不同受精方式的囊胚發育速度及其臨床結局分析

唐永梅，韋繼紅，韋立紅，牟聯俊，徐麗湘，秦祖興，唐　妮

(廣西柳州市婦幼保健院，廣西 柳州 545001)

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不同受精方式的囊胚發育速度及其臨床結局分析

唐永梅，韋繼紅，韋立紅，牟聯俊，徐麗湘，秦祖興，唐妮

(廣西柳州市婦幼保健院，廣西 柳州 545001)

[摘要]目的探討不同受精方式對囊胚發育速度的影響及不同發育速度的囊胚對臨床結局的影響。方法回顧性分析行囊胚培養和移植的患者資料，按受精方式不同分常規體外受精(IVF)組和卵胞漿內單精子顯微注射(ICSI)組，觀察2組新鮮培養周期的囊胚形成率、移植囊胚后的臨床妊娠率、種植率以及凍融囊胚不同胚齡的移植結局，比較不同發育速度的囊胚在新鮮周期和凍融周期的移植結局。結果具有相同D3優胚率時，IVF組囊胚形成率和D5形成率明顯高于ICSI組，新鮮囊胚和凍融囊胚移植臨床妊娠率和種植率比較差異無統計學意義(P均>0.05)。D5形成的囊胚比D6形成的囊胚優胚率、囊胚種植率及妊娠率高(P均<0.05)。結論受精方式影響囊胚發育速度，IVF受精可以提高囊胚形成率和D5囊胚形成率；囊胚發育速度影響囊胚移植的臨床結局，移植D5囊胚比移植D6囊胚的妊娠率及種植率高。

[關鍵詞]受精方式；囊胚形成率；妊娠率；種植率

在體外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞漿內單精子顯微注射(ICSI)治療中，移植胚胎的發育潛能決定著妊娠結局。目前根據形態學評估指標外，還要結合每個發育階段胚胎的專有特征綜合評價，以期準確評價胚胎活力，挑選有活力的胚胎進行移植。其中胚胎分裂速度是胚胎發育潛能的重要指標。大樣本研究發現，發育停滯或卵裂過慢、過快胚胎中染色體異常發生率較正常胚胎顯著升高[1-2]。在穩定的胚胎培養微環境下，胚胎體外培養延長至囊胚期，以囊胚的形成及形態學特征反映胚胎的生命力[3]，而囊胚形成率是衡量胚胎質量和發育潛力的金標準[4]。本研究探討了不同受精方式對囊胚發育速度的影響及不同發育速度的囊胚對臨床結局的影響，旨在為有效提高臨床妊娠率，改善胚胎移植方案提供實驗依據。

1臨床資料

1.1一般資料回顧性分析2013年1—12月在柳州市婦幼保健院生殖中心行IVF/ICSI治療的不孕癥患者資料，根據受精方式不同分為IVF組和ICSI組，然后根據移植囊胚的胚齡分為D5組和D6組。凍融囊胚移植周期入選標準為僅移植D5囊胚或D6囊胚的周期共計611個周期納入本研究。凍融囊胚內膜準備方法采用自然周期、激素替代周期或促排卵周期。

1.2囊胚培養和移植囊胚培養基采用序貫培養基(瑞典Vitrolife)，D3胚胎從G1培養液移入G2培養液，于37 ℃，6%CO2和5% O2環境培養。對形成的囊胚按照Gardner囊胚評分方法進行評級。持續觀察D5和D6囊胚形成情況，形成3CC以上囊胚即可進行移植或冷凍。冷凍和解凍試劑均采用玻璃化試劑(美國Medicult)。解凍后的囊胚在囊胚培養滴中培養2 h后重新擴張到具有正常內細胞團和滋養外胚層形態視為存活。移植囊胚數不超過2個。囊胚移植后12 d檢測血、尿陽性者確認為生化妊娠，囊胚移植后28 d B超檢查發現有妊娠囊視為臨床妊娠。妊娠者予以黃體酮支持10～12周。

1.3觀察指標觀察不同受精方式的新鮮培養周期的囊胚形成率、移植囊胚后的臨床妊娠率、種植率以及凍融囊胚不同胚齡的移植結局，比較不同發育速度的囊胚在新鮮周期和凍融周期的移植結局。

1.4統計學方法采用SPSS 13.0統計軟件進行統計處理，均數比較采用t檢驗，率的比較采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1患者一般情況納入研究的1 222例患者的1 227個囊胚培養周期，其中IVF有1 036個周期，ICSI 191個周期。行新鮮囊胚移植249個周期，其中移植D5囊胚218個周期，移植D6囊胚31個周期；行凍融囊胚移植611個周期，其中移植D5囊胚344個周期，移植D6囊胚267個周期。

2.2不同受精方式的新鮮囊胚培養及移植結局2組具有相同D3優胚率，IVF組的囊胚形成率和D5形成率顯著高于ICSI組，2組D5優胚率均顯著高于D6優胚率(P均<0.05)，但2組臨床妊娠率和種植率比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

2.3不同受精方式的凍融囊胚移植結局2組同級別囊胚移植具有相似的臨床妊娠率、種植率和流產率(P均>0.05)。見表2。

表1　不同受精方式的新鮮囊胚培養及移植結局　%

表2　不同受精方式的凍融囊胚移植結局

2.4新鮮周期和凍融周期D5和D6囊胚移植妊娠結局比較在新鮮移植周期中，D5組囊胚優胚率、臨床妊娠率、種植率均顯著高于D6組(P均<0.05)，而早期流產率差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。在凍融胚胎移植周期中，D5組囊胚優胚率、臨床妊娠率和種植率與D6組比較差異有統計學意義(P均<0.05)，而早期流產率差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

3討論

表3　新鮮周期D5和D6囊胚移植妊娠結局的比較

表4　凍融周期D5和D6囊胚移植妊娠結局的比較

胚胎體外培養成囊胚的過程有助于胚胎的自我篩選，囊胚期移植使胚胎發育和子宮內膜的生理階段同步化，宮頸黏液減少，利于移植操作，同時縮短了胚胎植入宮腔后進一步發育與著床之間的間隔，且子宮收縮逐漸減少，可減少胚胎排出體外的機會[5]。選擇高質量的囊胚移植不但可以顯著提高胚胎著床率及臨床妊娠率，還可減少多胎妊娠發生的風險[6]。

胚胎的質量影響囊胚形成率、囊胚質量和種植率。隨著胚胎碎片的增多，囊胚形成率降低，囊胚的細胞數目尤其是滋養外胚層數目減少。胚胎碎片會影響細胞之間的連接，干擾細胞的融合、囊腔和囊胚的形成；碎片釋放的有毒物質會損傷其鄰近的細胞，使其凋亡；碎片還會減少胞質的體積，耗竭胚胎發育所需要的細胞器，造成卵裂球和/或胞漿的損失；囊胚形成率與卵裂速度成正比，卵裂速度較快的胚胎更容易形成優質囊胚[7-9]。Loutradi等[10]報道嚴重畸形精子在受精率、卵裂率、優胚率等方面明顯低于非嚴重畸形精子組。因為畸形精子的超微結構的異常、內部DNA的微缺失等導致的功能缺陷通過ICSI后將影響胚胎的發育潛能，從而使受精率、卵裂率、優胚率等有所下降。這也解釋了本研究結果新鮮周期胚胎培養囊胚時，具有相同D3優胚率，IVF組的囊胚形成率和D5囊胚形成率明顯高于ICSI組的原因，但不同受精方式獲得的相同級別的凍融囊胚移植可獲得相似的妊娠率和種植率。

囊胚發育速度反映了胚胎質量和發育潛能。岳超敏等[11]通過單囊胚移植周期亦發現，第5天發育為囊胚的胚胎比第6天的囊胚具有較高的種植率。Kovalevsky等[12]比較D5、D6和D7 3組囊胚，發現D5囊胚種植率、臨床妊娠率和持續妊娠率明顯高于D6、D7組的囊胚，認為囊胚發育速度能夠影響囊胚移植的結局。本研究結果顯示，在新鮮周期囊胚培養中不論受精方式， D5形成的囊胚均比D6形成的囊胚優胚率高，意味著囊胚形成延遲的胚胎質量較差，所以移植囊胚時，具有較高優胚率組的臨床妊娠率和種植率更高，當囊胚優胚率相似時，D6囊胚與D5囊胚具有相似的妊娠率，Alfaraawati等[13]利用滋養層活檢對囊胚進行非整倍體發生率時發現，發育延遲的囊胚非整倍體率顯著高于正常發育組。這也解釋了移植D5囊胚比D6囊胚可獲得更好的妊娠結局的原因之一。但Sunkara等[14]對1995—2008年的相關凍融囊胚移植的研究資料進行meta分析得出結論：D5囊胚比D6囊胚具有較高的臨床妊娠率和持續妊娠率，但在評分一致的情況下，D6囊胚與D5囊胚具有相似的妊娠率。這也提示在行凍融囊胚移植時既要考慮胚齡，同時還應該參考囊胚評級。囊胚培養是體外篩選胚胎的好方法，但目前認為原核期胚胎發育成囊胚并不完全說明它具有生存能力，囊胚培養體系還不夠完善，囊胚的評分標準還有待細化，體外延長培養過程的不利環境可以影響胚胎的生長發育，降低胚胎冷凍率，甚至會增加患者無囊胚移植的風險。

總之，胚胎培養體外延長至囊胚期使胚胎的發育潛能在體外得到進一步篩選，囊胚移植更符合生理要求，可減少移植胚胎數量、降低多胎妊娠率但不降低臨床妊娠率。囊胚的發育速度及形態學特征可反映胚胎的生命力，囊胚形成率可衡量胚胎質量和發育潛力，這是在我們進行胚胎移植和凍融胚胎移植時要考慮的因素。在人類輔助生殖技術上我們要盡可能地選擇接近生理條件的體外受精方式，以最大限度地保護好卵子的發育潛能，同時還要選擇發育速度正常的健康胚胎移植，使輔助生殖技術更好地為人類造福。

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Analysis of growth speed of blastaea and clinical outcomes of different fertilization type

TANG Yongmei, WEI Jihong, WEI Lihong, MOU Lianjun, XU Lixiang, QIN Zuxing, TANG Ni

(Liuzhou maternal and child health hospital, Liuzhou 545001, Guangxi, China)

Abstract:Objective It is to explore the effect of different fertilization type on growth factor of blastaea and the effect of different speed on clinical outcomes. Methods The data of patients accepted blastaea culture and transplantation were retrospectively analyzed. They were divided into normal in vitro fertilization (IVF) group and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) group according to the fertilization. The production rate of blastaea in fresh culture stage, clinical pregnant rate after blastaea transplantation, implantation rate and transplantation outcome of different embryonic age of frozen-thawed embryo were observed, the implantation results of embryo with different growth speed between fresh culture stage and frozen-thawed stage were compared in both groups. Results When with the same D3 high qualified embryo rate, the production rate of blastaea and D5 production rate in IVF group were higher than that in ICSI group, there was no significant difference in clinical pregnant rate and implantation rate between fresh blastaea and frozen-thawed ones (P>0.05). The high qualified embryo rate, implantation rate and pregnant rate of blastaea in D5 were higher than that in the ones in D6(P<0.05).Conclusion Fertilization type could influence the growth speed of blastaea, IVF could increase the production rate of blastaea and D5 production rate; blastaea growth speed could influence clinical outcome of blastaea transplantation, D5 blastaea's pregnant rate and implantation rate were higher.

Key words:fertilization type; production rate of blastaea; pregnant rate; implantation rate

[收稿日期]2015-03-30

[中圖分類號]R711.6

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)08-0813-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.08.005

[基金項目]廣西壯族自治區衛生廳自籌經費科研課題(Z2013604)

[作者簡介]唐永梅，女，副主任醫師，在職研究生，研究方向為生殖醫學實驗室技術。