miRNA—181a及其靶基因共濟失調—毛細血管擴張突變基因在胃癌組織中的表達研究

鄧若愚 聶玉強 張向陽 朱玲麗

【摘要】[目的]：分析miRNA-181a及其靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因在胃癌組織中的表達結果。[方法]：選取我院2014年～2015年收治的外科手術切除胃癌組織標本10例作為研究對象，設為實驗組；同時選取癌旁肺癌組織10例作為對照組。分析胃癌組織中miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白表達的相關性。提取蛋白質和總RNA，采取熒光定量PCR檢驗標本中的miRNA-18la，采用Western blot檢驗靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白。對比兩組患者miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達量。[結果]：miRNA-18la在實驗組中的表達量為（1.998±1.912），在對照組中的表達量為（0.493±和0.098），實驗組中的靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白表達量為（0.2565±0.00876），在對照組中的表達量為（0.5535±0.0453），兩組患者在miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達量具有明顯差異，P〈0.05表示統計學有意義。miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達呈現正相關聯系。[結論]：miRNA-18la在實驗組中明顯升高，靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白在實驗組中表達量明顯降低，影響原因大概是基因沉默機制miRNA-18la降低了靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達量，在胃癌疾病發生發展中起到了促進作用。

【關鍵詞】miRNA-18la；靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白；胃癌組織

臨床發現，胃癌發病率和死亡率高，疾病早期的診斷率及手術切除率成功率較低，患者5年生存率僅有40%左右。胃癌疾病具有很多影響因素，例如p53、p21、NFκB、COX2、PTEN、RUNX3、ATM和KLF6等。為了能夠了解胃癌發生、發展的相關基因資料以及胃癌的分子遺傳學機制，提供胃癌診斷和治療基礎的理論依據成為臨床上重點研究的內容[1]。miRNAs參與了調節細胞的增殖、分化、凋亡以及遷移等生物學過程，在細胞的發育和表型確定中發揮了重要的作用，miRNA在腫瘤中的異常表達、腫瘤的發生發展以及治療預后密切相關。靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因是一種抑制癌變的基因，通過激活p53和p21等基因來激活G1 /S期檢測點，并通過chk1、chk2和Cdc25家族成員來激活S期和G2/M期檢測點。

1資料和方法

1.1一般資料 選取我院2014年～2015年收治的外科手術切除胃癌組織標本10例作為研究對象，設為實驗組；同時選取癌旁肺癌組織10例作為對照組。實驗組患者均確診為胃癌晚期，患者在手術前沒有采用化療等治療，對照組患者取距離胃癌病灶5厘米以上的組織作為研究，手術后通過液氮速凍后保存在零下八十攝氏度的冰箱中[2]。

1.2方法 本實驗將用qRT-PCR分析miR-181a在胃癌細胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-28、AGS表達情況，結合細胞的增殖和分化特征，篩選合適的胃癌細胞株進行下一步實驗；構建質粒miR-181a Inhibitor，使用miR-181a Inhibitor和陰性對照（質粒NC）轉染胃癌SGC-7901細胞，通過相差顯微鏡觀察以及MTS、流式細胞儀（FACS）、Transwell細胞遷移和細胞侵襲實驗等技術和方法分析miR-181a對胃癌細胞的細胞周期、增殖與凋亡、遷移與侵襲等生物學行為的影響[3]；應用miRanda、Pictar和Targetscan等生物信息學方法對miR-181a靶基因進行預測，雙螢光素酶報告系統驗證miR-181a的靶基因（ATM）；qRT-PCR檢測HEK293T細胞中ATM mRNA的變化；Western Blot檢測HEK293T細胞中ATM蛋白的變化；研究胃癌和非癌組織表達的miR-181a和靶基因ATM蛋白表達的相關性[4]。

1.3統計學方法[5] 采用SPSS13.0軟件進行研究，計量資料采用t檢驗，采用%表示，計數資料采用X2檢驗，采用（x±s）表示，P〈0.05表示統計學有意義。

2結果

miRNA-18la在實驗組中的表達量為（1.998±1.912），在對照組中的表達量為（0.493±和0.098），實驗組中的靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白表達量為（0.2565±0.00876），在對照組中的表達量為（0.5535±0.0453），兩組患者在miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達量具有明顯差異，P〈0.05表示統計學有意義[6]。miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達呈現正相關聯系。

3討論

為了能夠了解胃癌發生、發展的相關基因資料以及胃癌的分子遺傳學機制，提供胃癌診斷和治療基礎的理論依據成為臨床上重點研究的內容。miRNAs參與了調節細胞的增殖、分化、凋亡以及遷移等生物學過程，在細胞的發育和表型確定中發揮了重要的作用，miRNA在腫瘤中的異常表達、腫瘤的發生發展以及治療預后密切相關。靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因是一種抑制癌變的基因，通過激活p53和p21等基因來激活G1 /S期檢測點，并通過chk1、chk2和Cdc25家族成員來激活S期和G2/M期檢測點[7-9]。

研究發現，miRNA-18la在實驗組中的表達量為（1.998±1.912），在對照組中的表達量為（0.493±和0.098），實驗組中的靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白表達量為（0.2565±0.00876），在對照組中的表達量為（0.5535±0.0453），兩組患者在miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達量具有明顯差異，P〈0.05表示統計學有意義。miRNA-18la和靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達呈現正相關聯系。因此，miRNA-18la在實驗組中明顯升高，靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白在實驗組中表達量明顯降低，影響原因大概是基因沉默機制miRNA-18la降低了靶基因共濟失調-毛細血管擴張突變基因蛋白的表達量，在胃癌疾病發生發展中起到了促進作用[10]。

【參考文獻】

[1]楊宗元，孫朝陽，劉毅等.抑制共濟失調毛細血管擴張突變基因RAD3相關蛋白逆轉卵巢癌SKOV3細胞順鉑耐藥[J].中華腫瘤雜志，2014，36（11）：805-810.

[2]陳淅涓，關方霞，劉英強等.共濟失調-毛細血管擴張癥致病基因RNA干擾對惡性人腦膠質瘤細胞放射敏感性的影響[J].中華實驗外科雜志，2013，30（6）：1268-1270.

[3]李素云，錢旭光，趙勇等.兒童慢性小腦共濟失調15例[J].中華實用兒科臨床雜志，2014，29（10）：781-785.

[4]王茂鑫，李曉明，趙勇等.喉癌干細胞在低氧介導的喉癌放療抵抗中的作用機制[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2011，46（12）：

1024-1029.

[5]魯理，鄭志，李春霞等.ATM激酶與視網膜病理性新生血管形成的研究進展[J].中華眼科雜志，2015，51（5）：391-394.

[6]白露，于洪，王鶴潼等.ATM基因單核苷酸多態性與肺癌易感性的關系研究[J].中國醫科大學學報，2014，43（12）：1121-1124.

[7]劉小群.ATM與腫瘤的關系研究進展[J].中國癌癥雜志，

2011，12（12）：973-977.

[8]韓笑，樊衛.ATM蛋白在淋巴結陰性的進展型食管癌中的表達及臨床意義[J].現代腫瘤醫學，2014，22（12）：2873-2874.

[9]楊晨，章婷婷，陳瑩等.DAB2IP基因沉默引起的前列腺癌細胞輻射耐受與ATM的相關性研究[J].輻射研究與輻射工藝學報，2015，33（2）：18-22.

[10]徐文勝，翟全禮，代杰等.再生混凝土梁抗彎性能非線性有限元分析[J].建材世界，2009，30（3）：17-20+24.