不同品種（系）煙草普通花葉病（TMV）的抗病性鑒定

陳金 李夢狄 謝友 曾楊貴 陳志

摘要：【目的】篩選地方性優(yōu)質(zhì)抗煙草普通花葉病（TMV）煙草種質(zhì)，為湘中北烤煙抗TMV育種提供優(yōu)良的種質(zhì)資源。【方法】采用苗期溫室病圃人工接種誘發(fā)方法結(jié)合大田病圃鑒定，以Coker176為抗病對照、革新3號為中抗對照、G140為感病對照，對9625、金星6007、小黃金0019、401-2、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號等18個烤煙品種（系）進行TMV抗病性鑒定。【結(jié)果】在供試品種（系）中，篩選出抗病品種（系）2個，分別為T61和9625，占供試品種（系）總數(shù)的11.1%；中抗品種5個，分別為金星6007、03-4-3、胎里黃1061、VESTA33和云煙98，占27.8%；感病品種（系）11個，分別為小黃金0019、401-2、311、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號、大白筋0522、滬金3號、大葉永煙、長脖黃和NC95，占61.1%。【結(jié)論】篩選出T61和9625兩個抗TMV烤煙品種，可作為湘中北地區(qū)抗TMV育種的重要種質(zhì)資源；同時可在湘中北地區(qū)進行T61和9625的示范性推廣種植。

關(guān)鍵詞： 煙草品種（系）；煙草普通花葉病；人工接種；抗病性；抗病育種

中圖分類號： S435.72 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-1191（2016）10-1704-05

0 引言

【研究意義】煙草普通花葉病（Tobacco mosaic virus，TMV）是煙草主要病害之一，湖南、廣西、廣東等省（區(qū)）TMV發(fā)病較重，其中，湖南煙區(qū)TMV田間發(fā)病率一般可達(dá)20%，嚴(yán)重的高達(dá)50%（張洪波，2007）。目前，化學(xué)農(nóng)藥對TMV無良好防治效果，且煙草收獲器官為葉片，一旦葉片染病，將直接影響煙葉烘烤及其品質(zhì)。抗TMV煙草品種選育是防治該病最經(jīng)濟、有效的方法，而開展抗TMV煙草品種選育的首要步驟是篩選抗TMV品種資源。因此，開展煙草品種（系）抗TMV鑒定對湘中北煙區(qū)抗TMV品種選育及推廣種植具有重要意義。【前人研究進展】在煙草抗病性鑒定研究方面，于海芹等（2007）采用大田病圃鑒定法，以Cokerl76為抗病對照，在1%水平上篩選出902-42、云煙201、云煙202、YH05和云煙203等抗病品種；蔣乾坤等（2010）采用田間自然發(fā)病鑒定法，以中煙90和V2為中抗對照，篩選出OX2028、云煙201、黃筋蔸、RG85和云煙87等抗病品種；李梅云等（2013）采用溫室鑒定法，對146份煙草種質(zhì)資源進行黑脛病和TMV的抗性鑒定，篩選出朝鮮抗赤、筑波1號、Burley21、Coker86、NC567、SC71、SC72、Cokerl76等抗TMV品種（系）19份；林龍云等（2013）采用田間鑒定和分子鑒定相結(jié)合的方法，篩選出阿喬密目、Y-1和永定400三個高抗煙草花葉病品種；金愛蘭等（2014）采用溫室鑒定法，篩選出B7、8107、SY03-1、SZ08-01、SZ08-02、SZ08-03、延曬五號、延曬六號、延曬九號和延曬十號等19個抗TMV曬煙品種。【本研究切入點】前人使用的煙草抗TMV鑒定方法有傳統(tǒng)的溫室鑒定、田間鑒定和最近流行的分子鑒定等方法，各方法各有優(yōu)劣。本研究采用苗期溫室病圃鑒定和大田病圃鑒定的方法，結(jié)合兩者優(yōu)點，選用近幾年主流抗性品種和自育抗性品系在溫室和大田兩種不同環(huán)境下對照鑒定，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性更高。【擬解決的關(guān)鍵問題】在湖南長沙生態(tài)環(huán)境下采用苗期溫室病圃人工接種誘發(fā)方法結(jié)合大田病圃鑒定開展多品種（系）煙草普通花葉病抗病性鑒定，以期篩選出抗TMV種質(zhì)材料，為湘中北烤煙抗TMV育種提供優(yōu)良的種質(zhì)資源。

1 材料與方法

1. 1 試驗地概況

試驗于2015年在湖南省長沙市大屯營鎮(zhèn)進行，試驗地海拔47 m，地處東經(jīng)115°22′、北緯27°53′。試驗地地面平整，肥力中等，無嚴(yán)重病史，無旱、澇災(zāi)害，盆栽土取自同一地塊土壤加適量基肥混合而成。

1. 2 供試品種（系）

供試種質(zhì)21個，分別為：Coker176（抗性對照，CK1）、革新3號（中抗對照，CK2）、G140（感病對照，CK3）、9625、金星6007、小黃金0019、401-2、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號、大白筋0522、滬金3號、03-4-3、大葉永煙、云煙98、長脖黃、NC95、VESTA33、311、T61和胎里黃1061，所有種子均來源于湖南省長沙市煙草公司。

1. 3 試驗方法

1. 3. 1 溫室病圃人工接種誘發(fā)鑒定 在大棚內(nèi)進行盆栽試驗，采用隨機區(qū)組設(shè)計，3次重復(fù)。每個品種（系）為1個處理，每個重復(fù)16株。21個品種（系）均在2015年2月2日播種，采用少基質(zhì)淺水育苗，煙苗苗期長勢旺盛，出苗率高，3月20～26日間苗2次，4月14日移栽到營養(yǎng)缽中，于4月30日進行病毒接種。

試驗采用土壤盆栽汁液摩擦接種鑒定法，接種體選用當(dāng)?shù)貎?yōu)勢株系或根據(jù)試驗需要就地選取，接種到系統(tǒng)寄主上繁殖保存。為防止保存期病毒致病力退化，在使用前15 d轉(zhuǎn)接到Coker176上復(fù)壯1次，備用。煙草普通花葉病毒取自本地大田。煙苗移栽后16 d接種，采用高壓噴槍接種病毒稀釋液，噴射壓力為2.0 kg/cm2，接種濃度為1%。接種后10、20、30 d調(diào)查全部煙株發(fā)病情況。以最后一次病情指數(shù)調(diào)查結(jié)果計算品種抗性，病害程度等級以最后一次調(diào)查結(jié)果作為分級依據(jù)。

1. 3. 2 大田病圃鑒定 3月20日取苗期試驗煙苗移栽大田，每個煙草種質(zhì)移栽16株（其中每個煙草種質(zhì)各留2株不接種TMV作為對照，并與接種TMV的其他煙株隔離種植觀察），移栽大田的煙苗共計336株，行株距約1.00 m×0.48 m，栽培管理同大田生產(chǎn)。接種方法和病情指數(shù)調(diào)查同溫室試驗。

1. 4 抗性分級及抗性評價

按國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23222-2008（中國煙草總公司青州煙草研究所，2009）進行病害嚴(yán)重度分級，根據(jù)病害嚴(yán)重度及對照品種的發(fā)病情況，確定病級及計算病情指數(shù)。

病情指數(shù)=Σ（各級病株或病葉數(shù)×該病級數(shù)）/（調(diào)查總株或葉數(shù)×最高級數(shù)）×100

根據(jù)感病對照達(dá)到感病時調(diào)查的各品種病情指數(shù)，將品種的抗性劃分為4級：抗病（R），病情指數(shù)25.0以下；中抗（MR），病情指數(shù)在25.1～50.0；中感（MS），病情指數(shù)在50.1～75.0；感病（S），病情指數(shù)在75.0以上；免疫，病情指數(shù)為0。

2 結(jié)果與分析

2. 1 苗期不同調(diào)查期各品種（系）TMV發(fā)病情況

從最后一次調(diào)查數(shù)據(jù)看，小黃金0019、小黃金1025和NGLAUCA病害程度主要為9級，少部分為7級和5級；延煙2號、滬金3號、長脖黃、G140、革新3號、云煙98、311、401-2、金星6007、大白筋0522、大葉永煙、胎里黃1061和VESTA33以7級為主，少部分為9級和5級；NC95的病害程度以7級和5級占較大比重；抗性對照Coker176的病害程度分級比較分散，0級和3級均為3株，1級、0級及3級較多，5級占少部分；9625以1級和3級為主；T61主要為0級和1級（表1）。從病害程度分級來看，T61和9625有較好的表現(xiàn)，其他品種表現(xiàn)較差。

不同品種（系）TMV發(fā)病率情況見表2。接種病毒10 d后，所有品種（系）均發(fā)生TMV，其中，T61、9625、Coker176、云煙98、VESTA33、革新3號和長脖黃的發(fā)病率較低，均低于25.0%；311和03-4-3也有較好的表現(xiàn)，發(fā)病率低于30.0%；其他品種（系）的發(fā)病率均偏高，其中大葉永煙的發(fā)病率最高，為64.6%。在病情指數(shù)方面，T61、9625、Coker176、胎里黃1061和革新3號的病情指數(shù)均低于25.0，說明這些品種（系）在前期有較好的抗病能力；云煙98、金星6007、03-4-3、VESTA33、滬金3號、401-2和G140的病情指數(shù)均低于50.0，具有一定的抗病能力；其他品種（系）的病情指數(shù)較接近，均高于50.0，其中NGLAUCA的病情指數(shù)最高，為66.7，表現(xiàn)出較強的感病能力。

接種病毒20 d后，各品種（系）發(fā)病率均有提高，其中，小黃金1025、延煙2號、NGLAUCA、長脖黃和G140變化明顯，發(fā)病率相比于接種病毒10 d時上升了20.0%以上。發(fā)病率低于30.0%的有：T61、9623、Coker

176、云煙98和VESTA33。

接種病毒30 d后，除滬金3號發(fā)病率有明顯提高外，其他品種（系）發(fā)病率較平穩(wěn)，增幅較小。T61和9625的發(fā)病率與抗病對照Coker176接近，在25.0%～

30.0%；云煙98、03-4-3、胎里黃1061、VESTA33和革新3號的發(fā)病率為30.0%～50.0%；金星6007的發(fā)病率達(dá)52.1%，其他品種（系）發(fā)病嚴(yán)重，發(fā)病率最高的NGLAUCA和小黃金1025達(dá)85.4%。在病情指數(shù)方面，VESTA33、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號、NC95、長脖黃、小黃金0019變化較大，相比接種20 d時病情指數(shù)上升了10.0以上；其他品種（系）變化相對較小。

2. 2 溫室病圃鑒定不同品種（系）對TMV的抗病性差異

綜合表2、表3可知，T61和9625對TMV的抗性較強，3次調(diào)查的病情指數(shù)均未超過25.0，其中，T61的平均病情指數(shù)為6.6，低于抗病對照Coker176（11.4）。金星6007、云煙98、03-4-3、胎里黃1061和VESTA33的病情指數(shù)與中抗對照革新3號較接近，均未高于50.0，其他品種（系）的病情指數(shù)均較高，在第3次病情指數(shù)調(diào)查中均超過75.0。就平均病情指數(shù)來看，NGLAUCA的平均病情指數(shù)最高（79.3），最易感染TMV；其次分別為小黃金1025、長脖黃、311、大葉永煙、滬金3號、延煙2號、NC95、大白筋0522、感病對照G140、401-2和小黃金0019，這些品種（系）的病情指數(shù)較高，栽培過程中容易感染TMV，種植時應(yīng)注意防范；云煙98、金星6007、VESTA33、03-4-3、胎里黃1061及中抗對照革新3號具有一定的抗病能力。抗病品系中9625抗性最弱，抗病對照Coker176次之，T61抗病能力最強，具有較高的研究價值。

由表3可知，供試品種（系）中抗病品種（系）有T61和9625，占11.1%；中抗品種（系）有金星6007、云煙98、03-4-3、胎里黃1061和VESTA33，占27.8%；沒有中感品種（系）；感病品種（系）最多，分別為小黃金0019、401-2、311、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號、滬金3號、大白筋0522、大葉永煙、長脖黃和NC95，占61.1%。

2. 3 溫室與大田病圃鑒定比較

由表4可知，供試的21個品種（系）中，溫室鑒定結(jié)果與大田鑒定一致的有18個品種，一致率達(dá)85.71%。鑒定結(jié)果表明，煙草對TMV的抗性受外界的影響較明顯，在肥力水平更高，光照、水分、空氣情況更優(yōu)越的情況下對TMV的抗性越強。

3 討論

長期以來，湖南煙區(qū)使用云煙87、云煙97等云煙系列品種及K326和紅花大金元等傳統(tǒng)品種，品種可替代性較差、可選擇面較窄（徐安傳等，2011），雖然目前煙草育種中對煙屬野生種和普通煙草品種的抗性有較多研究，但隨著生產(chǎn)上煙草普通花葉病日益嚴(yán)重，很多品種已不能滿足生產(chǎn)的要求（陳啟建，2003）。特色優(yōu)質(zhì)抗性育種是煙區(qū)發(fā)展、豐富烤煙種質(zhì)資源的重要手段。雖然育種工作者選育出不少優(yōu)良種質(zhì)資源，如云南煙草研究院對60個品種進行了TMV抗病性鑒定，得出PVH09、YH02、PVH01、PVH02、PVH03、PVH05、PVH06、PVH08、8902-42、99305等16個抗性品種（段玉琪等，2004）；云南煙草研究院2001～2003年對471個煙草品種資源進行抗性鑒定，并把這些資源對TMV的抗病性進行分類，初步篩選出Coker176、PVH03、懶出頭、牡單81-56、牡單80-7、牡單82-5-1、H423、6349、22-22、B22、8022、W3-1-1、朝鮮抗赤、筑波1號、Vamorr48、Ky12等抗病品種67個，中抗品種183個（許美玲等，2004），但這些優(yōu)良品種（系）在不同地區(qū)的適應(yīng)性也不盡相同，而湖南煙區(qū)缺乏有自主知識產(chǎn)權(quán)的品種，因此，湖南煙區(qū)需根據(jù)自身的環(huán)境特點，選育一批抗性強、品質(zhì)優(yōu)、特色風(fēng)味突出的品種（系），進一步優(yōu)化品種結(jié)構(gòu)，擴寬品種選擇面。

本研究結(jié)果顯示，9625和T61對TMV達(dá)到抗病（R）水平，特別是T61的抗病表現(xiàn)較抗病對照Coker176更優(yōu)；金星6007、03-4-3、胎里黃1061、VESTA33和云煙98達(dá)到中抗（MR）水平，其中胎里黃1061和VESTA33前期的表現(xiàn)尤為突出；小黃金0019、401-2、311、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號、大白筋0522、滬金3號、大葉永煙、長脖黃和NC95的TMV發(fā)病率高，病情指數(shù)亦高，屬于感病（S）品種（系）。本研究鑒定的18個品種（系）中，9個品種（系）的鑒定結(jié)果與前人鑒定結(jié)果（段玉琪等，2004；許美玲等，2004；蔣乾坤等，2010；林龍云等，2013；金愛蘭等，2014）基本一致；前人未鑒定的剩余9個品種（系）中，T61和9625為抗性品種（系），胎里黃1061、03-4-3和金星6007為中抗品種（系），小黃金0019、401-2、大白筋0522和NC95為感病品種（系）。本研究尚未進行分子鑒定工作，將在下一步的研究中開展；同時，在后續(xù)研究中將著重進行兩方面的工作，一是對9625和T61進行大田示范推廣種植，開展大田自然發(fā)病鑒定，以進一步掌握其抗病性；二是以9625和T61為親本組配雜交組合，選育高抗優(yōu)質(zhì)品種。

4 結(jié)論

本研究篩選出T61和9625兩個抗TMV烤煙品種（系），可作為湘中北地區(qū)抗TMV育種的重要種質(zhì)資源；同時可在湘中北地區(qū)進行T61和9625的示范性推廣種植。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）