巨噬細胞移動抑制因子和血管內皮生長因子在食管癌組織中的表達情況及臨床意義

董媛媛，劉石萍，孔衛平，史延卿，王海利

(1. 河北省邯鄲市人民醫院，河北 邯鄲 056002；2. 河北省邯鄲市中心醫院，河北 邯鄲 056001；3. 河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056001)

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巨噬細胞移動抑制因子和血管內皮生長因子在食管癌組織中的表達情況及臨床意義

董媛媛1，劉石萍2，孔衛平3，史延卿2，王海利1

(1. 河北省邯鄲市人民醫院，河北 邯鄲 056002；2. 河北省邯鄲市中心醫院，河北 邯鄲 056001；3. 河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056001)

[摘要]目的研究巨噬細胞移動抑制因子(MIF)和血管內皮生長因子(VEGF)在食管鱗癌組織中的表達情況及臨床意義。方法選取食管鱗癌組織標本58例為研究對象，同時選取癌旁正常食管組織標本40份為正常對照，應用微波EliVisionTM免疫組織化學法檢測2組組織標本中MIF和VEGF的表達情況，并進行分析研究。結果在食管鱗癌組織中MIF和VEGF陽性表達率顯著高于癌旁正常食管組織(P均<0.05)，表達定位于細胞核和細胞質。兩者的表達情況與淋巴結轉移、分化程度及病理分期有明顯關系(P均<0.05)；相關性分析發現，MIF與VEGF呈正相關表達(P<0.05)。結論MIF和VEGF在食管鱗癌組織中陽性表達率高，二者表達情況在食管鱗癌的發生、發展和轉移過程中發揮不同的作用，臨床上檢測二者可為評估食管鱗癌惡性程度提供參考。

[關鍵詞]食管鱗癌組織；MIF蛋白；VEGF蛋白；EliVisionTM免疫組化

食管癌是比較多見的惡性腫瘤，其發病率居惡性腫瘤發病的第6位，病死率居惡性腫瘤死亡的第4位。食管鱗癌屬于最主要的食管癌病理類型，是目前食管癌的主要研究對象。考慮到因食管鱗癌的早期診斷比較困難，大多數患者出現臨床癥狀就診時已屬中、晚期，臨床亟待找到一種具有實用價值的解決方法。巨噬細胞移動抑制因子(MIF)在細胞增殖、凋亡等方面起著重要作用；血管內皮生長因子(VEGF)是血管新生的重要的促進因子，血管的形成是腫瘤生長、浸潤、轉移和侵襲的基礎。本研究分析了二者在食管癌黏膜組織中的表達水平變化及與臨床病理特征的關系，旨在為食管癌的早期發現、監測、預后的判斷,確定復發和轉移的風險提供依據。

1臨床資料

1.1一般資料選擇2011年1月—2013年12月邯鄲市人民醫院和邯鄲市中心醫院收治并存檔的58例食管鱗癌病例的蠟塊，男35例，女23例；年齡47～78歲，中位年齡63.6歲。由邯鄲市中心醫院高年資病理醫師按照WHO標準[1]對全部病例的切片進行復查，均確保病歷資料的準確性。并選取同期行食管鱗癌切除患者的食管上、下殘端40例作為正常食管黏膜組織進行對照。

1.2方法采用微波EliVisionTM法, 參照文獻[2-3]報道方法操作，陽性對照切片為已知陽性食管癌切片，陰性對照切片為PBS緩沖液代替一抗。試劑盒、二硝基聯苯胺(DAB)顯色液及兔抗人MIF單克隆抗體和兔抗人VEGF多克隆抗體均購自武漢博士德生物技術有限公司。

1.3結果判斷MIF陽性主要定位于細胞核，VEGF陽性表達則主要定位于細胞質，陽性信號以各種抗體在細胞核或胞漿內出現棕黃色顆粒為標準。隨機取每張切片的5個高倍視野(×400)，陽性細胞數<5%為(-)，5%～25%為(+)，>25%～50%為()，>50%為()。(～)為陽性表達。

1.4統計學方法采用SPSS 16.0統計軟件處理數據。計數資料采用2檢驗；相關性分析采用Pearson方法。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1MIF和VEGF在正常食管組織、食管鱗癌組織中的表達情況40例正常食管黏膜組織中MIF陽性表達4例(10%)，VEGF陽性表達7例(18%)；58例食管鱗癌組織中MIF陽性表達35例(62%)，VEGF陽性表達44例(76%)。2組MIF及VEGF陽性表達率比較差異均有統計學意義(P均<0.05)。MIF和VEGF在食管鱗癌組織中的表達情況見圖1和圖2。

圖1　MIF在食管鱗癌組織中的表達(×400)

2.2食管鱗癌中MIF和VEGF的表達與臨床病理指標的關系食管鱗癌中MIF和VEGF的表達與組織學分級、臨床病理分期、肌層浸潤深度以及淋巴結轉移有關(P均<0.05)。見表1。

2.3食管鱗癌組織中MIF和VEGF的相關性分析食管鱗癌組織中MIF和VEGF的表達呈明顯正相關(r=-3.233，P<0.05)。見表2。

圖2　VEGF在食管鱗癌組織中的表達(×400)

例

表2　MIF和VEGF在食管鱗癌組織中的表達相關性　例

3討論

MIF 是一種由活化T 細胞產生的細胞因子，是一種獨特的促進惡性腫瘤發生的細胞因子，可以抑制腫瘤微環境中巨噬細胞的游走， 參與多種細胞的生物學功能，如影響正常細胞的有絲分裂和惡性細胞增殖、黏附、血管生成和器官纖維化等，與多種惡性腫瘤的發生、進展、轉移及預后有密切關系。臨床上檢測發現MIF在正常人體血清中呈低水平表達，而在前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等[4-7]惡性腫瘤患者的血清中檢測到MIF呈過度表達。 研究證實MIF在腫瘤組織中的主要作用機制是誘導腫瘤血管生成和降解ECM及基底膜使其發展、浸潤，首先MIF誘導巨噬細胞增加金屬蛋白酶(MMPs)的分泌[8]，MMPs是降解腫瘤組織ECM及基底膜的必要步驟；接著參與腫瘤的血管新生過程，血管生成需要白細胞介素(IL)和組織生長因子等促血管生長因子的調控，MIF可以通過調控腫瘤細胞達到控制促血管生長因子分泌[9]。本研究結果顯示MIF在食管癌組織中表達水平明顯高于正常食管組織，說明MIF蛋白在食管鱗癌中的表達水平的增高參與了食管鱗癌的發生。進一步分析發現，在食管鱗癌組中MIF蛋白的表達與cTNM、分化程度和淋巴結轉移有關 ，其中淋巴結轉移組中差異較為明顯，提示MIF蛋白高表達在食管癌的浸潤、進展、發生轉移中發揮一定的促進作用，其作用機制印證MIF蛋白通過降解腫瘤組織ECM及基底膜和促進微血管形成等方面參與腫瘤轉移的各個環節。檢測其在食管鱗癌的水平高低有一定的臨床價值和實際意義。

腫瘤不管在轉移還是自身需要的營養均需要通道路徑提供運輸，其中新生的血管扮演著重要的角色。新生血管不僅為腫瘤生長提供所需的營養物質，還為癌細胞播散提供途徑。有研究發現VEGF和MMPs共同作用可以通過降解血管內皮細胞基質、降低血管屏障作用，使新生血管基底膜缺損加重[10]，并通過滲透作用，促進大量的癌細胞進入血液循環，從而在多種腫瘤的血管形成、浸潤、轉移中起關鍵作用[11]。檢測發現食管鱗癌患者血清中VEGF水平的升高[12]，反映出癌癥患者血清中VEGF水平升高從某種程度上促進癌組織的發展，為腫瘤的侵襲性生長提供了條件，在腫瘤血管新生過程中起到重要的作用。研究發現食管鱗癌組織中VEGF的表達水平與腫瘤分化、浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期有關[13]，本研究也得到了相同的結果，這些證據證實VEGF和腫瘤分化、TNM分期等密切相關，提示VEGF在食管癌發展、浸潤過程中發揮了一定作用。

本研究發現，MIF蛋白和VEGF蛋白表達呈正相關，表明兩種蛋白的高表達在食管癌的發生、發展、浸潤轉移過程中起到協同作用，MIF可能參與和促進腫瘤血管生成，腫瘤血管新生是依賴于多因子調節的病理過程，其中VEGF是最重要的調節途徑之一。MIF可能是通過上調VEGF的表達，進而刺激腫瘤血管新生或血管形成，從而促進腫瘤的浸潤和轉移。聯合檢測MIF及VEGF表達情況，有助于臨床對食管癌轉移及預后進行評估，值得臨床推廣。

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[收稿日期]2015-11-19

[中圖分類號]R735.1

[文獻標識碼]B

[文章編號]1008-8849(2016)12-1331-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.12.028