虎杖酒制品的工藝優(yōu)化研究

付曉 段沐含 江海燕 葛亮

【摘要】目的：對(duì)虎杖的酒制工藝進(jìn)行條件考察，獲得最佳炮制工藝。方法：采用單因素考察方法確定虎杖藥材燜潤(rùn)時(shí)間，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以大黃素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用HPLC進(jìn)行含量測(cè)定，考察加酒量、烘制時(shí)間、烘制溫度等3 個(gè)因素對(duì)虎杖酒制工藝的影響。結(jié)果：最佳提取工藝為藥材燜潤(rùn)時(shí)間80min、加酒量15ml/100g飲片、烘制時(shí)間30min、烘制溫度60℃。結(jié)論：加酒量對(duì)虎杖酒制提取工藝影響最大。

【關(guān)鍵詞】虎杖；大黃素；正交實(shí)驗(yàn)；HPLC

【中圖分類號(hào)】R283.3 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）07-0017-02

Abstract：Objective To establish a method for determining the emodin in Rhizoma Polygoni Cuspidati from sample baked with yellow rice wine by HPLC.Methods Single factor test was used to evaluate soaking time.Orthogonal test was used to evaluate the influence of the 3 factors， including the amount of yellow rice wine，baking time and temperature. The content of emodin was determined by HPLC.Results The optimum extraction is as follows： 80 min soaking time， the amount of yellow rice wine is 15ml/（100g），baking 30 min and 60℃.Conclusion The amount of yellow rice wine significantly influenced the yield of emodin very much.

Keywords：Rhizoma Polygoni Cuspidati； Emodin； Orthogonal test； HPLC

虎杖為蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥塊莖和根，其性微寒，味微苦，具有清熱利濕、散瘀定痛、通便解毒、止咳化痰等功效。現(xiàn)代炮制以“洗凈，悶潤(rùn)至透， 切厚片”[1]的潤(rùn)品為主。虎杖的主要成分之一大黃素具有抗腫瘤、抗病毒 、抗炎、平喘等作用[2-3] ，現(xiàn)常用作控制虎杖質(zhì)量的主要成分之一。近年來，虎杖的研究多見于有效成分、藥理藥效等研究，但炮制方面尤其是酒制法缺乏其提取工藝的系統(tǒng)研究。本文采用正交試驗(yàn)對(duì)虎杖酒制工藝進(jìn)行工藝優(yōu)化，為合理制訂虎杖飲片質(zhì)量提供可行性依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀（含 LC-6AD 高壓泵，SPD -20A 型紫外線檢測(cè)器， CBM-20A 色譜工作站）；KQ-400DB型數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；9FZ-15B型多用粉碎機(jī)（四川省國(guó)營(yíng)簡(jiǎn)陽(yáng)機(jī)械廠）；TGL-40B型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；101-3-S型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械）。

1.2 材料 大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110756-201512，中國(guó)食品藥品檢定所）；虎杖藥材經(jīng)本院劉壽養(yǎng)教授鑒定為蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥塊莖和根；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，黃酒（浙江紹興）為市售品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Alltima C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸（80∶20）；流速：1.0ml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm ；柱溫：室溫。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃素對(duì)照品2.50mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，濃度為0.1mg/ ml。

2.3 供試品溶液的制備 取虎杖飲片，加黃酒拌勻，悶潤(rùn)，按照因素水平表（表1）的方法炮制，趁熱粉碎，過65目。取炮制品細(xì)粉，稱定約0.1g，置于10ml具塞離心管中，加入2.5mol/L的硫酸5ml，于超聲器上混勻，置沸水浴維持 30min，取出，加水 4.0ml，振蕩使均勻，離心10min（2500r/min），上清液經(jīng)濾紙濾過，濾液棄去，濾膜連離心沉淀反復(fù)加甲醇用超聲波振蕩提取，每次5min，共8次，每次加甲醇 5ml，過濾，濾液于 50ml 量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，備用。

2.4 線性關(guān)系 精密吸取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0ml于5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取對(duì)照品20μl進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為橫坐標(biāo)，溶液濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y=3543.02704X-55.410426（r=0.9998） ， 結(jié)果表明：大黃素在 10 ～ 100μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 于0、4、8、12、24h分別吸取大黃素對(duì)照液 20μl測(cè)定，結(jié)果表明在 24h 基本穩(wěn)定，RSD 為 0.74 %。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液 20μl，重復(fù)進(jìn)樣 5 次，測(cè)定峰面積，求得 RSD 為0.08 %（n=5）。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取虎杖按照“2.3供試品溶液的制備”方法制備，平行制備5份，按“2.1色譜條件”測(cè)定大黃素含量，求得RSD為0.48 %（n=5）。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取虎杖酒炙品細(xì)粉約 0.05g（5份），分別定量加入大黃素對(duì)照品溶液 （濃度為0.1mg/ml）按“2.1色譜條件”測(cè)定大黃素含量， 測(cè)得平均回收率為 98 .7 %，RSD=1.01 %。

2.9 單因素考察 考察虎杖藥材燜潤(rùn)時(shí)間。取虎杖飲片100g三份，分別加黃酒10ml（加水稀釋一倍）拌勻，分別燜潤(rùn)60、70、80 min，置干燥箱內(nèi)60℃恒溫1h，取出趁熱粉碎，按照“2.3供試品溶液的制備”方法制備，按照“2.1色譜條件”測(cè)定大黃素含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，燜潤(rùn)時(shí)間80 min大黃素含量最高。

2.10 酒制工藝研究 結(jié)合傳統(tǒng)酒制法的要求，選擇加酒量、烘制時(shí)間與溫度3個(gè)因素為考察因素，以虎杖中主要有效成分大黃素為考察指標(biāo)，取凈虎杖飲片100g，選用L9（34）正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)安排及結(jié)果見表1，2。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知： 各因素對(duì)提取效果的影響大小順序?yàn)椋?A（加酒量）> B（烘制時(shí)間） > C（烘制溫度），A 因素影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），B因素與C因素影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。直觀分析得提取工藝為A2B1C2。即加酒量15ml，烘制時(shí)間30min，烘制溫度60℃。

2.11 工藝驗(yàn)證 取虎杖100g，加酒量15ml（加水稀釋1倍），燜潤(rùn)80min，放入60℃烘箱，烘制30min，平行實(shí)驗(yàn)3次。結(jié)果大黃素平均含量為1.933%，與正交實(shí)驗(yàn)各工藝結(jié)果比較均相對(duì)較高。

3 討論

3.1 文中加酒燜潤(rùn)時(shí)，需加水稀釋一倍，可以避免浸泡藥材局部濃度太高，同時(shí)可以加大藥材與液體的接觸面積，浸泡充分。實(shí)驗(yàn)對(duì)虎杖酒制工藝進(jìn)行工藝優(yōu)化，規(guī)范酒制工序，為合理制訂虎杖飲片質(zhì)量提供可行性依據(jù)。

3.2 虎杖主要成分為大黃素，具有抗病毒、抗炎、抗菌、平喘及降壓等作用，虎杖經(jīng)酒炙后大黃素含量與生品的大黃素含量后續(xù)需進(jìn)一步做補(bǔ)充對(duì)比，且虎杖酒制品是否對(duì)藥效產(chǎn)生影響有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃拓，江海燕，盧忠朋， 等. 虎杖炮制的歷史沿革及其飲片質(zhì)量研究概況[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2005， 23（9）： 1611-1612.

[2] 陳易彬，孫寶祥，陳佳希， 等. 虎杖中白藜蘆醇的穩(wěn)定性研究[J]. 中藥材，2007， 30（7）： 805-807.

[3] 陳怡，杭太俊，許欣欣，等. 不同產(chǎn)地虎杖中總黃酮含量的比較[J].江蘇藥學(xué)與臨床研究，2006， 14（6）： 399-401.

（收稿日期：2016.01.26）