細野蕎水提液清除活性氧的效果

鄧琳瓊+趙菲菲+張以忠

摘要：用NBT光化還原法、Fenton反應法、鉬酸銨顯色分光光度法對細野蕎莖、葉水提液清除羥基自由基（·OH）、超氧陰離子自由基（ O-2· ）、過氧化氫（H2O2）的能力進行研究。結果表明：細野蕎莖、葉水提液對·OH的最高清除率分別為93.62%、76.63%，平均清除率分別68.38%、39.37%；細野蕎莖、葉水提液對 O-2· 的最高清除率分別為98.45%、73.32%，平均清除率分別79.04%、48.25%；細野蕎莖、葉水提液對H2O2的清除作用相對較弱，最高清除率僅分別為31.44%、12.34%，平均清除率僅分別為20.19%、7.39%；且莖和葉對·OH、 O-2· 、H2O2的清除作用差異顯著。

關鍵詞：細野蕎；活性氧；·OH； O-2· ；H2O2

中圖分類號：R284.1 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0298-03

活性氧（reactive oxygen species，ROS）是指生物體內有氧代謝過程中或在外界物理、化學因素誘導下產生的含有氧原子且氧化能力很強的多種物質總稱^[1-3]，主要有超氧陰離子自由基（ O-2· ）、羥基自由基（·OH）、過氧化氫（H2O2）等。它們在生命活動的代謝過程中不斷產生，與生物體衰老及許多疾病發生都有重要關系^[4-9]。現代醫學研究證明，衰老、癌癥、炎癥等疾病與體內脂質過氧化和自由基有直接關系，因此應用抗氧化物質來保持人體健康和預防疾病的研究越來越受到科學家關注[4，7，10]。蕎麥屬于蓼科（Polygonaceae）蕎麥屬（Fagopyrum），種植適應性強，屬于藥食兩用植物^[11-12]。因蕎麥含有黃酮、蛋白質、原花青素、膳食纖維等功效分子，具有降糖、抗缺血、抗氧化、抗菌、抗癌、助睡眠等保健功能[11，13]。目前，對蕎麥清除活性氧的研究較少，且主要集中在甜蕎（F. esculentum Moench）和苦蕎[F. tataricum（L.）Gaertn.]2個栽培種上。姚亞平等研究發現，甜蕎和苦蕎的乙醇提取物對DPPH自由基和羥自由基均有顯著抗氧化作用，且呈劑量效應關系^[14]。何永艷等研究發現，甜蕎和苦蕎的乙醇提取物均有較強的抗氧化活性和明顯的自由基清除效果^[15]。而對野生蕎麥清除活性氧的研究還未見報道。本研究考察了野生蕎麥細野蕎[F. gracilipes （Hemsl） Dammer ex Diels]的莖、葉水提液對·OH、 O-2· 、H2O2等活性氧的清除作用，以期為蕎麥食品、保健品、化妝品的開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

供試細野蕎于2012年7月采自貴州省畢節市七星關區鴨池鎮。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備

取細野蕎植株的莖、葉，用蒸餾水洗凈，40 ℃ 下恒溫烘干至恒重，打粉，稱重。分別加干質量40、45倍的蒸餾水，80 ℃、140 r/min振蕩1 h，過濾收集濾液，對殘渣分別再加25倍蒸餾水，80 ℃、140 r/min振蕩1 h，過濾收集濾液，合并2次濾液，即為細野蕎莖、葉的水提取液，莖、葉提取液濃度分別為80、61.5 g/L，將其儲存冰箱備用。

1.2.2 水提液對活性氧的清除試驗 參照龔寧等的方法^[16-17]并稍加改動，測定水提液對活性氧的清除效果。

1.2.2.1 細野蕎各器官水提液對·OH的清除試驗

對樣品的莖、葉均設5個濃度梯度處理（0.094、0.188、0.282、0.376、0.470 g/L），分別測定各濃度梯度處理下的清除率。反應體系總體積為3 mL，含pH值7.4的PBS 0.75 mL、2 mmol/L EDTA Na2-Fe（Ⅱ）1 mL、70 mg/L番紅花紅T 0.5 mL、不同濃度供試液0.25 mL、體積分數0.33%的H2O2 0.5 mL。將其充分混勻，置于37 ℃恒溫水浴鍋中保溫 30 min，用723 N分光光度計于520 nm波長處測吸光度（D），加不同濃度供試液的體系吸光度為D樣品，以提取介質代替供試液的體系吸光度為D空白，兩者均以未加EDTA Na2-Fe（Ⅱ）（用蒸餾水代替）作對照，各自與其對照之差分別記為ΔD樣品、ΔD空白。供試液對·OH的清除能力以清除率（E）表示：

點^[15]。目前已在栽培蕎麥[12，14-15]、花葉開唇蘭^[17]、南瓜^[21]、少花龍葵^[22]、葡萄^[23]、拳參^[24]、荔枝^[25]等植物上進行了相關研究，證明其提取物具有較強的清除活性氧作用，為尋找安全、清除活性氧的天然制劑提供了理論依據。

本研究首次對蕎麥屬野生蕎麥細野蕎不同器官清除活性氧（·OH、 O-2· 、H2O2）作用進行研究，結果發現，細野蕎莖、葉水提液對·OH、 O-2· 均具有較強的清除作用，最高清除率分別為93.62%、76.63%和73.32%、98.45%；而對H2O2的清除能力相對較低，最高清除率僅分別為31.44%、12.34%。另外，細野蕎不同器官水提液對自由基的清除能力不同。對于·OH和H2O2，細野蕎莖水提液的清除率均顯著高于葉；而對于 O-2· ，細野蕎葉水提液的清除率顯著高于莖。以往研究認為，·OH、 O-2· 、H2O2等自由基中，·OH是對生物體毒性最強、危害最大的自由基，對·OH的清除率是反映藥物抗氧化作用的重要指標[15，26]，因此常用清除·OH的能力來評價一種物質對自由基的清除效果。本研究中細野蕎莖、葉水提液對H2O2具有一定的清除作用，而對·OH和 O-2· 均具有較強的清除能力，表明細野蕎莖、葉對自由基具有很好的清除效果。endprint

細野蕎是蕎麥屬中一個野生種，廣泛分布于我國，作為一種潛在的天然抗氧化制劑原料，具有很大的開發應用價值。本研究結果對于細野蕎在保健品、化妝品及其深加工等方面均有一定的理論和實際意義。

參考文獻：

[1]楊 玲，許 速. 氧化應激與疾病發生的相關性[J]. 西南國防醫藥，2012，22（11）：1268-1270.

[2]Gill S S，Tuteja N. Reactive oxygen species and antioxidant machinery in abiotic stress tolerance in crop plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry，2010，48（12）：909-930.

[3]Chen Y，Azad M B，Gibson S B. Superoxide is the major reactive oxygen species regulating autophagy[J]. Cell Death and Differentiation，2009，16（7）：1040-1052.

[4]方允中，鄭榮梁. 自由基生物學的理論與應用[M]. 北京：科學出版社，2002：327-329.

[5]趙保路. 自由基、天然抗氧化劑與神經退行性疾病[J]. 生物物理學報，2010，26（4）：263-274.

[6]Chen Y，Xie M Y，Nie S P，et al. Purification，composition analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of Ganoderma atrum[J]. Food Chemistry，2008，107（1）：231-241.

[7]Ali S，Choudhary M I，Rahman A U. Superoxide anion radical，an important target for the discovery of antioxidants[J]. Atherosclerosis Supplements，2008，9（1）：268.

[8]左 玉. 自由基、活性氧與疾病[J]. 糧食與油脂，2011（9）：9-11.

[9]張獻忠，黃海智，鐘烈洲，等. 植物提取物體外抗氧化活性評價方法研究進展[J]. 中國糧油學報，2012，27（11）：122-128.

[10]劉微微，任 虹，曹學麗，等. 天然產物抗氧化活性體外評價方法研究進展[J]. 食品科學，2010，31（17）：415-419.

[11]張以忠，陳慶富. 蕎麥研究的現狀與展望[J]. 種子，2004，23（3）：39-42.

[12]任順成，孫軍濤. 蕎麥粉、皮、芽中黃酮類化合物抗氧化研究[J]. 河南工業大學學報：自然科學版，2008，29（2）：15-17，21.

[13]趙秀玲. 蕎麥的功效因子與保健功能的研究進展[J]. 食品工程，2011（3）：16-18.

[14]姚亞平，曹 煒，陳衛軍，等. 不同品種蕎麥提取物抗氧化作用的研究[J]. 食品科學，2006，27（11）：49-52.

[15]何永艷，馮佰利，鄧 濤，等. 蕎麥提取物抗氧化活性研究[J]. 西北農業學報，2007，16（6）：76-79，84.

[16]龔 寧，鄧琳瓊，曾 坤. 金線蘭各器官水提液清除·OH和 O-2· 的比較研究[J]. 食品與生物技術學報，2010，29（6）：821-824.

[17]龔 寧，鄧琳瓊，唐蘭秀，等. 花葉開唇蘭清除活性氧作用研究[J]. 中藥藥理與臨床，2006，22（2）：39-41.

[18]孫存普，張建中，段紹謹. 自由基生物學導論[M]. 合肥：中國科學技術大學出版社，1999：1-15.

[19]Kaliora A C，Dedoussis G V. Natural antioxidant compounds in risk factors for CVD[J]. Pharmacological Research，2007，56（2）：99-109.

[20]Valko M，Leibfritz D，Moncol J，et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology，2007，39（1）：44-84.

[21]柳 紅，張 靜. 不同南瓜多糖體外清除羥基自由基作用的研究[J]. 武漢植物學研究，2007，25（4）：356-359.

[22]賢景春，鄭鑫源，陳明真. 少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J]. 江蘇農業科學，2012，40（8）：275-277.

[23]張澤生，李博軒，王 冀. 葡萄皮中花色苷的體外抗氧化研究[J]. 食品研究與開發，2007，28（2）：148-151.

[24]吳璐璐，許劍鋒，趙 勇. 拳參乙醇提取物和水提取物體外抗菌和抗氧化活性[J]. 江蘇農業科學，2013，41（5）：246-249.

[25]熊何健，鄭建華，吳國宏，等. 荔枝多酚的分離制備及清除DPPH活性[J]. 食品科學，2006，27（7）：86-88.

[26]鐘希瓊，謝嘉虹，張英慧. 野生薯蕷膳食纖維的提取及對自由基的清除作用[J]. 糧油食品科技，2012，20（6）：16-18.endprint

細野蕎是蕎麥屬中一個野生種，廣泛分布于我國，作為一種潛在的天然抗氧化制劑原料，具有很大的開發應用價值。本研究結果對于細野蕎在保健品、化妝品及其深加工等方面均有一定的理論和實際意義。

參考文獻：

[1]楊 玲，許 速. 氧化應激與疾病發生的相關性[J]. 西南國防醫藥，2012，22（11）：1268-1270.

[2]Gill S S，Tuteja N. Reactive oxygen species and antioxidant machinery in abiotic stress tolerance in crop plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry，2010，48（12）：909-930.

[3]Chen Y，Azad M B，Gibson S B. Superoxide is the major reactive oxygen species regulating autophagy[J]. Cell Death and Differentiation，2009，16（7）：1040-1052.

[4]方允中，鄭榮梁. 自由基生物學的理論與應用[M]. 北京：科學出版社，2002：327-329.

[5]趙保路. 自由基、天然抗氧化劑與神經退行性疾病[J]. 生物物理學報，2010，26（4）：263-274.

[6]Chen Y，Xie M Y，Nie S P，et al. Purification，composition analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of Ganoderma atrum[J]. Food Chemistry，2008，107（1）：231-241.

[7]Ali S，Choudhary M I，Rahman A U. Superoxide anion radical，an important target for the discovery of antioxidants[J]. Atherosclerosis Supplements，2008，9（1）：268.

[8]左 玉. 自由基、活性氧與疾病[J]. 糧食與油脂，2011（9）：9-11.

[9]張獻忠，黃海智，鐘烈洲，等. 植物提取物體外抗氧化活性評價方法研究進展[J]. 中國糧油學報，2012，27（11）：122-128.

[10]劉微微，任 虹，曹學麗，等. 天然產物抗氧化活性體外評價方法研究進展[J]. 食品科學，2010，31（17）：415-419.

[11]張以忠，陳慶富. 蕎麥研究的現狀與展望[J]. 種子，2004，23（3）：39-42.

[12]任順成，孫軍濤. 蕎麥粉、皮、芽中黃酮類化合物抗氧化研究[J]. 河南工業大學學報：自然科學版，2008，29（2）：15-17，21.

[13]趙秀玲. 蕎麥的功效因子與保健功能的研究進展[J]. 食品工程，2011（3）：16-18.

[14]姚亞平，曹 煒，陳衛軍，等. 不同品種蕎麥提取物抗氧化作用的研究[J]. 食品科學，2006，27（11）：49-52.

[15]何永艷，馮佰利，鄧 濤，等. 蕎麥提取物抗氧化活性研究[J]. 西北農業學報，2007，16（6）：76-79，84.

[16]龔 寧，鄧琳瓊，曾 坤. 金線蘭各器官水提液清除·OH和 O-2· 的比較研究[J]. 食品與生物技術學報，2010，29（6）：821-824.

[17]龔 寧，鄧琳瓊，唐蘭秀，等. 花葉開唇蘭清除活性氧作用研究[J]. 中藥藥理與臨床，2006，22（2）：39-41.

[18]孫存普，張建中，段紹謹. 自由基生物學導論[M]. 合肥：中國科學技術大學出版社，1999：1-15.

[19]Kaliora A C，Dedoussis G V. Natural antioxidant compounds in risk factors for CVD[J]. Pharmacological Research，2007，56（2）：99-109.

[20]Valko M，Leibfritz D，Moncol J，et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology，2007，39（1）：44-84.

[21]柳 紅，張 靜. 不同南瓜多糖體外清除羥基自由基作用的研究[J]. 武漢植物學研究，2007，25（4）：356-359.

[22]賢景春，鄭鑫源，陳明真. 少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J]. 江蘇農業科學，2012，40（8）：275-277.

[23]張澤生，李博軒，王 冀. 葡萄皮中花色苷的體外抗氧化研究[J]. 食品研究與開發，2007，28（2）：148-151.

[24]吳璐璐，許劍鋒，趙 勇. 拳參乙醇提取物和水提取物體外抗菌和抗氧化活性[J]. 江蘇農業科學，2013，41（5）：246-249.

[25]熊何健，鄭建華，吳國宏，等. 荔枝多酚的分離制備及清除DPPH活性[J]. 食品科學，2006，27（7）：86-88.

[26]鐘希瓊，謝嘉虹，張英慧. 野生薯蕷膳食纖維的提取及對自由基的清除作用[J]. 糧油食品科技，2012，20（6）：16-18.endprint

細野蕎是蕎麥屬中一個野生種，廣泛分布于我國，作為一種潛在的天然抗氧化制劑原料，具有很大的開發應用價值。本研究結果對于細野蕎在保健品、化妝品及其深加工等方面均有一定的理論和實際意義。

參考文獻：

[1]楊 玲，許 速. 氧化應激與疾病發生的相關性[J]. 西南國防醫藥，2012，22（11）：1268-1270.

[2]Gill S S，Tuteja N. Reactive oxygen species and antioxidant machinery in abiotic stress tolerance in crop plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry，2010，48（12）：909-930.

[3]Chen Y，Azad M B，Gibson S B. Superoxide is the major reactive oxygen species regulating autophagy[J]. Cell Death and Differentiation，2009，16（7）：1040-1052.

[4]方允中，鄭榮梁. 自由基生物學的理論與應用[M]. 北京：科學出版社，2002：327-329.

[5]趙保路. 自由基、天然抗氧化劑與神經退行性疾病[J]. 生物物理學報，2010，26（4）：263-274.

[6]Chen Y，Xie M Y，Nie S P，et al. Purification，composition analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of Ganoderma atrum[J]. Food Chemistry，2008，107（1）：231-241.

[7]Ali S，Choudhary M I，Rahman A U. Superoxide anion radical，an important target for the discovery of antioxidants[J]. Atherosclerosis Supplements，2008，9（1）：268.

[8]左 玉. 自由基、活性氧與疾病[J]. 糧食與油脂，2011（9）：9-11.

[9]張獻忠，黃海智，鐘烈洲，等. 植物提取物體外抗氧化活性評價方法研究進展[J]. 中國糧油學報，2012，27（11）：122-128.

[10]劉微微，任 虹，曹學麗，等. 天然產物抗氧化活性體外評價方法研究進展[J]. 食品科學，2010，31（17）：415-419.

[11]張以忠，陳慶富. 蕎麥研究的現狀與展望[J]. 種子，2004，23（3）：39-42.

[12]任順成，孫軍濤. 蕎麥粉、皮、芽中黃酮類化合物抗氧化研究[J]. 河南工業大學學報：自然科學版，2008，29（2）：15-17，21.

[13]趙秀玲. 蕎麥的功效因子與保健功能的研究進展[J]. 食品工程，2011（3）：16-18.

[14]姚亞平，曹 煒，陳衛軍，等. 不同品種蕎麥提取物抗氧化作用的研究[J]. 食品科學，2006，27（11）：49-52.

[15]何永艷，馮佰利，鄧 濤，等. 蕎麥提取物抗氧化活性研究[J]. 西北農業學報，2007，16（6）：76-79，84.

[16]龔 寧，鄧琳瓊，曾 坤. 金線蘭各器官水提液清除·OH和 O-2· 的比較研究[J]. 食品與生物技術學報，2010，29（6）：821-824.

[17]龔 寧，鄧琳瓊，唐蘭秀，等. 花葉開唇蘭清除活性氧作用研究[J]. 中藥藥理與臨床，2006，22（2）：39-41.

[18]孫存普，張建中，段紹謹. 自由基生物學導論[M]. 合肥：中國科學技術大學出版社，1999：1-15.

[19]Kaliora A C，Dedoussis G V. Natural antioxidant compounds in risk factors for CVD[J]. Pharmacological Research，2007，56（2）：99-109.

[20]Valko M，Leibfritz D，Moncol J，et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology，2007，39（1）：44-84.

[21]柳 紅，張 靜. 不同南瓜多糖體外清除羥基自由基作用的研究[J]. 武漢植物學研究，2007，25（4）：356-359.

[22]賢景春，鄭鑫源，陳明真. 少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J]. 江蘇農業科學，2012，40（8）：275-277.

[23]張澤生，李博軒，王 冀. 葡萄皮中花色苷的體外抗氧化研究[J]. 食品研究與開發，2007，28（2）：148-151.

[24]吳璐璐，許劍鋒，趙 勇. 拳參乙醇提取物和水提取物體外抗菌和抗氧化活性[J]. 江蘇農業科學，2013，41（5）：246-249.

[25]熊何健，鄭建華，吳國宏，等. 荔枝多酚的分離制備及清除DPPH活性[J]. 食品科學，2006，27（7）：86-88.

[26]鐘希瓊，謝嘉虹，張英慧. 野生薯蕷膳食纖維的提取及對自由基的清除作用[J]. 糧油食品科技，2012，20（6）：16-18.endprint