CMTM3在結直腸癌組織中的表達及意義

宋文韜，孫燕來，徐忠法

(濟南大學·山東省醫學科學院生命與科學學院·山東省腫瘤醫院，濟南250000)

CMTM3在結直腸癌組織中的表達及意義

宋文韜，孫燕來，徐忠法

(濟南大學·山東省醫學科學院生命與科學學院·山東省腫瘤醫院，濟南250000)

目的 探討趨化素樣因子樣MRVEL跨膜結構域超家族成員3(CMTM3)在結直腸癌發生、發展中的作用。方法 采用免疫組化法檢測104例份結直腸癌組織及其配對癌旁正常組織中CMTM3表達，分析結直腸癌組織中CMTM3表達與患者臨床病理參數的關系。結果 CMTM3在結直腸癌組織及癌旁正常組織中的陽性表達率分別為15.4%(16/104)、100%(104/104)，二者比較P<0.01。結直腸癌組織CMTM3陽性表達與腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期及腫瘤類型有關(P均<0.05)，與患者性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結轉移、合并腸道多發息肉及便血無關(P均>0.05)。結論 結直腸癌組織中CMTM3表達降低，其表達降低可促進結直腸癌的發生、發展。

結直腸癌；趨化素樣因子樣MRVEL跨膜結構域超家族成員3；免疫組化

目前尚無可準確預測結直腸癌復發和轉移的分子標記物。趨化素樣因子(CKLF)樣MRVEL跨膜結構域超家族(CMTM)是2003年北京大學發現的一個新基因家族，該家族包括9個基因，即CKLF和CMTM 1～8。CKLF和CMTM 1～4在人類染色體16q22上形成一個基因簇，CMTM 6～8在3q22形成一個基因簇，CMTM5獨立定位與14q11.2。因腫瘤患者上述染色體區域常缺失，故該區域被認為是富含抑癌基因的區域。CMTM3定位于抑癌基因富集區，在正常組織中高表達，在腫瘤組織中表達下調或缺失，其啟動子區的CpG島存在甲基化修飾，在腫瘤細胞中恢復其表達，可抑制腫瘤細胞增殖、遷移，甚至啟動細胞凋亡。研究發現，CMTM3在多種腫瘤(如胃癌、乳腺癌等)組織中表達被抑制甚至缺失[1]。但其在結直腸癌組織中的表達情況鮮見報道。本研究觀察CMTM3在結直腸癌組織中的表達情況，探討其在結直腸癌發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年10月～2015年10月在山東省腫瘤醫院行結直腸癌根治性切除術患者104例，男62例、女42例，年齡<50歲者18例、≥50歲者86例。所有患者經術后組織病理檢查明確診斷。腫瘤部位：左半結腸癌20例，右半結腸癌18例，直腸癌66例；腫瘤類型：潰瘍型79例，菜花型7例，隆起型18例；腫瘤直徑：<5 cm者60例，≥5 cm者44例；腫瘤組織分化程度：高分化者72例，低分化者32例； NCCN分期：Ⅰ、Ⅱ期48例，Ⅲ、Ⅳ期56例；有淋巴結轉移者57例，合并腸道多發息肉者14例，有便血者59例。所有患者排除結直腸腺瘤、家族性腺瘤性息肉病相關結直腸癌、遺傳性非息肉性結直腸癌等，以及術前行新輔助化療者。

1.2 結直腸癌組織及癌旁正常組織CMTM3表達檢測 采用免疫組化法。取結直腸癌組織及其配對癌旁正常組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片；切片置于60 ℃烘箱烤片2 h，二甲苯脫蠟、乙醇水化、3%過氧化氫阻斷15 min。枸櫞酸鹽緩沖液熱修復，水浴煮沸20 min，自然冷卻至室溫。5% BSA或TBST-5% NGS消除非特異性染色。CMTM3用鼠抗人CMTM3單抗，陰性對照用PBS緩沖液作為一抗。一抗稀釋倍數為1∶200。4 ℃濕盒中孵育過夜。滴加適量二抗，室溫孵育20 min，PBS漂洗3次、每次5 min。辣根酶標記工作液，DAB鏡下控制顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，中性樹膠封片。顯微鏡下拍照觀察。結果判定：采用半定量法評估染色強度和陽性細胞百分比。染色強度-、+、++、+++分別計0～3分；陽性細胞百分比<5%、≥5%～<25%、≥25%～<50%、≥50%分別計0～3分。染色強度評分×陽性細胞百分比評分≥3為CMTM3陽性表達。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

結直腸癌組織及癌旁正常組織CMTM3陽性表達率分別為15.4%(16/104)、100%(104/104)，二者比較差異有統計學意義(χ2=17.33，P<0.01)。CMTM3陽性表達與結直腸癌患者臨床病理參數的關系見表1。

表1 結直腸癌組織CMTM3陽性表達與患者臨床病理參數的關系

3 討論

近年來隨著我國人口老齡化、生活水平提高、飲食習慣和結構改變，結直腸癌的發病率和病死率呈明顯上升趨勢，特別是青年群體的發病率明顯升高[1～8]。目前，根治性切除術是結直腸癌的主要治療手段，但術后一旦出現復發和轉移，其5年生存率明顯下降。CEA、CA19-9等為臨床判斷腫瘤復發及轉移的常用生物標記物，但在結直腸癌中的敏感性和特異性較低[9]。結直腸鏡定期復查配合可疑病變標本檢測雖然可直觀準確地判斷局部復發情況，但成本高，患者痛苦大、依從性差。CMTM是一個新的CKLF超家族[10]，CMTM3是其家族成員之一，定位于16q22.1。CMTM3在正常人體組織中廣泛表達，但在多種腫瘤組織中表達被抑制甚至缺失；恢復腫瘤細胞CMTM3表達可抑制腫瘤細胞增殖，促進腫瘤細胞凋亡[1]。啟動子區CpG甲基化導致基因沉默是CMTM3表達下調的主要機制，而CpG甲基化導致腫瘤的抑癌基因功能喪失被認為是腫瘤形成、發展的重要環節和表觀遺傳學改變[11～14]。

本研究結果顯示，在結直腸癌組織中CMTM3陽性表達率明顯低于癌旁正常組織。表明CMTM3在結直腸癌組織中表達下調甚至缺失。這與CMTM3在大多數腫瘤組織中的表達結果基本一致[1]。本研究還發現，CMTM3陽性表達與腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期、淋巴結轉移以及腫瘤類型有關，而與患者性別、年齡、腫瘤部位、合并腸多發息肉及便血無關。而結直腸癌腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期、淋巴結轉移及腫瘤類型等是影響結直腸癌患者預后的危險因素，說明結直腸癌組織中CMTM3表達降低可作為判斷患者預后不良的指標。

綜上所述，結直腸癌組織中CMTM3表達下調甚至缺失，其表達降低與腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期等有關，有可能成為新的判斷結直腸癌預后的分子標記物。

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山東省醫藥衛生科技發展計劃項目(2015WS0149)。

徐忠法(E-mail： xzfa2216@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.24.015

R735.3

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1002-266X(2016)24-0045-03

2016-02-29)