液相色譜—質譜法檢測油菜子、植株和土壤中三唑醇的殘留

摘要：建立液相色譜-質譜法檢測油菜子、植株和土壤中三唑醇殘留量的方法。油菜子和植株經乙腈提取，經Carbon/NH2柱凈化，實現樣品的制備；土壤則經乙腈提取濃縮后直接檢測。在島津VP-ODS色譜柱上，以乙腈+0.1%甲酸水為流動相，梯度洗脫，采用電噴霧正離子（ESI+）sim掃描離子模式，以m/z 296為定量檢測離子。結果表明，三唑醇保留時間在11.9 min左右。在0.02～2.00 mg/L的濃度范圍內呈良好的線性關系，其相關系數為0.999 7。在油菜子、植株、土壤中添加0.02、0.20、2.0 mg/kg 3個濃度的三唑醇標樣，其回收率為71%～110%，相對標準偏差（n=5）均小于10%，最低檢出量（S/N=10）為1.7×10-9 g。該方法準確度和精密度均能滿足檢測要求。

關鍵詞：三唑醇；殘留；液相色譜-質譜；油菜子；土壤

中圖分類號：O657.63 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）22-5934-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.22.051

Determination of Triadimenol Residue in Rapeseed，Plants and Soil by LC-MS

LIU Jun，CHENG Yun-bin，LIU Qian，SHEN Jing

（Agricultural Quality Standards and Inspection Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Science，Wuhan 430064，China）

Abstract：A method for determination of triadimenol residue in rapeseed，plants and soil was established by LC-MS. Triadimenol residue was extracted from sample with acetonitrile，cleaned up by ProElut CARB/NH2 SPE to achieve sample preparation，and separatesd on the Shimadzu VP-ODS column，using a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid solution as mobile phase. Determination was made by using ESI and under the mode of SIM. Quectionantitative detection of ions at m/z 296，the retention time of pyraclostrobin was about 11.9 min. Linearity were held in the ranges of 0.02～2.00 mg/L with the correlation coefficient for 0.999 7. The average recoveries of triadimenol in rapeseed，plants and soil at the spiked amounts of 0.02～2.00 mg/kg were 71%～110%，and the relative standard deviation was lower than 10%. The limit of detectable amount（S/N=10） was 1.7×10-9 g. The accuracy and precision of this method can meet the determinate requirements.

Key words： triadimenol； residue； LC-MS； rapeseed； soil

三唑醇（Triadimenol），又名百坦，屬于高效、廣譜的三唑類殺菌劑。目前，關于三唑醇的檢測方法有黃超群等[1]用液相色譜-串聯質譜法同時測定蔬菜中7種三唑醇類殺菌劑的殘留量；沈偉健等[2]采用固相分散萃取與氣相色譜-負化學離子源質譜聯用法測定食品中三唑醇的殘留量；徐穎潔[3]采用SPE-GC-μECD測定蔬菜中6種三唑類農藥的殘留量；分子印記法[4，5]以及大豆植株[6]、玉米植株[7]、大豆[8]、玉米[9]、香蕉[10，11]、煙葉[12]、小麥[13]、土壤[14]、水[15，16]、酒精飲料[17-19]等介質中的殘留均有研究，但未有在油菜子中殘留檢測的報道。本研究檢測方法是為了解三唑醇在防治油菜作物菌核病后，油菜子、植株和土壤中三唑醇的殘留量水平，其針對性更強。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

LC-20AD型液相色譜儀（日本島津公司），配有LC-MS 2010 EV型質譜檢測器和電噴霧電離源，自動進樣器，LC-MS工作站。

三唑醇（98%，江蘇劍牌農化有限公司），甲醇、乙腈（色譜純，美國Baker公司），甲酸（99.0%，美國Acros Organics公司），氯化鈉（分析純，國藥集團化學試劑有限公司），超純水用Barnstead超純水機制備，其他試劑均為分析純。

1.2 樣品前處理

油菜子：準確稱取磨碎的油菜子樣品5.0 g，先加10 mL純水充分浸潤，再加入30 mL乙腈，搖勻超聲15 min，加入5.0 g NaCl 搖勻后超聲5 min， 3 500 r/min離心5 min。移取上清液12 mL于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發近干，加入2 mL乙腈/甲苯（3/1，V∶V，下同）待凈化。

油菜植株：準確稱取攪碎的油菜植株樣品10.0 g，加入30 mL 乙腈，14 000 r/min勻質2 min，加入5.0 g NaCl再14 000 r/min勻質1 min，3 500 r/min離心5 min。移取上清液6 mL于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發近干，加入2 mL乙腈/甲苯（3/1）待凈化。

土壤：準確稱取晾干磨碎的土壤樣品5.0 g，加入10 mL純水充分浸潤，加入30 mL乙腈，劇烈搖勻，超聲15 min，加入5.0 g NaCl搖勻后再超聲5 min，3 500 r/min離心5 min。移取上清液12 mL于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發近干，加入2 mL乙腈溶解過膜待檢測。

1.3 樣品凈化

用5 mL乙腈/甲苯（3/1）預淋洗Carbon/NH2柱（1 000 mg，6 mL），待淋洗液近干時迅速將油菜子、油菜植株的待凈化液轉移其中，10 mL乙腈/甲苯（3/1）淋洗，淋洗液收集于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發近干，加入2 mL乙腈溶解過膜待檢測。

1.4 液相色譜-質譜條件

色譜柱：島津VP-ODS（150 mm×2.0 mm，5 μm）；流動相采用含0.1%甲酸的水-乙腈，梯度洗脫（表1）；流速0.2 mL/min；進樣體積5 μL；柱溫40 ℃；離子源ESI（+），SIM掃描模式（m/z 296）；CDL溫度250 ℃； 加熱模塊溫度200 ℃；霧化氣流速（N2）1.5 L/min；干燥氣（N2）壓力80 kPa；檢測電壓1.75 V。

2 結果與分析

2.1 定量離子的選擇

在上述色譜條件下選擇Scan（+）模式，進10 mg/L的三唑醇標樣溶液，掃描范圍m/z 150～350，得到全掃描質譜圖（圖1）。由圖1可見，m/z 296（M+H）的為目標離子，所以選擇m/z 296為定量離子。以m/z 296為定量離子采用Sim（+）模式，油菜子中的三唑醇的添加回收、標樣質譜以及空白質譜見圖2，油菜植株的質譜見圖3，土壤中的質譜見圖4。

2.2 線性范圍和檢出限

配制濃度為0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L三唑醇標樣，以m/z 296質量色譜圖峰面積為縱坐標，以對應的三唑醇質量濃度（mg/L）為橫坐標，繪制標準曲線（圖5）。其線性回歸方程為Y=1.082×10-7X+89 220，線性相關系數r2=0.999 7。按 S/N=10的信噪比計算三唑醇最低檢出量為1.7×10-9 g。

2.3 SPE凈化柱淋洗溶劑體積的選擇

在空白油菜子5.0 g、油菜植株10.0 g中添加0.2 mg/kg的三唑醇標樣，按上述方法提取，樣品凈化時淋洗溶劑乙腈/甲苯（3/1）的體積按每次5 mL，共5次，分開收集，分別蒸發近干、定容，0.22 μm濾膜過濾，質譜檢測，檢測數據結果見表2。由表2可見，選擇10 mL為最佳淋洗體積。

2.4 方法的添加回收率、精確度和最小檢出濃度

利用未施藥的油菜子、油菜植株、土壤樣品作為空白樣品，分別添加0.02、0.2、2.0 mg/kg 3個水平，每個水平5次重復，檢測結果見表3。從表3可見，添加樣品中三唑醇加標回收率為71%～110%，相對標準偏差（RSD）為1.5%～9.6%。以最小添加濃度0.02 mg/kg作為最小檢出濃度，其回收率、相對標準偏差和最小檢測濃度都能滿足農藥登記殘留試驗的要求。

3 結論

本研究采用乙腈提取，Carbon/NH2柱凈化，液相色譜-質譜法檢測三唑醇在油菜子、油菜植株、土壤中的殘留，該方法操作簡單，其添加回收率、精確度和最小檢出濃度均能達到農藥登記殘留試驗的要求。

參考文獻：

[1] 黃超群，丁慧瑛，朱曉雨，等.液相色譜-串聯質譜法同時測定蔬菜中7種三唑醇類殺菌劑的殘留量[J].分析測試學報，2011，30（6）：656-660.

[2] 沈偉健，林 宏，趙增運，等.固相分散萃取與氣相色譜-負化學離子源質譜聯用法測定食品中三唑醇的殘留量[J].色譜，2008， 26（4）：515-518.

[3]徐穎潔.SPE-GC-μECD測定蔬菜中6種三唑類農藥的殘留量[J].安徽農業科學，2014，42（18）：5813-5815.

[4] 胡 靜，褚建功，高文惠.三唑醇分子印跡聚合物的制備及在食品檢測中的應用[J].藥物分析雜志，2011，31（12）：2260-2265.

[5] 劉麗梅，李志偉，于奕峰，等.三唑醇分子印跡整體柱用于結構類似物的分離與分析[J].農藥，2007，46（10）：677-678.

[6] 李俊凱，王 勇，程 玲.氣相色譜法測定大豆植株中三唑醇殘留量研究[J].長江大學學報，2008，5（3）：58-59.

[7] 張偉國，陳姍姍，高金山，等.玉米植株中三唑酮、三唑醇-a、三唑醇-b殘留量測定[J].農藥，2005，44（7）：324-325.

[8] 李春風，沈偉健，蔣 原，等.分散固相萃取氣相色譜-負化學離子源質譜法測定大豆和玉米中20種農藥的殘留量[J].色譜，2009，27（2）：176-180.

[9] 沈偉健，桂茜雯，余可垚，等.氣相色譜-負化學離子源質譜測定大豆和玉米中12種三唑類殺菌劑的殘留量[J].色譜，2009，27（1）：91-95.

[10] 王明月，林靖凌.超高效液相色譜串聯質譜法測定香蕉中的三唑醇殘留[J].食品科學，2011，32（12）：292-295.

[11] 羅金輝，王明月.優化氣相色譜法測定香蕉中三唑醇殘留量[J].農藥，2011，50（2）：128-129.

[12] 陳 萍，師君麗，孔光輝，等.煙葉中三唑酮、三唑醇-a、三唑醇-b殘留量的GC-MS檢測[J].光譜實驗室，2013，30（4）：1990-1993.

[13] 王 軍，萬 宇，陳 楓，等.三唑醇在京皖兩地小麥和土壤中殘留動態研究[J].農藥科學與管理，2007，28（8）：14-17.

[14] 王 軍，邊俠玲，萬 宇，等.麥田環境中三唑醇殘留行為及其安全性評價[J].安徽農業大學學報，2009，36（4）：666-669.

[15] WANG C，WU Q H，WU C X，et al. Application of dispersion-solidification liquid-liquid microextraction for the determination of triazole fungicides in environmental water samples by high-performance liquid chromatography[J].Journal of Hazardous Materials，2011，185：71-76.

[16] SAMPEDRO M C，MART？魱N O，L？魷PEZ DE ARMENTIA C， et al. Solid-phase microextraction for the determination of systemic and non-volatile pesticides in river water using gas chromatography with nitrogen-phosphorous and electron-capture detection[J].Journal of Chromatography A，2000，893：347-358.

[17] PLAZA BOLA■OS P，ROMERO-GONZ？魣LEZ R，GARRIDO FRENICH A，et al. Application of hollow fibre liquid phase microextraction for the multiresidue determination of pesticides in alcoholic beverages by ultra-high pressure liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2008，1208：16-24.

[18] NOZAL M J，BERNAL J L，JIM？魪NEZ J J，et al. Determination of azolic fungicides in wine by solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionization-mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2005，1076：90-96.

[19] MILL？魣N S，SAMPEDRO M，Cunceta N，et al. Coupling solid-phase microextraction and high-performance liquid chromatography for direct and sensitive determination of halogenated fungicides in wine[J].Journal of Chromatography A，2003，995：135-142.