

（2）一般情況下用于病原檢測的樣品每份不要多于50 g，多于50 g不便于包裝、運輸及檢測取樣，所用采樣器械和盛裝容器應經過消毒；

（3）采樣前對采樣環境噴灑消毒液降塵，吹風時進行順風向采樣，盡量保持采樣全過程無菌；

（4）每種病料樣品先獨立包裝后，同一個體的樣品一同包裝，同群樣品一起包裝。

6.5 樣品的保存與運送

6.5.1 保存

（1）樣品編號選用油性記號筆。水性記號筆編寫的號碼常因樣品保存和運輸過程中溫度變化形成的冷凝水汽使號碼消失；

（2）編號應盡量做到唯一，避免檢測時，不同包裝袋里同一個編號的樣品放在一起發生無法辨認的現象；

（3）計劃24 h內開展檢測或送檢的樣品應作冷藏保存；24 h以上檢測或送檢的血清樣品應作冷凍保存。用于病原檢測的組織或液體樣品冷藏保存，并要求于24 h內送到檢測實驗室；

（4）填寫樣品采集和送檢信息單，樣品送檢信息單一式三份，一份隨樣品送實驗室，一份寄去，另一份備案。樣品信息內容記錄應包括以下內容：抗體檢測樣品包括畜主姓名、畜禽場地址、動物品種及其飼養量、樣品數量、免疫情況、疫苗種類、免疫時間、送檢者姓名、地址、郵編、電話及送檢日期；病料樣品除前述信息外，還包括樣品種類、首發病例日期、發病與死亡數量、臨床癥狀、發病年齡、治療情況、檢測項目等。

6.5.2 運送

樣品運送前的包裝嚴格執行《動物疫病實驗室檢驗采樣方法》（NY/T 541-2002）。運送過程中，應盡量避免樣品包裝箱劇烈震動，防止液體樣品灑出，并保持溫度在要求的范圍內。用于進行高致病性病原微生物診斷檢測的樣品，包裝和運輸應符合《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規范》的要求。

7 樣品采集過程中需要注意的生物安全問題

樣品采集工作在保證樣品質量的同時，必須要做好消毒和采樣廢棄物的無害化處理工作，防止因處置不當而導致病原擴散。特別是在采集用于或者疑似布魯氏菌病、結核病、棘球蚴病、炭疽、狂犬病等人獸共患病檢測樣品時，必須做好人員防護工作，保證采樣人員的健康安全。

7.1 提高人員的自我保護意識

（1）做好被采樣畜禽個體的保定，即能提高采樣速度和質量，又能防止對采樣人員造成傷害，防止被采樣畜禽血管被針頭刺穿而使采樣無法完成；

（2）采樣操作時小心使用刀片、注射器、剪刀等尖銳器械，防止被刺傷、割傷。因傷口更易被布魯氏菌病、狂犬病等人獸共患病感染；采集、轉移組織液等液體樣品時，動作要輕要慢，防止形成含有病原的氣溶膠，造成病原擴散和人員感染。

7.2 人員的生物安全防護措施

事先應根據擬檢測項目、疫病傳染性、是否為人獸共患病以及傳播途徑等因素，綜合分析，做好相應的生物安全防護工作。特別是在采集疑似患有人獸共患病畜禽的樣品時，主要應注意以下幾點：

（1）選戴N95級（含）以上的口罩做好呼吸道防護。戴好后用口吹氣和吸氣來檢查口罩是否佩戴正確：即吸氣呼氣時口罩邊緣均沒有空氣流動，而口罩中央部位吸氣時凹陷，呼氣時凸起。否則需要調整口罩邊緣的密封效果。禁止佩戴普通一次性口罩，該口罩僅用于阻擋吸入灰塵和防止佩戴者口鼻中調出的物質落到操作部位，不能過濾樣品采集過程中產生的含病原氣溶膠。

（2）必要時佩戴護目鏡，防止樣品濺出物和采樣過程中產生的氣溶膠進入眼中造成感染。

（3）采集患人獸共患病畜禽樣品時，建議戴雙層手套，先戴丁腈手套后戴乳膠手套。戴前應檢查口罩是否完好，操作過程中發現手套破裂立即更換。

（4）穿正規的防護服，長筒雨鞋或戴鞋套。避免被畜禽濺出的血液、排出的糞便和噴出的唾液等分泌物污染皮膚、衣服而感染疫病。

7.3 廢棄物處理和采樣環境消毒

7.3.1 一次性器械、物品的處理

針頭、刀片使用完畢后，放入銳器盒帶回處理；一次性針管、防護用品應裝入事先準備好的密封袋中做焚燒或實驗室高壓消毒處理。

7.3.2 尸體與環境處理

采樣后的畜禽尸體，噴灑消毒藥后進行焚燒或深埋等無害化處理。采樣結束，采樣人員進行更衣消毒，對被污染環境嚴格進行清潔消毒。