棗果霉爛病病原鑒定(一)
——引起新疆棗果霉爛病的幾種曲霉菌的分離鑒定

沙娜瓦爾·色買提，玉山江·買買提，郭慶元，白劍宇

(1．新疆農業大學農學院，烏魯木齊　830052；2．新疆農業科學院植物保護研究所，烏魯木齊　830091)

?

棗果霉爛病病原鑒定(一)
——引起新疆棗果霉爛病的幾種曲霉菌的分離鑒定

沙娜瓦爾·色買提1，玉山江·買買提2，郭慶元1，白劍宇1

(1．新疆農業大學農學院，烏魯木齊830052；2．新疆農業科學院植物保護研究所，烏魯木齊830091)

摘要：【目的】棗果霉爛病是棗果產后的重要病害，曲霉菌是棗果霉爛最重要的致病菌。目前，國內外對引起棗果霉爛病的病原種類報道甚少。明確新疆棗果霉爛病的病原種類及優勢致病種群，有效防控該病的發生和危害。【方法】通過廣泛采樣、組織分離和回接證病對大量病樣進行系統分離；對幾種致病曲霉菌進行形態鑒定、分子驗證及致病性比較。【結果】曲霉屬真菌為棗果霉爛病的最主要病原；分離得到的大多數曲霉屬的單孢分離菌株對棗果具有明顯的致病性；致病的214個曲霉屬單孢菌株分屬于5個種，分別為黑曲霉、黃曲霉、赤曲霉、赭曲霉和聚多曲霉；其中黑曲霉的分離頻率最高，致病性最強。【結論】引起新疆棗果霉爛病的曲霉有5種，其中黑曲霉為優勢致病種。

關鍵詞：棗；果實霉爛病；曲霉；病原鑒定

0引 言

【研究意義】我國是世界上主要的棗生產國家，有幾千年的栽培歷史，擁有全世界99%以上的棗種質資源[l]。棗果因其味甜、肉質厚并且含有豐富的營養物質和具有較高的營養價值及食療功能等優良品質而受到消費者的喜愛，是國內外市場知名的果產品[2]。近年來，在大力發展林果業的政策帶動下，新疆林果業有了突飛猛進的發展，新疆紅棗目前種植面積已達35×104hm2(525萬畝)，居全國第三位，產量62×104t[3]。但是，目前新疆棗制干方法仍沿用自然晾干等原始方式，因此極易受污染，出現酸甜失衡、營養價值下降等問題；在棗果儲運過程中很容易發生霉變引起棗果霉爛等貯藏期病害，最終導致市場價值降低[4]。在引起棗果霉爛病的致病菌中，曲霉菌是主要的病原菌之一[5]。因此，明確棗果霉爛病的病原種類及優勢致病種群對有效防控該病的發生和危害有重要意義。【前人研究進展】根據已有報道，棗果霉爛病在每年都有大量發生，有的年份甚至造成 90%以上的損失[5]。棗果霉爛病包括輪紋爛果病、紅粉病、軟腐病、曲霉病、青霉病和木霉病等多種[5]。根據對新疆棗干果中的霉爛果的初步觀察，曲霉菌是最常出現的病原。曲霉侵入棗果后，病斑表面產生初期灰白色、漸變為褐色或黑色的“大頭針”狀霉狀物，濕度高時果面長出霉層[5]。【本研究切入點】目前，國內外對引起棗果霉爛病致病曲霉種類的相應報道很少，對新疆棗果霉爛病病原的研究更未見報道。針對棗果霉爛病危害普遍、其病原菌種類缺少準確鑒定、防治上沒有適當措施的現狀，研究擬對引起棗果霉爛病的曲霉菌進行大量分離，應用形態鑒定和分子鑒定相結合的方法對引起棗果霉爛的曲霉菌進行準確鑒定，并對多種致病曲霉進行致病性比較。【擬解決的關鍵問題】通過大量的采樣和嚴格的分離鑒定，明確由曲霉引起的棗果霉爛病(即曲霉病)的致病菌種類和優勢致病種群，為該病的有效防控提供依據。

1材料與方法

1.1材 料

1.1.1 棗果品種

2014至2015年，先后于阿克蘇地區(市郊、阿瓦提縣、沙雅縣)，和田地區(皮山縣、策勒縣、于田縣、洛浦縣)，喀什地區(沙車縣)等主要棗產區及烏魯木齊華凌干果批發市場和烏魯木齊東環路干果批發市場收集病果，從中挑選典型病果進行分離。用于分離的主要棗果品種有駿棗、灰棗和哈密大棗等。

1.1.2 培養基

PDA培養基：馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，瓊脂15～20 g，用水定容至1 L。

查氏瓊脂培養基(Czapek)：蔗糖30 g，NaNO31 g，K2HPO41 g，KCI 0.5 g，MgSO40.5 g，FeSO40.01 g,瓊脂15～20 g，用水定容至1 L，pH 自然。

水瓊脂培養基(WA)：瓊脂15 g，蒸餾水1 000 mL。

1.2方 法

1.2.1病原菌的分離

采用組織分離法：將新鮮病果表面清洗干凈，用70%酒精棉球擦拭棗果表面，用解剖刀削去大部分病部組織，用鑷子夾取病健交界處果肉置于PDA平板培養基上，25℃恒溫箱中培養。

保濕誘發分離法：選取典型病果，置入加濾紙的保濕培養皿內，待菌落長出后，從菌落上選擇較為單純的曲霉菌轉接到查氏平板培養基上，25℃恒溫培養5 d后檢查菌落。

1.2.2 病原真菌的純化、回接及形態鑒定

對各分離物采用單胞分離法進行純化，將病原菌培養5 d后，用接種環刮取少量孢子，置于100 μL滅菌水中，用接種環蘸取少量孢子液后在WA平板培養基上劃線，待萌發形成菌落后自較末端劃線上挑取最小的單一菌落進行培養；上述操作重復三次，以得到真正的單孢菌株。將獲得的單孢菌株保存在PDA 斜面上[6]。

完成所有分離物的單孢分離后，采用離體果針刺接種法將各菌株接種到新鮮、成熟、健康、無傷的紅棗果實上，觀察其致病與否，由此篩選致病菌株。

將各致病菌株分別接種到查氏平板培養基上，經培養后進行體視顯微觀察及制作切片鏡檢，觀察描述其產孢方式及分生孢子梗、產孢細胞和分生孢子的形態特征，結合培養特性，作為鑒定菌種依據。參照《真菌鑒定手冊》[7]及《中國真菌志》曲霉屬分冊[8]，主要以Raper和Fennell(1965)的系統為依據對各致病菌株進行形態鑒定。

1.2.3病原菌分子鑒定1.2.3.1基因組DNA的提取

采用液體靜置培養方法收集菌絲體，用液氮充分研磨菌至干粉后裝入1.5 mL離心管中，參照試劑盒使用說明,用真菌 DNA 提取試劑盒(北京天根生物科技有限公司)提取。

1.2.3.2rDNA-ITS的擴增與測序

引物：上游引物ITS1(5′-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3′)

下游引物ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)

PCR擴增25 μL的反應體系，包括Taq(1U/μL) 0.5 μL，10×PCR Buffer 2.5 μL，Mg2+Plus 2.5 μL，dNTP Mixture 3 μL，ITS1 1 μL，ITS4 1 μL，模板DNA 各2 μL，ddH2O 13 μL。

PCR反應條件為預變性95℃3 min；變性，95℃1 min，退火52℃40 s，延伸72℃2 min，35個循環；補平72℃10 min。

擴增產物用1%瓊脂糖凝膠，在1×TAE電泳緩沖液中電泳，以凝膠成像系統檢測并記錄擴增產物在瓊脂糖凝膠上的圖譜。用PCR產物切膠、PMD18-T載體純化和連接產物轉化方法將擴增產物純化后送博士德生物公司測序部進行測序。

1.2.3.3BLAST比對與同源性分析

將測得的菌株序列在GenBank中進行BLAST比對，根據待測菌株與已知種的同源性驗證形態鑒定結果。

1.2.4病原菌的致病性比較

為比較各種曲霉菌在鮮果和干果上的致病力大小，致病性實驗采用鮮果接種和干果接種兩種方法。

1.2.4.1鮮果接種

采集白熟期新鮮健康棗果，用浸泡在70%酒精中的棉球對棗果表面消毒，無菌水沖洗3次，晾干后切成果片并置于保濕培養皿內；將各單孢菌株制成直徑4 mm的菌餅作為接種體，貼于棗果片切面上，每果片接種3個位點；每個單孢菌株接種3個果片(三次重復)并置于同一保濕皿中；以果片上放無菌的PDA培養基餅作為對照。接種后在25℃溫箱中保濕培養，每天觀察記錄果實發病情況，10 d后分別統計發病率。

1.2.4.2干果接種

選健康干果，用70%酒精棉球作表面消毒后，用無菌水浸泡吸脹，晾干后切成果片并置于保濕培養皿內；用與鮮果相同的接種和培養方法觀察記錄果實發病情況。

2結果與分析

2.1自然發病棗果的典型癥狀

該類型病果主要為害近儲藏期的果實，一般在采后晾曬期(10月中、下旬)大量發生。曲霉菌侵入棗果后，受害部位引起病果變軟果肉變呈淡褐色至褐色腐爛；病斑表面產生灰白色、黑色、綠色的“大頭針”狀霉狀物，即病原菌的分生孢子梗及分生孢子，腐爛果實有霉酸味。

2.2棗果霉爛病病原菌分離結果

通過組織分離法，從60個典型病果，約300個組織塊上分離獲得175個曲霉屬(Aspergillusspp.)分離物；通過保濕分離，從15個典型病果上獲得44個曲霉屬分離物；合計從75個病果上分離到219個曲毒屬分離物，經單孢分離得到657個單孢菌株(3個/每分離物)；從219個分離物中各選一個單孢菌株進行回接，篩選出214個致病的單孢菌株。這些致病菌株均能侵染棗果，引起果實表面或內部發病,長出褐色或黑色霉層,最后導致爛果，并從發病果實上可重新看得到與所接菌株相同的培養性狀,說明分離得到的病原菌是引起棗果霉爛病的致病菌。表1

2.3 曲霉種的形態鑒定

將來自214個分離物的214個致病單孢菌株，通過對各單孢菌株在查氏培養基上的培養形狀及孢子和產孢細胞的形態、大小等特征觀察，鑒定出214個曲霉屬菌株分屬于5個種，分別為黑曲霉(A.nigerTiegh)、黃曲霉(A.flatusLink)、赤曲霉(A.ruberSamon & Gams)、赭曲霉(A.ochraceusWilh)和聚多曲霉(A.sydowiiThom&Church)；黑曲霉的出現頻率最高，為74.76%，黃曲霉次之，為17.29%，其余三種曲霉的出現頻率分別為3.37%、2.34%和1.87%。此外，從兩種分離方法得到的結果來看，經組織分離法得到的曲霉菌菌株多，而經保濕分離法得到的曲霉菌菌株數較少；但從組織分離法得到的171個菌株中，只鑒定出黑曲霉、黃曲霉和赤曲霉三種，且以黑曲霉的菌株占約大多數，而保濕分離得到的39個菌株中鑒定出了上述所有5個種，仍以黑曲霉的菌株為多。多項分離結果均顯示，黑曲霉在所有曲霉中菌株出現頻率最高，為棗果霉爛病的優勢病原菌種。表1

2.4各致病曲霉菌的培養性狀及形態特征

2.4.1黑曲霉Aniger

菌落在查氏培養基上生長迅速，25℃，培養7d后，直徑為40 ～ 60 mm；菌落中心稍凸起，有規則的輻射狀溝紋；質地絲絨狀；分生孢子結構大量，表面呈暗褐黑色至炭黑色；菌落反面呈黃褐色。分生孢子頭初為球形至輻射形，直徑150 ～ 450 μm；分生孢子梗發生于基質，孢梗莖，(800)950 ～ 2 700(4 000)μm×10 ～ 20 μm，壁平滑；頂囊球形，直徑(30)40 ～ 75(80)μm，全部表面可育；產孢結構雙層：梗基，(10)15 ～ 35(70)μm×(3)3.5 ～ 12(14) μm；瓶梗，(7)8 ～ 11(12)μm×(2)2.5 ～ 3 μm；分生孢子近球形，直徑3 ～ 5.4 μm，壁明顯粗糙。

2.4.2黃曲霉A.flavus

菌落在查氏培養基上生長迅速，25℃，培養7d后，直徑36 ～ 52 mm；質地主要為致密絲絨狀，中央部分呈絮狀，平坦；分生孢子結構多，顏色為黃綠至草綠色，初期較淡，老后稍深；菌落反面淡褐色；分生孢子頭初為球形，后呈輻射形，直徑(80)125 ～ 500(800)μm；分生孢子梗大多生自基質，孢梗莖，(200)400 ～ 1 000(3 000)μm×(4)8 ～15(20)μm，壁厚，無色，粗糙；頂囊近球形至燒瓶狀，直徑(9)22.5 ～ 48(65)μm，大部表面可育；產孢結構雙層：梗基(6.2)7 ～ 11(19)μm×(3.2)4 ～ 6 μm；瓶梗(6.2)8.5 ～ 10(12) μm×(2.4)3 ～ 3.5(4) μm；分生孢子多為球形，(2.4)3.6 ～ 4.8(6.4)μm，壁稍粗糙。

2.4.3赭曲霉A.ochraceus

菌落在查氏培養基上，25℃ ，培養7 d后，直徑為(25)28 ～ 30(35) mm ，10 ～ 14天后直徑35 ～ 53(55) mm；質地絲絨狀，平坦；分生孢子結構較稀疏，黃赭色；菌絲體白色；菌落反面為紫褐色；分生孢子頭初為球形(75)90 ～ 200 μm，老后可達350 ～ 500 μm；分生孢子梗生自基質，孢梗莖一般(500)900 ～ 1 250(1 500) μm×(6)7 ～ 15 μm，壁厚(0.7)0.8 ～ 1.5 μm，粗糙；頂囊球形或近球形，直徑(20)25 ～ 45(55)μm，全部表面可育；產孢結構雙層：梗基(7)14 ～ 25 μm×(2.5)3 ～ 6 μm；瓶梗7 ～ 12(13) μm×1.5 ～ 2.5(3) μm；分生孢子多球形或近球形，(2)2.5 ～ 3.5(4)μm，壁近于光滑。

注：A，B，C，D，E分別代表黑曲霉、黃曲霉、赭曲霉、聚多曲霉、赤曲霉。1，2，3分別代表5種曲霉菌的分生孢子穗、分生孢子梗及分生孢子形態

Note：A，B，C，D，E respectively representA.niger，A.flatus，A.ochraceus，A.sydowii，A.sydowii；1，2，3 respectively represent the conidial head，conidiophores and conidia of 5 species ofAspergillus

圖1五種曲霉菌的主要形態
Fig.1The main morphological characteristics of 5 species ofAspergillus
表1214個曲霉屬菌株所屬的種及其出現頻率
Table 1Frequence of 214Aspergillusspp

代表菌株Representativestrain相同特征菌株數Numberofequalcharacteristicstrains出現頻率Occurrencefrequency(%)組織分離Tissueisolation(個)保濕分離Moisturizeisolation(個)組織分離Tissueisolation(%)保濕分離Moisturizeisolation(%)合計Total(%)鑒定結果IdentificationresultYTML1406-3-1HTML1406-4-2HMML1406-6-11431766.827.9474.76黑曲霉HMML1406-1-1HTML1406-14-1-2RQML1406-12-1-528913.084.2017.29黃曲霉HTML1406-9-1-2HTGS1406-8-6YTGS1406-3-3441.871.873.73赤曲霉HTGS1406-2-1-1YTGS1406-4-1-2HTGS1406-14-2050.002.342.34赭曲霉CLRF1406-5-1HTGS1406-14-2YTGS1406-3-1040.001.871.87聚多曲霉

2.4.4聚多曲霉A.sydowii

菌落在查氏培養基上，25℃ ，培養7 d后，直徑為25 mm左右；質地為絲絨狀；顏色呈不同程度的灰藍色至暗藍色；菌落反面呈淡褐色。分生孢子頭球形至輻射狀，直徑達(52)62.5 ～ 87.5(125)μm；分生孢子梗生于基質，孢梗莖長度為110 ～ 200(500) μm×3.5 ～ 7(8) μm，壁光滑，較厚；頂囊較小，近球形，直徑為(8)10 ～ 20 μm，全部表面可育；產孢結構雙層：梗基一般(4.2)6 ～ 9(10.4) μm×(2)3～ 3.5(4) μm；瓶梗(4.2)5 ～ 9(10) μm×2 ～ 3 μm；分生孢子球形，直徑2.5 ～ 3.5(5)μm，壁明顯粗糙，具小刺。

2.4.5赤曲霉(A.ruber,有性型：赤散囊菌E.rubrum)

菌落在查氏培養基上生長緩慢，25℃，12 d直徑5 ～ 12 mm；平坦；分生孢子較少，灰綠色；分生孢子頭球形，直徑100 ～ 250 μm；分生孢子梗莖150 ～ 300 μm×8 ～ 15 μm，壁光滑；頂囊燒瓶形，直徑17 ～ 40 μm，大部分表面可育；產孢結構單層：瓶梗6 ～ 12.5 μm×3 ～ 5 μm；分生孢子球形5 ～ 6 μm。閉囊殼較多，黃色；菌落反面黃褐色。閉囊殼球形，(70)88 ～ 180(200) μm；子囊近球形，9 ～ 19(22) μm；子囊孢子雙凸鏡形，5 ～ 6.5 μm×4 ～ 5(5.6) μm。

2.5致病菌 rDNA- ITS 序列分析

從幾種曲霉菌中各選一個致病的單孢菌株，以各菌株的 DNA 作為模板，用通用引物擴增，得到約 600 bp 左右的 rDNA- ITS 序列。

將上述擴增產物測序后，將各自的 rDNA- ITS 序列在GenBank 中分別與已有的一些曲霉菌序列進行比對分析，結果表明所測病原菌分屬于半知菌類曲霉屬中的5個種。經形態鑒定的各種曲霉菌與GenBank 中登錄的同種曲霉菌的rDNA- ITS序列同源性比對結果表明：黑曲霉菌株(HTML1406-4-2)的ITS序列與A.niger(KF031027，JQ867382，KR149643等)多個菌株的ITS序列同源性均達100%；黃曲霉菌株(HMML1406-1-1)的ITS 序列與A.flatus(GU172440，LN482520，KP329664等)多個菌株的ITS序列同源性均達99%；赤曲霉菌株(HTGS1406-8-6)的ITS 序列與A.ruber(NR131286，AY37389，HE801343)等多個菌株的ITS序列同源性均達100%；赭曲霉菌株(YTGS1406-4-1-2)的ITS 序列與A.ochraceus(NR077150，FR329836，EF661419等)多個菌株的ITS序列同源性高達99%～100%；聚多曲霉菌株(CLRF1406-5-1)的ITS 序列與A.sydowii(JX518253，KP329836，KP329835等)多個菌株的ITS序列同源性高達100%。其分析結果與形態鑒定結果一致，再次證明，引起新疆棗果霉爛病的曲霉菌確為上述5種。圖2

注：M：DNA marker DL2000；1：黑曲霉(HTML1406-4-2)；2：黃曲霉(HMML1406-1-1)；3：赤曲霉(HTGS1406-8-6)；

4：赭曲霉(YTGS1406-4-1-2)；5：聚多曲霉(CLRF1406-5-1).

Note：M：DNA marker DL2000；1：A.niger(HTML1406-4-2)；2：A.flatus(HMML1406-1-1)；3：A.ruber(HTGS1406-8-6)；4：A.ochraceus(YTGS1406-4-1-2)；5：A.sydowii(CLRF1406-5-1)．

圖2五種曲霉的單孢菌株的rDNA ITS-PCR產物
Fig.2rDNA ITS-PCR products of single spore isolates of 5 species Aspergillus

2.6 五種曲霉菌的致病性比較

研究表明，5種曲霉菌對棗果的致病力存在明顯的差異，同一種曲霉菌對鮮果和干果的致病力亦有較大差異。黑曲霉、黃曲霉和赭曲霉對棗鮮果致病能力最強(接種發病率為100%～ 96.29%)，其中黑曲霉對干果的致病力最強(接種發病率為55.55%)，而黃曲霉的最弱(接種發病率為7.41%)；聚多曲霉對棗鮮果和干果的致病能力均最弱(接種發病率為鮮果70.36%，干果7.41%)；赤曲霉對棗鮮果和干果致病能力較強(接種發病率為鮮果88.88%，干果51.84%)；同時，同一種曲霉菌的不同菌株間的致病力亦有明顯差異。表2

表2五種曲霉菌對棗鮮果及棗干果的致病性比較
Table 2 The comparison of pathogenicity test ofAspergillusfungus to jujube fresh fruit and dried fruit

病原名稱Nameofpathogeny菌株編號Strainnumbers新鮮果接種 Freshfruit干果接種 Driedfruit發病率Incidencerate(%)種間平均發病率Averageincidencerateofspecies(%)發病率Incidencerate(%)種間平均發病率Averageincidencerateofspecies(%)黑曲霉YTML1406-3-1100.00100.0033.3355.55A.nigerHTML1406-4-2100.0033.33HMML1406-6-1100.00100.00黃曲霉HMML1406-1-1100.00100.000.007.41A.flavusHTML1406-14-1-2100.0011.11RQML1406-12-1-5100.0011.11赤曲霉HTML1406-9-1-2100.0088.8877.7751.84A.ruberHTGS1406-8-677.7766.66YTGS1406-3-388.8811.11赭曲霉HTGS1406-2-1-1100.0096.2922.2211.11A.ochraceusYTGS1406-4-1-2100.0011.11HTGS1406-14-288.880.00聚多曲霉CLRF1406-5-1100.0070.3622.227.41A.sydowiiHTGS1406-14-244.440.00YTGS1406-3-166.660.00CK0.000.000.000.00

3討 論

3.1棗果在貯藏期由于病原菌的侵染而導致的霉爛變質，大大降低了棗果的市場價值。因此，對棗果霉爛病進行病原菌的分離與鑒定，明確其致病菌種類，進而了解其生物學特性，研究其控制方法，對今后棗果的貯藏保鮮具有重要意義。

3.2對棗果霉爛病病原菌的分離頻率及致病性分析結果初步表明，曲霉屬真菌是引起棗果霉爛的主要病原菌；在研究中鑒定出的5種曲霉菌中，黑曲霉為優勢菌種，其分離頻率最高，致病性也很強；同時黑曲霉和赤曲霉為5種曲霉菌中致病性最強的種，對鮮果和干果的致病率均很高；但需要說明的是，由于每種曲霉菌僅選用了3個代表菌株，且菌株間的致病性差異很大，因而5種曲霉菌的致病性比較會在一定程度上受到菌株選擇的影響，為更準確的得出該5種曲霉菌在對棗果的致病性差異上的結果，需要進一步選擇更多的菌株并設置更多的重復進行比較。

3.3曲霉在不同的培養基上的菌落外觀及顏色均有差異，因此研究中均統一在查氏培養基上培養。通過在一致條件下培養的培養性狀即可大體區分為黑色組、黃綠組、煙色組等不同組；為準確鑒定，還要參考前人研究的培養條件，盡量與其保持一致，只有這樣才更有可比性[9]。

3.4魏天軍，魏象廷在“中國棗果實病害研究進展”中介紹了棗曲霉病的病原為黑曲霉。研究中通過組織分離和保濕分離，鑒定出5種曲霉對棗鮮果和干果具有致病性(或稱致霉性)，同時得到黑曲霉為優勢致病種的結果。兩者有較好的一致性。除黑曲霉外，研究中還鑒定出黃曲霉、赤曲霉、赭曲霉等4種曲霉對棗果具有致病性。這一差異可能與地域不同，采樣的多少及分布有關，也與研究中采用了保濕分離法有關，在保濕分離過程中可能使一些并非造成果實最初感染而是在保濕環境中次生感染的，同時又具有一定致病性的曲霉菌成為鑒定結果的一部分。一般而言，嚴格的組織分離能更好地得到初始感染或真實感染到組織中病原菌，而保濕分離能簡單地得到更多種類的分離物及致病菌。由于棗果采后制干、貯運環境復雜，接觸各種致病菌的可能性很大，因此，研究中兩種分離方法并用，能更大范圍地分析棗果上的致病菌及可能的致病菌。如果研究中的組織分離方法足夠嚴格和無疏漏的話，可以認為組織分離的結果體現了初始感染或真實感染到組織中病原菌，即黑曲霉、黃曲霉和赤曲霉為引起棗果霉爛病的真正的致病菌種，而僅在保濕分離中出現的赭曲霉和聚多曲霉為分離環境中存在的可致病菌種。這一推論結果有待通過分子檢測方法對大量樣果的實際檢測來證實。

4結 論

引起新疆棗果霉爛病的曲霉菌有黑曲霉、黃曲霉、赤曲霉、赭曲霉和聚多曲霉5種。其中黑曲霉的分離頻率最高，致病性最強，是曲霉菌中的優勢菌種。

參考文獻(References)

[1] 郗榮庭，劉孟軍，王文江．干果研究進展[M]．北京：中國農業科學技術出版社，2011：22-23．

XI Rong-ting，LIU Meng-jun，WANG Wen-jiang．(2011)．Researchprogressofdriedfruits[M]．Beijing：China Agriculture Sciences and Technology Press：22-23．(in Chinese)

[2] 魏天軍．棗果采后生理特性與保鮮貯藏技術研究進展[J]．寧夏農業科技，2005，(4)：29．

WEI Tian-jun．(2005)．Advances of Research on Postharvest Physiology and Storage Technology of J Zizyphus jujube Fruits [J]．NingxiaAgriculturalSciencesandTechnology，(4)：29．(in Chinese)

[3] 張昭豹．新疆紅棗消費市場調查研究- 以上海市為例[D]．烏魯木齊：新疆農業大學碩士學位論文，2014．

ZHANG Zhao-bao．(2014)．ResearchonMarketofXinjiangJujubeConsumption-TakingShanghaiforExample[D]．Master Dissertation．Xinjiang Agricultural University, Urumai．(in Chinese)

[4] 侯倩．干制與貯藏方法對棗果品質的影響[D]．保定：河北農業大學碩士學位論文，2012．

HUO Qian．(2012)．InfluencesofdifferentdryingandstoragemethodsonqualityofChinesejujubefruits[D]．Master Dissertation．Agricultural University of Hebei，Baoding．(in Chinese)

[5] 秦文，柴全喜.棗爛果病的綜合防治[J]．果農之友，2014，(8)：26．

QIN Wen，CHAI Quan-xi．(2006)．Zizyphus jujube Fruits mildew pathogen and prevention [J]．FruitGrowers`Friend，(8)：26．(in Chinese)

[6] 方中達．植病研究方法[M]．(第三版)北京：中國農業出版社，1998．

FANG Zhong-da．(1998)．ResearchMethodofPlantPatholigy[M]．(3rd Ed.)Beijing：China Agriculture Press．(in Chinese)

[7] 魏景超．真菌鑒定手冊[K]．上海：上海科學技術出版社，1979：501-512．

WEI Jing-chao．(1979)．ManualfortheIdentificationofFungus[K]．Shanghai：Shanghai Science Technology Press．(in Chinese)

[8] 齊祖同．中國真菌志.第五卷.曲霉屬及其相關有性型屬[M]．北京：科學出版社，1997，(10)．

QI Zu-tong．(1997)．FloraFungorumSinicorumAspergillusetTeleomorphiCognativol．5 [M]． Beijing： Science Press，(10)．(in Chinese)

[9] 張勇．耐熱真菌多樣性及分子系統研究[D]．泰安：山東農業大學 博士畢業論文，2012．

ZHANG Yong．(2007)．ThermotolerantFungiDiversityandMolecularPhylogeny[D]．PhD Dissertation. Shandong Agriculture University，Taian．(in Chinese)

Identification of the Pathogen Causing Jujube Fruit Mildew (Part I)-Isolation and Identification ofAspergillusfungusCausing Jujube Fruit Mildew

Shanawaer Semaiti1，Yushanjiang Maimaiti2，GUO Qing-yuan1，BAI Jian-yu1

(1．CollegeofAgronomy，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052China；2．ResearchInstituteofPlantProtection，XinjiangAcademyofAgriculturalSciences，Urumqi830091China；)

Abstract：【Objective】 The Jujube fruit mildew is the major disease of postharvest jujube fruits，and Aspergillus fungus is the most important pathogenic fungus of jujube fruits mildew．At present，there is no substantial report within or outside the country about the pathogen species causing jujube fruits mildew．Clarifying pathogen species and advantaged species of jujube fruits mildew in Xinjiang is significantly important to control the occurrence and damage of this diseases．【Method】Widely sampling，tissue isolation and tie-back method were used in systematic isolation for large number of disease samples．At the same time，morphological analysis，molecular analysis and pathogenicity comparison were used for identification of some pathogenic Aspergillus fungus．【Result】The isolation results showed that Aspergillus spp. fungus is the major pathogen which causes jujube fruits mildew．Separation with the majority single spore isolates of Aspergillus spp. have got pathogenicity to jujube fruit． 214 single spore isolates of Aspergillus spp. which have pathogenicity belong to 5 species，they are A. niger，A. flatus，A. rubrum，A. ochraceus and A. sydowii，among which, A. niger had the highest isolate rate and the strongest pathogenicity.【Conclusion】There are 5 species of Aspergillus that cuase jujube fruits mildew in Xinjiang，among which, the advantaged pathogenetic species is A. niger.

Key words:jujube；fruits mildew；Aspergillus；pathogen identification

中圖分類號：S436.65

文獻標識碼：A

文章編號：1001-4330(2016)03-0502-08

作者簡介:沙娜瓦爾·色買提(1990-)，女，新疆和田人，碩士研究生，研究方向為植物病理學，(E-mail)senever352@163.com通訊作者:郭慶元(1962-)，男，四川人，教授，博士生導師，研究方向為植物病理學，(E-mail)guoqingyuan3009@sina.com

基金項目:新疆維吾爾自治區科技計劃項目“新疆特色果樹高效安全生產關鍵技術研究集成與示范”(201130102)

收稿日期：2015-11-13

doi:10.6048/j.issn.1001-4330.2016.03.016

Fund project:Supported by science and technology planning projects of Xinjiang Uygur Autonomous Region "integration and demonstration of the key technology of high efficiency and safety production of Xinjiang featured fruit tress" (201130102)