虎杖酒制品的工藝優化研究

付　曉　段沐含　江海燕　葛　亮*

1.新疆醫科大學中醫學院，新疆　烏魯木齊　830011；2.新疆名醫名方與特色方劑學重點實驗室，新疆　烏魯木齊　830011；

3.廣西中醫藥大學，廣西　南寧　530200

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虎杖酒制品的工藝優化研究

付曉1,2段沐含1江海燕3葛亮1,2*

1.新疆醫科大學中醫學院，新疆烏魯木齊830011；2.新疆名醫名方與特色方劑學重點實驗室，新疆烏魯木齊830011；

3.廣西中醫藥大學，廣西南寧530200

【摘要】目的：對虎杖的酒制工藝進行條件考察，獲得最佳炮制工藝。方法：采用單因素考察方法確定虎杖藥材燜潤時間，采用正交實驗設計，以大黃素含量為評價指標，采用HPLC進行含量測定，考察加酒量、烘制時間、烘制溫度等3 個因素對虎杖酒制工藝的影響。結果：最佳提取工藝為藥材燜潤時間80min、加酒量15ml/100g飲片、烘制時間30min、烘制溫度60℃。結論：加酒量對虎杖酒制提取工藝影響最大。

【關鍵詞】虎杖；大黃素；正交實驗；HPLC

虎杖為蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb.et Zucc.的干燥塊莖和根,其性微寒,味微苦,具有清熱利濕、散瘀定痛、通便解毒、止咳化痰等功效。現代炮制以“洗凈,悶潤至透, 切厚片”[1]的潤品為主。虎杖的主要成分之一大黃素具有抗腫瘤、抗病毒 、抗炎、平喘等作用[2-3],現常用作控制虎杖質量的主要成分之一。近年來，虎杖的研究多見于有效成分、藥理藥效等研究，但炮制方面尤其是酒制法缺乏其提取工藝的系統研究。本文采用正交試驗對虎杖酒制工藝進行工藝優化，為合理制訂虎杖飲片質量提供可行性依據。

1儀器與材料

1.1儀器島津高效液相色譜儀(含 LC-6AD 高壓泵，SPD -20A 型紫外線檢測器， CBM-20A 色譜工作站)；KQ-400DB型數控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；9FZ-15B型多用粉碎機(四川省國營簡陽機械廠)；TGL-40B型離心機(上海安亭科學儀器廠)；101-3-S型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海躍進醫療器械)。

1.2材料大黃素對照品(批號：110756-201512，中國食品藥品檢定所);虎杖藥材經本院劉壽養教授鑒定為蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb.et Zucc.的干燥塊莖和根;甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，黃酒(浙江紹興)為市售品。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Alltima C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸(80∶20)；流速：1.0ml/min ；檢測波長：254nm ；柱溫：室溫。

2.2對照品溶液的制備精密稱取大黃素對照品2.50mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，濃度為0.1mg/ ml。

2.3 供試品溶液的制備取虎杖飲片，加黃酒拌勻，悶潤，按照因素水平表(表1)的方法炮制，趁熱粉碎，過65目。取炮制品細粉，稱定約0.1g，置于10ml具塞離心管中，加入2.5mol/L的硫酸5ml，于超聲器上混勻，置沸水浴維持 30min，取出，加水 4.0ml，振蕩使均勻，離心10min(2500r/min)，上清液經濾紙濾過，濾液棄去，濾膜連離心沉淀反復加甲醇用超聲波振蕩提取,每次5min，共8次，每次加甲醇 5ml，過濾，濾液于 50ml 量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，備用。

2.4線性關系精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0ml于5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取對照品20μl進行測定，以峰面積為橫坐標，溶液濃度為縱坐標，繪制標準曲線，線性回歸方程為Y=3543.02704X-55.410426(r=0.9998) , 結果表明：大黃素在 10 ～ 100μg范圍內具有良好的線性關系。

2.5穩定性試驗于0、4、8、12、24h分別吸取大黃素對照液 20μl測定，結果表明在 24h 基本穩定，RSD為 0.74 %。

2.6精密度試驗精密吸取對照品溶液 20μl，重復進樣 5 次，測定峰面積，求得RSD為0.08 %(n=5)。

2.7重復性試驗取虎杖按照“2.3供試品溶液的制備”方法制備，平行制備5份，按“2.1色譜條件”測定大黃素含量，求得RSD為0.48 %(n=5)。

2.8回收率試驗精密稱取虎杖酒炙品細粉約 0.05g(5份)，分別定量加入大黃素對照品溶液 (濃度為0.1mg/ml)按“2.1色譜條件”測定大黃素含量， 測得平均回收率為 98 .7 %，RSD=1.01 %。

2.9單因素考察考察虎杖藥材燜潤時間。取虎杖飲片100g三份，分別加黃酒10ml(加水稀釋一倍)拌勻，分別燜潤60、70、80 min，置干燥箱內60℃恒溫1h，取出趁熱粉碎，按照“2.3供試品溶液的制備”方法制備，按照“2.1色譜條件”測定大黃素含量。實驗結果表明，燜潤時間80 min大黃素含量最高。

2.10酒制工藝研究結合傳統酒制法的要求，選擇加酒量、烘制時間與溫度3個因素為考察因素，以虎杖中主要有效成分大黃素為考察指標，取凈虎杖飲片100g，選用L9(34)正交表進行實驗，試驗安排及結果見表1，2。

表1　因素水平表

表2　正交試驗表

表3　方差分析表

由實驗結果可知: 各因素對提取效果的影響大小順序為: A(加酒量)> B(烘制時間) > C(烘制溫度)，A 因素影響差異有統計學意義(P<0.05)，B因素與C因素影響差異無統計學意義。直觀分析得提取工藝為A2B1C2。即加酒量15ml，烘制時間30min，烘制溫度60℃。

2.11工藝驗證取虎杖100g，加酒量15ml(加水稀釋1倍)，燜潤80min，放入60℃烘箱，烘制30min，平行實驗3次。結果大黃素平均含量為1.933%，與正交實驗各工藝結果比較均相對較高。

3討論

3.1文中加酒燜潤時，需加水稀釋一倍，可以避免浸泡藥材局部濃度太高，同時可以加大藥材與液體的接觸面積，浸泡充分。實驗對虎杖酒制工藝進行工藝優化，規范酒制工序，為合理制訂虎杖飲片質量提供可行性依據。

3.2虎杖主要成分為大黃素，具有抗病毒、抗炎、抗菌、平喘及降壓等作用，虎杖經酒炙后大黃素含量與生品的大黃素含量后續需進一步做補充對比，且虎杖酒制品是否對藥效產生影響有待進一步研究。

參考文獻

[1] 黃拓,江海燕,盧忠朋, 等. 虎杖炮制的歷史沿革及其飲片質量研究概況[J].中醫藥學刊，2005, 23(9): 1611-1612.

[2] 陳易彬,孫寶祥,陳佳希, 等. 虎杖中白藜蘆醇的穩定性研究[J]. 中藥材，2007, 30(7): 805-807.

[3] 陳怡,杭太俊,許欣欣,等. 不同產地虎杖中總黃酮含量的比較[J].江蘇藥學與臨床研究，2006, 14(6): 399-401.

Optimization of the yellow rice wine Process for Rhizoma Polygoni Cuspidati by Orthogonal Test

FU Xiao1,2DUAN Muhan1JIANG Hayan3GE Liang1,2﹡

1.College of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China;2.Xinjiang Key Laboratory of Famous Prescription and Science of Formulas. Urumqi 830011,China;3.Guangxi University of Chinese Medicine,guangxi nanning 530200，China

Abstract:Objective To establish a method for determining the emodin in Rhizoma Polygoni Cuspidati from sample baked with yellow rice wine by HPLC.Methods Single factor test was used to evaluate soaking time.Orthogonal test was used to evaluate the influence of the 3 factors, including the amount of yellow rice wine,baking time and temperature. The content of emodin was determined by HPLC.Results The optimum extraction is as follows: 80 min soaking time， the amount of yellow rice wine is 15ml/(100g)，baking 30 min and 60℃.Conclusion The amount of yellow rice wine significantly influenced the yield of emodin very much.

Key words:Rhizoma Polygoni Cuspidati; Emodin; Orthogonal test; HPLC

(收稿日期：2016.01.26)

【中圖分類號】R283.3

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)07-0017-02

作者簡介：付曉(1983-)，女，碩士，助理實驗師，主要從事藥物質量控制與分析。E-mail：1836239562@qq.com通信作者：葛亮(1980-)，男，博士，高級實驗師，主要從事中藥民族藥質量評價研究。E-mail：geliang917@163.com

基金項目：新疆自治區科技基礎條件平臺建設項目(PT1413)；新疆維吾爾自治區重點實驗室科研開放課題基金(XJDX0910-2012-4)。