MicroRNA-181在食管癌組織中的表達

虎　婕，山　曦，張偉宏

(1.鄭州大學第一附屬醫(yī)院老年病科，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學護理學院，河南 鄭州 450052)

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MicroRNA-181在食管癌組織中的表達

虎婕1，山曦1，張偉宏2

(1.鄭州大學第一附屬醫(yī)院老年病科，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學護理學院，河南 鄭州 450052)

[摘要]目的探討microRNA-181(miR-181)在食管癌組織及細胞系中的表達及其與食管癌臨床病理參數的關系。方法RT-PCR檢測56對食管鱗癌、癌旁正常組織及食管癌細胞系KYSE450、EC109中miR-181的表達，并分析其表達水平與臨床病理參數及生存的關系。結果與癌旁正常組織比較，食管鱗癌組織中miR-181表達明顯升高(P<0.05)，食管鱗癌細胞系KYSE450、EC109中miR-181表達水平與正常永生化食管上皮細胞Het-1a中表達水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。食管鱗癌組織中miR-181的表達量與患者的腫瘤大小、分化程度及轉移情況有關。結論miR-181在食管癌組織及食管癌細胞系中高表達，并與腫瘤大小、分化程度及轉移情況相關，提示miR-181能夠作為食管癌治療的新靶點。

[關鍵詞]miR-181；食管鱗癌；轉移

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，在世界范圍內腫瘤發(fā)病率位居第8位，腫瘤相關致死率則位居第6位[1]。我國食管鱗癌約占到食管癌總數的90%，盡管越來越多的技術被用于食管癌的診斷和治療，但其5 a生存率仍然不能讓人滿意，約為15%～25%[2]。因此，研究食管癌發(fā)生、發(fā)展的機制并尋找新的治療靶點，將對提高食管癌的療效具有重要的臨床意義。

microRNA(miRNA)是一類長度約18～25個核苷酸的非編碼RNA，在轉錄后水平調控靶基因的表達。miRNA通過與靶mRNA的3’-UTR區(qū)結合，導致靶mRNA降解或翻譯抑制，下調靶蛋白的表達，從而達到調控靶基因表達的目的。miRNA可以通過抑制腫瘤特定靶基因的表達來作為癌基因或抑癌基因。大量研究[3]表明，miRNA可以作為一種新型的標志物來評估腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和對治療的反應。研究者發(fā)現mir-181在結腸癌組織和耐藥乳腺癌小鼠模型中高表達并與其轉移及耐藥相關，但尚無其在食管癌中的研究，因此該研究探討了食管癌組織及食管癌細胞系中miR-181的表達情況及miR-181與臨床病理參數的相關性。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1標本收集2012年3月至2014年5月鄭州大學第一附屬醫(yī)院胸外科手術切除的新鮮食管鱗癌標本及相對應的癌旁組織56對，腫瘤組織均經病理學證實。標本采集后，采用液氮凍存，然后于-80 ℃儲存以備提取組織總RNA。

1.1.2細胞人食管上皮細胞系Het-1a和人食管鱗癌細胞系KYSE450、EC109均購于上海細胞庫。

1.1.3主要試劑DMEM/HIGH GLUCOSE培養(yǎng)基購自美國HyClone公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；RNAiso plus、cDNA逆轉錄試劑盒及SYBR Premix Ex TaqTM II購自日本Takara公司；miR-181 mimics和inhibitor由上海吉瑪設計；RT-PCR引物由上海生工合成。

1.2細胞培養(yǎng)Het-1a、KYSE450、EC109均為貼壁細胞，培養(yǎng)于含體積分數10%胎牛血清、100 u·mL-1青霉素和100 u·mL-1鏈霉素的DMEM/HIGH GLUCOSE完全培養(yǎng)基中，在37 ℃、體積分數5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3RT-PCRTRIzol法提取Het-1a及食管癌細胞和食管癌及癌旁正常食管組織中總RNA，檢測RNA的純度及濃度。結果顯示OD260/OD280比值在1.80～2.0之間，符合實驗要求。按照反轉錄試劑盒說明書合成cDNA，按SYBR Green試劑說明書用實時熒光定量PCR儀進行擴增。

2結果

2.1miR-181在食管鱗癌組織及食管癌細胞系中的表達食管癌組織、癌旁正常食管組織中miR-181的相對表達量分別為2.951 0±0.608 9、0.285 3±0.098 4，差異有統(tǒng)計學意義(t=4.322，P<0.05)。食管鱗癌細胞系KYSE450和EC109中miR-181的相對表達量分別為Het-1a的2.21倍和2.71倍，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。見圖1、2。

圖1　miR-181在食管鱗癌及相應癌旁正常食管組織中的表達

圖2　miR-181在不同食管鱗癌細胞系中的表達

2.2miR-181的表達與食管鱗癌臨床病理參數的關系食管鱗癌組織中miR-181的表達量與患者的腫瘤大小、分化程度及轉移情況有關。見表1。

3討論

腫瘤與miRNAs相關的研究正在受到越來越多的重視，研究者發(fā)現miRNAs在多種腫瘤的致癌和抑癌中發(fā)揮著重要的作用。miRNAs能夠參與腫瘤的進展，并影響其預后。例如，上調miR-143可以降低口腔鱗癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力，增加其凋亡率。低表達的miR-143與口腔鱗癌較差的預后密切相關[4]。miR-153能夠通過靶向SNAI1來抑制細胞的侵襲和遷移，并且能用來預測胰腺導管腺癌患者的預后[5]。對于食管鱗癌來說，許多miRNAs被證明可以作為新型的預測標志物，例如miR-382、miR-1294的低表達和miR-142-3p、miR-503的高表達與食管鱗癌差的預后相關[6-7]。我們的研究證明，與癌旁正常食管組織比較，miR-181在食管鱗癌組織中高表達，并且食管鱗癌細胞系與正常食管上皮細胞系相比，也顯示出了相同的趨勢。在食管鱗癌中miR-181與患者臨床病理參數的相關性分析中發(fā)現，其表達與腫瘤大小、分化程度及淋巴結轉移密切相關,而與性別、年齡無相關性。這就證明了miR-181可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展及臨床預后方面發(fā)揮著重要的作用，能夠為食管癌的診斷提供新型的標志物。

表1miR-181的表達與食管鱗癌臨床病理參數的關系

臨床病理參數nmiR-181高表達低表達P性別 男3220120.578 女24177年齡/歲 <60211290.565 ≥60352311腫瘤直徑/cm <52914150.029 ≥527216分化程度 高分化211110 中分化171250.005 低分化18162轉移 有211830.041 無352115

miR-181最早發(fā)現是在神經元細胞中高表達，后來在肌肉和造血系統(tǒng)中也被發(fā)現表達升高[8]。而miR-181在肝臟干細胞和在B淋巴細胞存在預示著其在調節(jié)分化狀態(tài)方面發(fā)揮著重要的作用[9]。有研究[10-11]發(fā)現miR-181在多種腫瘤中高表達，包括慢性淋巴細胞白血病和乳腺癌，但是在一些腫瘤中則表現為表達下調，例如膠質母細胞瘤和垂體腺瘤等。Huang等[12]證明了miR-181可以通過靶向Bcl-2來抑制肺癌細胞增殖侵襲和遷移，從而證明了miR-181在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。Tong等證明了mir-181在前列腺癌中高表達，可以通過靶向DAX-1來促進前列腺癌細胞的增殖和細胞周期的進程，從而說明了miR-181在前列腺癌中是促癌miRNA[13]。

綜上所述，miR-181在食管鱗癌組織及食管鱗癌細胞系中高表達，并且與食管鱗癌患者的臨床病理參數密切相關，miR-181可能作為食管癌新型的診斷指標和潛在的治療靶點。本課題組下一步的工作是研究mir-181在食管癌中的作用機制，為其在食管癌治療中的應用提供參考依據。

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Expression of MicroRNA-181 in the Esophageal Cancer

Hu Jie1,Shan Xi1,Zhang Weihong2

(1.DepartmentofGerontology,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;2.TheNursingCollege,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of miR-181 in the esophageal cancer and cell line,and the relationship between miR-181 with the clinical significance of esophageal cancer.MethodsThe expression level of miR-181 was determined by RT-PCR in the 56 human esophageal cancer tissue specimens and matched tumor-adjacent esophageal tissue specimens,and esophageal cancer cell line KYSE450,EC109.The association of miR-181 expression with clinicopathological characteristics in the patients with esophageal cancer was analyzed.ResultsCompared with the tumor-adjacent esophageal specimens,miR-181 was significantly high-regulated in the esophageal cancer tissue specimens (P<0.05).The miR-181 expression was elevated in the esophageal cell line KYSE450,EC109 compared with the Het-1a cell line (P<0.05).In the esophageal cancer tissue,the miR-181 expression was related with tumor size,pathological differentiation and metastasis.ConclusionHighly-expressed miR-181 is observed in the esophageal cancer tissues and cell lines,and it has significant correlation with tumor size,pathological differentiation and metastasis.The miR-181 represents a new potential therapeutic target for esophageal cancer treatment.

[Key words]miR-181; esophageal cancer; metastasis

(收稿日期：2015-12-10)

[中圖分類號]R735.1；R730.23

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5412(2016)02-0116-03

DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2016.02.007

作者簡介：虎婕(1985-)，女，主管護師，主要從事臨床護理研究工作。E-mail：xixibaby0329@126.com通信作者：張偉宏(1974-)，男，博士，副教授，主要從事社區(qū)老年病基礎與臨床護理研究工作。E-mail：zwhong306@zzu.edu.cn