飼料中真蛋白的測(cè)定及其意義

【摘 要】 蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，飼料中蛋白質(zhì)測(cè)定的準(zhǔn)確性在飼料應(yīng)用中有極其重要的作用。

【關(guān)鍵詞】 蛋白質(zhì) 測(cè)定 意義

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2016.01.004

蛋白質(zhì)是復(fù)雜的含氮有機(jī)化合物，動(dòng)物在成長(zhǎng)過程中所需要的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分多少?zèng)Q定其生長(zhǎng)的質(zhì)量，所以真蛋白質(zhì)含量測(cè)定的準(zhǔn)確性直接影響飼料的質(zhì)量和動(dòng)物的成長(zhǎng)。

飼料原料的種類很多，有動(dòng)物蛋白飲料和植物蛋白飲料，飼料中蛋白質(zhì)含量是判定飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的一項(xiàng)重要指標(biāo)。飼料中粗蛋白質(zhì)包括真蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩部分含氮物質(zhì)，后者主要包括游離氨基酸、硝酸鹽、氨等，在飼料生產(chǎn)中添加羽毛粉、血粉、尿素等不易被動(dòng)物肌體吸收的物質(zhì)，飼料產(chǎn)品中粗蛋白含量上去了，但卻沒有相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，造成養(yǎng)殖效益的低下，所以檢測(cè)飼料中真蛋白含量的意義重大。

近年來，在國(guó)內(nèi)外測(cè)定飼料中蛋白質(zhì)含量的方法很多，但是應(yīng)用廣泛的分析方法中主要采用凱氏定氮法。凱氏定氮法由Kieldahl于1833年首先提出，經(jīng)長(zhǎng)期改進(jìn)，迄今已發(fā)展的非常完善及準(zhǔn)確，其中自動(dòng)定氮儀法采用較廣泛。

1 原理

真蛋白的檢測(cè)原理是將20%硫酸銅加入已溶解的飼料原料中，加入過程中要緩慢且過量，這樣才能使飼料中的真蛋白在堿性條件下被氫氧化銅沉淀出來，為了防止水溶性含氮物的干擾，還要用蒸餾水將其洗凈，此時(shí)的沉淀物可按飼料中粗蛋白的檢測(cè)方法將真蛋白質(zhì)的含量測(cè)定出來。

蛋白質(zhì)是有機(jī)化合物，將飼料原料與硫酸和催化劑一起在高溫爐上加熱，將其中的蛋白質(zhì)充分分解出來，分解出來的氨與硫酸產(chǎn)生碳酸銨，最后再加入過量的堿溶液，在蒸餾過程中使其中的氨游離，在硼酸吸收液接收后用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量計(jì)算其中蛋白質(zhì)的含量。

2 樣品消化

（1）消化反應(yīng)方程式

H2SO₄+2NH₃=（NH₄）2SO₄

加入硫酸鉀可提高溶液的沸點(diǎn)，進(jìn)而加快有機(jī)物的分解。

K₂SO₄+H₂SO₄=2KHSO₄

加入硫酸銅起到催化的作用

Cu₂SO₄+2H2SO₄→2CuSO₄+2H₂O+SO₂↑

（2）蒸餾

氨是否完全蒸餾出來，是決定最后滴定的準(zhǔn)確性一步，可將蒸餾液用pH試紙來定性是否為堿性。放出氨氣，吸收、滴定。

2NaOH+（NH₄）2SO₄=2NH₃↑+Na₂SO₄+2H₂O

（NH₄）2B₄O₇+5H₂O+2HCl=2NH₄Cl+4H₃BO₃

3 操作方法

（1）準(zhǔn)確稱取飼料原料樣品1g～2g（精確到0.1mg），將燒杯中加入50ml無氮蒸餾水，稱取準(zhǔn)確的樣品放入燒杯中，放在電爐上一邊加熱一邊攪拌，緩慢加入硫酸銅溶液至沸騰，再緩慢加入氫氧化鈉溶液一起攪拌均勻，將此溶液靜止放置2小時(shí)以上，將濾紙放于漏斗上，用蒸餾水洗凈沉淀物及殘?jiān)篂V紙上的沉淀物無硫酸根離子。連同漏斗一起放入80℃干燥箱中烘干，將濾紙和沉淀物小心放入消化管中加入6.4g催化劑、15ml濃硫酸，在消化器上消化，樣液澄清后繼續(xù)消煮2h，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。

（2）取下消化管，用少量蒸餾水洗凈管口，放置到自動(dòng)凱氏定氮儀上，連接加堿電鈕，將硼酸吸收液中放入幾滴指示劑搖勻后放置在蒸餾器出口處，使蒸餾口完全浸入吸收液中。自動(dòng)蒸餾過程中注意蒸餾加堿反應(yīng)速度，堿液不易過濃，蒸餾速度不易太快，防止消化液逆流到廢液桶里。蒸餾液蒸餾過程中輕搖混勻后，將三角瓶離開蒸餾口中，用蒸餾水少量清洗冷凝管末端，繼續(xù)蒸餾至150ml左右，蒸餾結(jié)束。

（3）試樣滴定：將蒸餾液搖勻后用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，滴定終點(diǎn)由灰藍(lán)色變成藍(lán)紫色。

（4）結(jié)果計(jì)算：

真蛋白（%）=（V₂-V₁）×C×0.0140×6.25×100/M

表1為飼料原料魚粉中真蛋白測(cè)定結(jié)果，用來鑒別摻假魚粉。

4 結(jié)論

魚粉中真蛋白與粗蛋白的比列為80%，國(guó)產(chǎn)魚粉中真蛋白與粗蛋白的比列為75%。飼料中蛋白質(zhì)含量的多少直接影響動(dòng)物在喂養(yǎng)過程中蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分的攝取，所以在飼料及其原料的蛋白質(zhì)檢測(cè)過程中，對(duì)于每一個(gè)檢測(cè)環(huán)節(jié)都應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真，使檢測(cè)的蛋白含量準(zhǔn)確無誤，為動(dòng)物飼料的鑒定和定量起到一定指導(dǎo)分析作用。

作者簡(jiǎn)介

辛欣，從事食品檢驗(yàn)工作11年，現(xiàn)任錦州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所樣品室主任。

（責(zé)任編輯：張曉明）