食藥用菌母種培養基膠囊的研制

殷樂　張桐語　楊昌天　宮敬利

摘要：本項目根據食藥用菌企業菌種母種生產工藝，研究了一種能夠簡化生產流程，降低成本，自動化生產的食藥用菌母種培養基膠囊，確定了母種培養基膠囊的組成成分及制作工藝。

關鍵詞：食藥用菌；母種培養基；膠囊

基金項目：吉林農業科技學院大學生科技創新科研項目項目（2015001）；吉林省教育廳“十二五”科學技術研究項目[吉教科合字（2012）第322號]

中圖分類號：S646 文獻標識碼：A DOI編號：10.14025/j.cnki.jlny.2016.10.035

從20世紀80年代我國建立起獨特的食用菌菌種技術體系，至21世紀初期，中國已成為世界上食用菌生產大國，年產量占世界總產量的70%以上。隨著食藥用菌需求量的增加，傳統食藥用菌菌種母種制作方法已落后食藥用菌企業的發展。早在1999年，何培新等人就開始了食用菌母種培養基試劑化制備的研究，意圖簡化母種培養基的制備流程。由于大部分食藥用菌菌絲生長對營養條件要求較高，目前食藥用菌母種的生產仍采用傳統煎煮制備方法。本項目由此出發，旨在利用現代分離提取技術所得產物，研制出一種適合食藥用菌企業自動化生產的母種培養基膠囊。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種黑木耳、香菇、靈芝菌種均由吉林農業科技學院食藥用菌實驗室保存。

1.1.2 培養基配方采用平板培養法在PDA培養基上將黑木耳、香菇、靈芝的菌種擴大培養，選用適合食藥用菌生長的8種培養基進行試驗，PDA培養基為對照，詳見表1。

1.2 方法

1.2.1 培養基制備制備試管母種培養基和平板母種培養基，置于25℃恒溫暗培養48小時，取無雜菌污染的培養基，備用。

1.2.2 接種培養方法參照張春霞等方法進行接種培養，菌絲生長狀況、生長速度實驗及顯微性狀觀察試驗采用平板培養法；菌絲萌發時間和滿管時間試驗采用試管培養法。

1.2.3 母種培養基膠囊制作工藝

1.2.3.1 培養基成分顆粒的制備節將培養基成分固體粉末制成顆粒劑，以改善粉末成分遇水易凝結成團，溶解性差的現象，結合培養基組成成分，確定顆粒劑制備的其它輔料為：2.6%CMC-Na，1%PVP，2.6%CMS-Na。采用等量遞增混合法，將培養基成分與輔料混合均勻，用適量95%乙醇軟材，制粒，烘干，過篩整粒，制備出培養基成分顆粒。

1.2.3.2 培養基膠囊的灌裝選擇市售00#無色透明淀粉硬膠囊殼，裝入培養基成分顆粒，每粒膠囊可裝入1.140克。

1.2.4 食藥用菌母種培養基膠囊的檢測應用將培養基膠囊放入18毫米×150毫米試管中，加入13毫升純凈水，121℃，30分鐘高溫滅菌，擺斜面冷卻成母種培養基，接種，25℃恒溫暗培養，觀察菌絲的生長情況。

2 結果與分析

2.1 不同培養基中菌絲的生長狀況及顯微性狀

黑木耳菌種從菌絲密度、顯微性狀等五方面比較試驗組與CK組及試驗組相互之間的差異。M3、M6、M8三組培養基中黑木耳菌絲稠密；M4、M6、M7、M8四組培養基中黑木耳菌絲顏色較淺、分枝少，其老化程度低，菌絲活性強（見表2）。

2.2 不同培養基中菌絲的生長速度（見表3）

9種培養培養黑木耳菌絲有顯著性差異，培養基M6的生長速度最高，M8上菌絲的生長速度均值與之接近，M3次之。因此，適合黑木耳菌絲生長最好的培養基是M6，其次是M8、M3。表明黑木耳菌絲對培養基營養成分有較高的要求，以大豆蛋白胨、豆粞粉作為氮源，以葡萄糖、蔗糖作為碳源的培養基能使黑木耳菌絲較好的生長。

2.3 不同培養基中菌絲的萌發時間及滿管時間

黑木耳菌絲在培養基M4、M5上的萌發時間最長，菌絲滿管時間也是最長；9種培養基上菌絲滿管時間差異明顯，M3、M6、M7、M8培養基滿管時間最短，M2、M1、CK培養基滿管時間次之，見表4。

2.4 不同培養基中菌絲生長的均一性

食藥用菌菌絲在母種培養基上不僅要求菌絲生長稠密、長勢長速好，而且要求菌絲生長速度和長勢均一。黑木耳菌絲生長速度和滿管時間的方差分析見表4，菌絲在9種培養基上的生長速度方差差異較大，依次為cK→M6→M8→M7→M1→M2→M5→M4→M3。菌絲生長速度方差小，表明變異性小，說明培養基均一性。從表4可知，CK組培養基上菌絲生長均一性好，M6、M7培養基與之相近，說明M6、M7培養基較為適合黑木耳菌種生長。

2.5 不同食藥用菌在膠囊培養基上的生長狀況

黑木耳、香菇、靈芝三種食藥用菌在J6、J8培養基上菌絲分布情況及菌絲密度差異較大（表5），J6、J8培養基其碳源成分不同，在制粒時，蔗糖黏合性較葡萄糖好；在膠囊溶解中，J8培養基膠囊顆粒較J6培養基膠囊顆粒分布均勻，造成兩種膠囊培養基菌絲生長狀況差異。

3 結論與討論

香菇易生長的食用菌，黑木耳、靈芝是生長條件要求高的食藥用菌，其三者菌種在18膠囊培養基上均表現出了良好的生長狀況，反映出J8膠囊培養基適合大部分食藥用菌菌種母種培養。J8膠囊培養基組成成分為（70粒00#膠囊）：大豆蛋白胨7.5克，蔗糖20.0克，酵母粉2.0克，KH₂PO₄3.0克，MgS041.5克，瓊脂20.0克，CMC-Na1.5克，PVP0.6克，CMS-Na1.5克。

膠囊培養基采用顆粒制劑的工藝制成，在工業化生產中，采用制粒機、膠囊自動灌裝機等現有工業生產設備就可實現自動化生產。片劑、丸劑等其它劑型是否更加適合母種培養基的制作，還要進一步探究。培養基膠囊顆粒劑的制作工藝，還可以進一步優化。

膠囊培養基適用于黑木耳、靈芝等大部分食藥用菌母種培養基的制作，是否存在食藥用菌菌種生長不適宜的情況，還需進一步的研究。黑木耳、香菇、靈芝三種食藥用菌在膠囊培養基上生長狀況良好，對于實際生產中，以此母種制成的原種及栽培種生長狀況是否有影響，還需進一步研究。