萍鄉(xiāng)地區(qū)RhD陰性人群基因多態(tài)性分析

Rh血型系統(tǒng)是紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最為復(fù)雜的血型系統(tǒng)之一，具有復(fù)雜的遺傳多態(tài)性，其臨床意義僅此于ABO血型系統(tǒng)。Rh血型系統(tǒng)目前已發(fā)現(xiàn)49種抗原，以C、e、D、E、e這5種抗原在臨床上最為重要，尤其是D抗原，它是除ABO血型系統(tǒng)外最強(qiáng)的紅細(xì)胞抗原，具有極強(qiáng)的免疫原性，是造成遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)最常見的原因[1]。因此，鑒定RhD抗原表型被列為臨床輸血檢測(cè)常規(guī)項(xiàng)目[1]。編碼Rh血型抗原為2個(gè)高度同源性的基因：RhD基因和RhCE基因。RhD編碼D抗原，RhCE編碼CcEe抗原。近年來，有些研究發(fā)現(xiàn)一些血清學(xué)初篩陰性的個(gè)體經(jīng)進(jìn)一步檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)一部分人有D抗原的存在。因此，為了解萍鄉(xiāng)地區(qū)Rh陰性人群基因多態(tài)性狀態(tài)，經(jīng)序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-SSP）方法進(jìn)行基因?qū)W檢測(cè)，比較血清學(xué)結(jié)果與基因?qū)W結(jié)果的異同。

1資料與方法

1.1一般資料 收集我院2011年5月～2015年1月住院及門診患者2035例標(biāo)本進(jìn)行了RhD抗原檢測(cè)，RhD陰抗原性率為0.88%[2]，對(duì)130例RhD陰性標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè)，其中男性60例，女70例，年齡20～75歲。標(biāo)本為采用EDTA抗凝的全血3 ml。

1.2儀器與試劑 美國(guó)ABI 9700 PCR擴(kuò)增儀，Thermo離心機(jī)。Alphalmager凝膠成像系統(tǒng)，Tanon EPS 300電泳儀，紫外分光光度計(jì)，日本富士DNA提取試劑盒，天津秀鵬生物技術(shù)有限公司的RhD基因檢測(cè)試劑盒，江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司的RhD血型定型試劑。

1.3方法

1.3.1RhD血型血清學(xué)鑒定 將血樣混勻洗滌3次，配成5%紅細(xì)胞懸液，取1滴加入試管中，再向試管中加入2滴IgG的抗D試劑，37℃孵育30 min。然后用生理鹽水反復(fù)洗滌3次，棄上清液，再加入廣譜抗人球蛋白試劑，1000 r/min離心1min，觀察結(jié)果。有凝集者為RhD陽(yáng)性，無凝集者為RhD陰性。……